臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法1

1、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法第一章 總 則第一條 為規(guī)范臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理，保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量，使臨床診斷和治療更為科學(xué)、合理，特制定本辦法。第二條 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)指以臨床診斷治療為目的，以擴(kuò)增檢測(cè)DNA或RNA為方法的檢測(cè)技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的放大系統(tǒng)（TAS）自主序列復(fù)制系統(tǒng)（3SR）和鏈替代擴(kuò)增（SDA）等。第三條 本辦法適用于開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)立在二級(jí)以上醫(yī)院。第四條 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須使用經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的臨床檢驗(yàn)試劑開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。第五條 衛(wèi)生部臨床檢

2、驗(yàn)中心（以下簡(jiǎn)稱衛(wèi)生部臨檢中心）和省、自治區(qū)、直轄市臨床檢驗(yàn)中心（以下簡(jiǎn)稱省臨檢中心）負(fù)責(zé)對(duì)所轄行政區(qū)域內(nèi)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量監(jiān)督管理工作。第二章 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置和驗(yàn)收第六條 擬設(shè)置臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)療機(jī)構(gòu)按照臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)（見附件）籌建實(shí)驗(yàn)室；籌建完成后，由法定代表人向衛(wèi)生部臨檢中心提出技術(shù)驗(yàn)收申請(qǐng)。申請(qǐng)時(shí)需提交以下材料：（一）醫(yī)療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證復(fù)印件；（二）可行性研究報(bào)告；1、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室機(jī)構(gòu)的所在地醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、本機(jī)構(gòu)的基本情況、對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的需求以及臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的預(yù)測(cè)分析；2、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置平面圖；

3、3、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室將開展的檢驗(yàn)項(xiàng)目、實(shí)驗(yàn)設(shè)備條件和有關(guān)技術(shù)人員資料第七條 衛(wèi)生部臨檢中心和省臨檢中心共同組織相關(guān)專業(yè)的專家組（以下簡(jiǎn)稱專家組），按照臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)對(duì)提出申請(qǐng)的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行技術(shù)驗(yàn)收。驗(yàn)收完成后，在20日內(nèi)將驗(yàn)收?qǐng)?bào)告寄送至申請(qǐng)機(jī)構(gòu)。第八條 經(jīng)專家組技術(shù)驗(yàn)收合格的醫(yī)療機(jī)構(gòu)將本辦法第六條規(guī)定的材料及專家組驗(yàn)收?qǐng)?bào)告送至省級(jí)行政部備案。在將符合規(guī)定的全部材料送達(dá)省級(jí)衛(wèi)生行政部門后15日內(nèi)未收到省級(jí)衛(wèi)生行政部門不同意的意見，方可開展專家組技術(shù)驗(yàn)收合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。第九條 未經(jīng)專家組驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門備案的醫(yī)療機(jī)構(gòu)不得擅自開展

4、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。第三章 實(shí)驗(yàn)室監(jiān)督管理第十條 臨床基因檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須按照臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范（另發(fā)）開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)工作。第十一條 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn)。經(jīng)培訓(xùn)合格者，由培訓(xùn)單位發(fā)給合格證書，并將培訓(xùn)合格人員名單報(bào)衛(wèi)生部臨檢中心備案。獲得培訓(xùn)合格證書者方可從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)工作。培訓(xùn)單位為衛(wèi)生部臨檢中心，或由省級(jí)衛(wèi)生行政部門指定并經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心認(rèn)定的機(jī)構(gòu)。培訓(xùn)時(shí)使用規(guī)定的統(tǒng)一教材。第十二條 以科研為目的的基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。不得向臨床出具檢驗(yàn)報(bào)告，不得向病人收取任何費(fèi)用。第十三條 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須按照臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范開展室內(nèi)質(zhì)

5、量控制，并參加衛(wèi)生部臨檢中心組織的室內(nèi)質(zhì)量評(píng)價(jià)。第十四條 衛(wèi)生部臨檢中心按照本方法和臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范協(xié)調(diào)、組織省臨檢中心對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。監(jiān)測(cè)結(jié)果報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門，同時(shí)抄送被監(jiān)測(cè)的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室所在醫(yī)療機(jī)構(gòu)。第十五條 衛(wèi)生部臨檢中心或省級(jí)臨檢中心受省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門委托可對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢查，現(xiàn)場(chǎng)檢查工作人員在履行職責(zé)時(shí)應(yīng)出示證件。在進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢查時(shí)，檢查人員有權(quán)調(diào)閱有關(guān)資料，被檢查機(jī)構(gòu)不得拒絕或隱瞞。第十六條 衛(wèi)生部臨檢中心對(duì)在室間質(zhì)量評(píng)價(jià)中不合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室提出警告，對(duì)連續(xù)二次或三次中有二次發(fā)現(xiàn)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)結(jié)果不

6、合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，衛(wèi)生部臨檢中心報(bào)省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門由省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門責(zé)令其暫停有關(guān)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目，限期整改。經(jīng)專家組進(jìn)行再次技術(shù)驗(yàn)收并合格，并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門核準(zhǔn)后，方可重新開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。第十七條 對(duì)于未經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組技術(shù)驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生部門備案，擅自開展臨床基因檢驗(yàn)項(xiàng)目的醫(yī)療機(jī)構(gòu)，由省級(jí)衛(wèi)生行政部門依據(jù)醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例第四十七條和醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例實(shí)施細(xì)則第八十條予以處罰，并予以公告。公告所需費(fèi)用由被公告機(jī)構(gòu)支付。第十八條 出現(xiàn)下列情況之一的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，由省級(jí)衛(wèi)生行政部門責(zé)令其停止開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)，并對(duì)其所在醫(yī)療機(jī)構(gòu)予以

7、公告。公告所需費(fèi)用由被公告機(jī)構(gòu)支付：（一） 開展超出衛(wèi)生部臨檢中心組織的技術(shù)驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門備案 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目的；（二） 使用未經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的試劑開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的；（三） 在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中未開展室內(nèi)質(zhì)量控制的；（四） 在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中未參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的；（五） 在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中弄虛作假的；（六） 以科研為目的的基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目向病人收取費(fèi)用的；（七） 使用未經(jīng)培訓(xùn)合格的專業(yè)技術(shù)人員從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的；第四章 附 則第十九條 對(duì)采供血機(jī)構(gòu)的基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室開展基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目的管理，參照本辦法執(zhí)行。第二十條 衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組對(duì)申

8、請(qǐng)開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行技術(shù)驗(yàn)收所需費(fèi)用按國(guó)家有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。第二十一條 本辦法由衛(wèi)生部負(fù)責(zé)解釋。第二十二條 本辦法自發(fā)布之日起施行。附：臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)臨床檢驗(yàn)擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法，制定本標(biāo)準(zhǔn)一、 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則（一） 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則1、 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)2、 標(biāo)本制備區(qū)3、 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)4、 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)如使用全自動(dòng)分析儀，區(qū)域可適當(dāng)合并。（二） 各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。（三） 進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū) 標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增反應(yīng)混合

9、物配制和擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。（四） 不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時(shí)，不得將工作服帶出。二、 工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)（一） 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)1、2-8C和-15C冰箱2、混勻器3、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）4、移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）5、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）6、專用工作服和工作鞋7、專用辦公用品（二） 標(biāo)本制備區(qū)1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱2、高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)3、混允器4、水浴箱或加熱模塊5、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）6、可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）7、超凈工作臺(tái)8、

10、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）9、專用工作服和工作鞋10、專用辦公用品如需處理大分子DNA，應(yīng)具有超聲波水浴儀。（三） 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)1、 核酸擴(kuò)增儀2、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul）3、 可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）4、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）5、 專用工作服和工作鞋6、 專用辦公用品(四)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)視檢驗(yàn)方法不同而定。基本儀器設(shè)備如下：1、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul）2、 可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）3、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）4、 專用

11、工作服和工作鞋5、 專用辦公用品如何迎接臨臨床基因因擴(kuò)增檢檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室技術(shù)術(shù)驗(yàn)收20033年華東東區(qū)臨床床檢驗(yàn)中中心協(xié)作作組臨床床實(shí)驗(yàn)室室質(zhì)量管管理及新新技術(shù)應(yīng)應(yīng)用高級(jí)級(jí)研討會(huì)會(huì)臨床基因擴(kuò)擴(kuò)增檢驗(yàn)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室室主要應(yīng)應(yīng)用把PPCR（聚聚合酶鏈鏈反應(yīng)）技技術(shù)應(yīng)用用于疾病病的診斷斷與治療療監(jiān)測(cè)。PPCR技技術(shù)發(fā)明明是生物物醫(yī)學(xué)領(lǐng)領(lǐng)域的一一項(xiàng)革命命性創(chuàng)舉舉，具有有深遠(yuǎn)歷歷史意義義，但在在上世紀(jì)紀(jì)九十年年代中國(guó)國(guó)，在我我國(guó)由于于部分醫(yī)醫(yī)部機(jī)構(gòu)構(gòu)受利益益的驅(qū)動(dòng)動(dòng)，在缺缺乏技術(shù)術(shù)、設(shè)備備以及規(guī)規(guī)范化管管理的情情況下，PPCR技技術(shù)臨床床應(yīng)用泛泛濫，出出現(xiàn)大量量假陽(yáng)性性和假陰陰性結(jié)果果，甚至至出現(xiàn)虛虛假檢測(cè)測(cè)報(bào)

12、告，造造成檢驗(yàn)驗(yàn)結(jié)果和和臨床意意義應(yīng)用用十分混混亂，嚴(yán)嚴(yán)重?cái)_亂亂正常醫(yī)醫(yī)療秩序序，特別別在性病病基因檢檢測(cè)方面面，甚至至還帶來(lái)來(lái)一系列列道德倫倫理、家家庭糾紛紛以及社社會(huì)和法法律問題題。PCCR技術(shù)術(shù)臨床應(yīng)應(yīng)用所出出現(xiàn)的一一系列問問題引起起衛(wèi)生部部管理層層高度重重視，衛(wèi)衛(wèi)生部醫(yī)醫(yī)政司于于19888年下下發(fā)了衛(wèi)衛(wèi)醫(yī)發(fā)1999899號(hào)文件件宣布PPCR技技術(shù)暫停停應(yīng)用于于臨床診診斷。經(jīng)經(jīng)過近四四年反復(fù)復(fù)論證，衛(wèi)衛(wèi)生部220022年1月月14日日發(fā)布“臨床基基因擴(kuò)增增檢驗(yàn)實(shí)實(shí)驗(yàn)室管管理暫行行辦法”，同年年2月220日衛(wèi)衛(wèi)生部臨臨床檢驗(yàn)驗(yàn)中心發(fā)發(fā)布“臨床基基因擴(kuò)增增實(shí)驗(yàn)室室工作規(guī)規(guī)范”。兩個(gè)個(gè)文件宣宣

13、布了PPCR技技術(shù)臨床床應(yīng)用解解凍，明明確規(guī)定定臨床基基因擴(kuò)增增檢驗(yàn)實(shí)實(shí)驗(yàn)室開開展PCCR技術(shù)術(shù)必需具具備的基基本條件件：規(guī)范的的PCRR實(shí)驗(yàn)室室編寫適適合本實(shí)實(shí)驗(yàn)室的的質(zhì)量手手冊(cè)經(jīng)PCCR專業(yè)業(yè)知識(shí)培培訓(xùn)的技技術(shù)人員員（PCCR上崗崗證）使用有有生產(chǎn)批批文的PPCR試試劑。具具備條件件的二級(jí)級(jí)以上醫(yī)醫(yī)院可向向衛(wèi)生部部或省臨臨床檢驗(yàn)驗(yàn)中心申申請(qǐng)技術(shù)術(shù)驗(yàn)收。 本本人作為為通過衛(wèi)衛(wèi)生部臨臨床檢驗(yàn)驗(yàn)中心驗(yàn)驗(yàn)收的臨臨床基因因擴(kuò)增檢檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室一名名實(shí)驗(yàn)室室工作人人員，同同時(shí)也作作為專家家多次參參與衛(wèi)生生部臨床床檢驗(yàn)中中心組織織的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室驗(yàn)收收，就臨臨床基因因擴(kuò)增實(shí)實(shí)驗(yàn)室技技術(shù)驗(yàn)收收的前期期準(zhǔn)備工工作和

14、現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)術(shù)驗(yàn)收整整個(gè)過程程作一簡(jiǎn)簡(jiǎn)單介紹紹，并談?wù)務(wù)劚救巳梭w會(huì)。一、為什么要進(jìn)行臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)增收 臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室采用PCR技術(shù)用于臨床基因診斷，由于PCR技術(shù)對(duì)所檢測(cè)的核酸模板進(jìn)行大量擴(kuò)增，容易出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室污染導(dǎo)致臨床檢測(cè)標(biāo)本假陽(yáng)性結(jié)果；另外由于PCR技術(shù)要求高、影響因素多（特別是RNA標(biāo)本），實(shí)驗(yàn)過程處理不當(dāng)易導(dǎo)致核酸模板無(wú)擴(kuò)增現(xiàn)象，導(dǎo)致臨床標(biāo)本假陰性結(jié)果。因此臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收和規(guī)范化管理是PCR技術(shù)本身需要，也是在臨床上順利應(yīng)用該技術(shù)前提。二、PCR實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收準(zhǔn)備工作（一）硬件準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)室基本建設(shè)1.根據(jù)文件要求，臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作

15、區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)；標(biāo)本制備區(qū)；擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)；擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，如使用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測(cè)，此區(qū)域可不設(shè)。2.各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。3.進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一流向進(jìn)行，即試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。4.不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時(shí)，不得將工作服帶出。5.工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)（1）試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū) 28和-15冰箱：混勻器；微量加樣器（覆蓋11000l）；移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭

16、（帶濾心）；專用工作服和工作鞋；專用辦公用品等。（2）標(biāo)本制備區(qū) 28冰箱，-20或-80冰箱；高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)；混勻器；水浴箱或加熱模塊；微量加樣器（覆蓋11000l）；可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）；超凈工作臺(tái)，消耗品；一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）；專用工作服和工作鞋；專用辦公用品等。（3）擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū) 核酸擴(kuò)增儀；微量加樣器（覆蓋11000l）；可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）；專用工作服和工作鞋；專用辦公用品等。（4）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū) 視檢測(cè)方法不同而定?；緝x器設(shè)備如

17、下：微量加樣器（覆蓋1200l）；可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）；專用工作服和工作鞋；專用辦公用品等。（二）軟件建設(shè)質(zhì)量手冊(cè)編寫與實(shí)施、人才資源（上崗證培訓(xùn)與相關(guān)知識(shí)學(xué)習(xí)）1.臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量手冊(cè)編寫 質(zhì)量手冊(cè)是闡明臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量方針，并描述過其質(zhì)量體系的文件。質(zhì)量手冊(cè)規(guī)定了質(zhì)量體系的基本結(jié)構(gòu)，是實(shí)施和保持質(zhì)量體系應(yīng)長(zhǎng)期遵循的文件。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊(cè)編寫應(yīng)依照衛(wèi)生部下發(fā)兩個(gè)文件，并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況編寫適合本實(shí)驗(yàn)室的切實(shí)可行的質(zhì)量手冊(cè)。質(zhì)量手冊(cè)的提綱應(yīng)包括三部分：質(zhì)量方針和宗旨；工作

18、制度；標(biāo)準(zhǔn)操作文件（SOP）（1）質(zhì)量方針和宗旨 制定臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理目標(biāo)和質(zhì)量保證體系的結(jié)構(gòu)體系和總方針。（2）工作制度 一般應(yīng)包括以下文件：實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置、布局及組織結(jié)構(gòu)；實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度；實(shí)驗(yàn)室的人員配置及管理制度；生物的防護(hù)與安全制度；實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理制度；實(shí)驗(yàn)室清潔消毒制度；儀器設(shè)備的管理制度；儀器、試劑、耗材購(gòu)置程序及管理制度；臨床標(biāo)本的管理制度；實(shí)驗(yàn)室記錄的管理制度；質(zhì)量控制工作管理制度；結(jié)果報(bào)告管理制度；抱怨的內(nèi)部處理制度；負(fù)責(zé)人及質(zhì)檢員職責(zé)；崗位設(shè)置和責(zé)任制等（3）標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP） 一般包括：消毒液配制標(biāo)準(zhǔn)操作程序：消毒標(biāo)準(zhǔn)操作程序；超凈工作臺(tái)使用標(biāo)準(zhǔn)操

19、作程序；超凈工作臺(tái)維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作文件；PCR儀使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序；PCR儀維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序；高速低溫離心機(jī)使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序；移液器使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序；冰箱維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序；電熱恒溫水浴箱操作程序；電子天平使用和校正操作程序；可移動(dòng)紫外消毒車使用操作程序；加樣器校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序；離心機(jī)維護(hù)保養(yǎng)操作程序；溫度計(jì)校準(zhǔn)程序；試劑的質(zhì)檢操作程序；標(biāo)本唯一標(biāo)識(shí)編號(hào)編制規(guī)則；臨床標(biāo)本的采集及處理操作程序；臨床標(biāo)本的保存程序；乙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序；丙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序；結(jié)核分枝桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序；沙眼衣原體核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序等（4）引用圖表：

20、PCR擴(kuò)增可接受標(biāo)本記錄表；PCR擴(kuò)增拒收標(biāo)本記錄表；室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果記錄表；室間質(zhì)控記錄表；消耗性材料驗(yàn)收記錄表；試劑驗(yàn)收記錄表；故障處理表；臺(tái)階式高速離心機(jī)使用記錄表；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)使用記錄表；擴(kuò)增儀維護(hù)保養(yǎng)記錄表；人員培訓(xùn)計(jì)劃及培訓(xùn)記錄表；實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表；主要設(shè)備一覽表；實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表；工作區(qū)溫度、濕度記錄表；抱怨記錄表；標(biāo)本超低溫保存記錄表；應(yīng)急處理記錄表；垃圾處理記錄表；冰箱溫度記錄表；水浴箱溫度記錄表；移動(dòng)紫外消毒車記錄表；設(shè)備校正記錄表；檢測(cè)結(jié)果報(bào)告流程；報(bào)告單樣張；臨床送檢標(biāo)本流程圖；實(shí)驗(yàn)室組織結(jié)構(gòu)圖。三、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收申請(qǐng)（1）填寫臨床擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)

21、室技術(shù)驗(yàn)收申請(qǐng)表（a）基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本情況 包括檢驗(yàn)科基本情況特別是基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本運(yùn)行情況，必要性與可行性，著重分析開展項(xiàng)目運(yùn)行情況、人員配置現(xiàn)狀、內(nèi)部質(zhì)量管理體系執(zhí)行情況與效果分析。（b）應(yīng)提供資料醫(yī)療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證； 擬設(shè)置基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室醫(yī)院的醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的需求情況以及實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的預(yù)測(cè)分析； 擬設(shè)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置平面圖； 實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡(jiǎn)歷表； 實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表（附實(shí)驗(yàn)室工作人員簡(jiǎn)歷）； 主要儀器設(shè)備表； 擬開展的臨床基因診斷項(xiàng)目； 臨床基因診斷質(zhì)量手冊(cè)； 檢驗(yàn)報(bào)告單2份。（c）希望驗(yàn)收時(shí)間 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室建設(shè)進(jìn)展情況和試運(yùn)行進(jìn)展，提出

22、大致的現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)驗(yàn)收時(shí)間。（d）聲明 志愿申請(qǐng)，承擔(dān)兩義務(wù)：遵守臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法和臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范及有關(guān)規(guī)定；不論能否獲準(zhǔn)通過驗(yàn)收，預(yù)付驗(yàn)收階段的全部費(fèi)用。（2）衛(wèi)生部或省臨床檢驗(yàn)中心預(yù)審 對(duì)申報(bào)文件和現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行預(yù)驗(yàn)收，初步確定是否進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)驗(yàn)收和驗(yàn)收時(shí)間。四、現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)驗(yàn)收衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)任務(wù)書現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)專家組成員組成技術(shù)驗(yàn)收工作日程表驗(yàn)收組預(yù)備會(huì)首次會(huì)議現(xiàn)場(chǎng)驗(yàn)收實(shí)驗(yàn)室設(shè)置及儀器設(shè)備配備情況實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件有關(guān)記錄現(xiàn)場(chǎng)考核現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)驗(yàn)收組全體會(huì)議擬定驗(yàn)收結(jié)論和驗(yàn)收?qǐng)?bào)告末次會(huì)議驗(yàn)收組宣布驗(yàn)收結(jié)論實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人講話.臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收體會(huì)（

23、）對(duì)驗(yàn)收文件的學(xué)習(xí)不夠、理解不深，導(dǎo)致編制程序性文件偏離，應(yīng)對(duì)照驗(yàn)收要求逐條落實(shí)，切實(shí)可行。（）目的性認(rèn)識(shí)不足： 受老觀念的影響，總以為實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收準(zhǔn)備工作是為專家而準(zhǔn)備的，沒意識(shí)到這是本實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量的內(nèi)在需要，以為只要通過專家現(xiàn)場(chǎng)驗(yàn)收，拿到合格證書就萬(wàn)事大吉了。（）質(zhì)量控制意識(shí)不強(qiáng) 我們編寫的質(zhì)量手冊(cè)的目的是規(guī)范實(shí)驗(yàn)操作整個(gè)過程，做到實(shí)驗(yàn)過程有章可循，實(shí)驗(yàn)記錄有據(jù)可查，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。由于基因擴(kuò)增技術(shù)特殊性，即使嚴(yán)格按質(zhì)量手冊(cè)進(jìn)行操作，也難免出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果，因此還應(yīng)該強(qiáng)化質(zhì)量控制意識(shí)。實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)格設(shè)置質(zhì)控標(biāo)本，包括試劑空白對(duì)照、陰性標(biāo)本對(duì)照、臨界值陽(yáng)性標(biāo)本對(duì)照等，分別監(jiān)測(cè)試

24、劑配制與加樣過程中是否存在污染？標(biāo)本核酸模板提取過程中是否存在污染？標(biāo)本檢測(cè)過程中是否存在假陰性結(jié)果和結(jié)果是否準(zhǔn)確？等。但有些醫(yī)院由于考慮到各種實(shí)際問題而沒有很好落實(shí)，應(yīng)引起高度重視。（4）程序文件實(shí)施難問題 在許多醫(yī)院，由于基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室是目前大多檢驗(yàn)科唯一通過實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收的實(shí)驗(yàn)室，可能受周邊其他實(shí)驗(yàn)室不規(guī)范行為的干擾和存在人員配備方面問題，可能出現(xiàn)文件落實(shí)方面問題，特別是原始標(biāo)本的接收和記錄方面。（5）工作量少影響質(zhì)量保證體系實(shí)施 嚴(yán)格按臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求通過驗(yàn)收的實(shí)驗(yàn)室，存在一定運(yùn)行成本，需要有一定臨床標(biāo)本量的支持；如果某一醫(yī)院醫(yī)療資源不足，標(biāo)本來(lái)源不足以支持運(yùn)行成本時(shí)

25、，就會(huì)想方設(shè)法去減少運(yùn)行成本（包括試劑成本和勞務(wù)成本），導(dǎo)致檢驗(yàn)質(zhì)量難以得到保證。因此建議欲建立臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的單位，應(yīng)充分考慮自己醫(yī)療資源情況，確定是自己建立臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室合算？還是外送標(biāo)本合算？。同時(shí)衛(wèi)生部和省臨床檢驗(yàn)中心在初審應(yīng)充分考慮這方面情況，以及現(xiàn)場(chǎng)驗(yàn)收專家應(yīng)嚴(yán)加把關(guān)質(zhì)量管理的的歷史1950年年代臨床床實(shí)驗(yàn)室室開始質(zhì)質(zhì)量控制制（Quualiity Conntrool,QQC）;19880年代代參照工工業(yè)的GGMP管管理思路路建立良良好實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室實(shí)踐踐準(zhǔn)則（GGoodd Laaborratoory Praactiice,GLPP）；進(jìn)進(jìn)入質(zhì)量量保證（QQuallityy

26、 asssurrancce,QQA）；19990年代代實(shí)驗(yàn)室室引入質(zhì)質(zhì)量體系系認(rèn)證及及實(shí)驗(yàn)室室認(rèn)可制制度，實(shí)實(shí)現(xiàn)全面面質(zhì)量管管理（TTQM，TTotaal QQuallityy Maanaggemeent）。質(zhì)質(zhì)量體系系認(rèn)證ISSO90000（220000版）；實(shí)驗(yàn)室室認(rèn)可ISSO/IIEC標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)1770255-20000校校準(zhǔn)和檢檢測(cè)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室資格格的通用用要求；ISOO/DIIS標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)151189-19999“醫(yī)學(xué)實(shí)實(shí)驗(yàn)室的的質(zhì)量管管理?！?美美國(guó)臨床床實(shí)驗(yàn)室室認(rèn)證發(fā)證機(jī)機(jī)構(gòu)：HHCFAA（Heealtth GGaree Fiinanncinng AAdmiinisstraatioons）,

27、衛(wèi)生保保健署認(rèn)證依依據(jù)，CCLOAA38，行行業(yè)認(rèn)可可，強(qiáng)制制，體系系+能力力認(rèn)證中中介機(jī)構(gòu)構(gòu)：*JJCAHHO（JJoinnt CCommmisssionn onn Acccreedittatiion of Heaalthhcarre OOrgaanizzatiionss）衛(wèi)生生機(jī)構(gòu)認(rèn)認(rèn)可聯(lián)合合委員會(huì)會(huì)*CAAP(CColllegee off Ammeriicann Paathoologgistt)美國(guó)國(guó)病理家家學(xué)會(huì)*COLLA（CCommmisssionn onn Offficce LLaboorattoryy Acccreed-iitattionn）醫(yī)生生實(shí)驗(yàn)室室認(rèn)可委委員會(huì)33我國(guó)國(guó)實(shí)

28、驗(yàn)室室合格評(píng)評(píng)定認(rèn)可*依依據(jù)：IISO/IECC 1770255，1551899*國(guó)家家評(píng)審，自自愿，體體系+能能力認(rèn)證*依依據(jù)：IISO 90000：220000版*中中介機(jī)構(gòu)構(gòu)，自愿愿，體系系行業(yè)技技術(shù)驗(yàn)收收*臨臨床實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室管理理辦法，江江蘇省醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)驗(yàn)科建設(shè)設(shè)與管理理規(guī)范*省、市臨床檢驗(yàn)中心，強(qiáng)制，體系+能力4PCR驗(yàn)收意義及驗(yàn)收依據(jù) 2002年開始的PCR實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收工作開創(chuàng)臨床檢驗(yàn)技術(shù)準(zhǔn)入的先河、推動(dòng)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)、規(guī)范檢測(cè)市場(chǎng)、建立醫(yī)療事故預(yù)防機(jī)制。其依據(jù)為：臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法衛(wèi)醫(yī)發(fā)200210號(hào)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范衛(wèi)檢字20028號(hào)關(guān)于成立臨床基因

29、擴(kuò)增檢驗(yàn)專家組的通知蘇衛(wèi)醫(yī)200242號(hào)5規(guī)定應(yīng)具有的SOP（13個(gè)）儀器設(shè)備的的維護(hù)保保養(yǎng)程序序、儀器器設(shè)備的的校準(zhǔn)程程序、儀儀器設(shè)備備的操作作程序、臨臨床標(biāo)本本收集程程序、臨臨床標(biāo)本本的處理理（核酸酸純化）程程序、臨臨床標(biāo)本本的保存存程序、試試劑的質(zhì)質(zhì)檢操作作程序、消消耗品購(gòu)購(gòu)置驗(yàn)收收和儲(chǔ)存存程序、廢廢棄物的的處理程程序、內(nèi)內(nèi)務(wù)管理理程序、室室內(nèi)質(zhì)量量控制程程序、核核酸擴(kuò)增增及產(chǎn)物物分析檢檢測(cè)的操操作程序序、抱怨怨處理程程序。66質(zhì)量量管理體體系6.1定定義 在質(zhì)質(zhì)量方面面指揮和和控制組組織的管管理體系系。（QQuallityy Maanaggemeent Sysstemm）管理理體系是是

30、指建立立方針和和目標(biāo)并并實(shí)現(xiàn)這這些目標(biāo)標(biāo)的體系系。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室通過過把組織織機(jī)構(gòu)、職職責(zé)、工工作程序序、質(zhì)量量活動(dòng)過過程和各各類資源源、信息息等協(xié)調(diào)調(diào)統(tǒng)一起起來(lái)所形形成的有有機(jī)整體體即為實(shí)實(shí)驗(yàn)室的的質(zhì)量體體系。66.2質(zhì)量體體系的文文件構(gòu)成成第一一層：質(zhì)質(zhì)量手冊(cè)冊(cè)（綱領(lǐng)領(lǐng)性文件件）；第第二層：程序性性文件（體體系要素素的規(guī)定定）；第第三層：作業(yè)指指導(dǎo)書（具具體項(xiàng)目目的操作作指導(dǎo)）；第四層層：記錄錄包括表表格、簽簽名、原原始記錄錄、報(bào)告告等質(zhì)量量記錄和和技術(shù)記記錄。66.3質(zhì)量手手冊(cè)定義義 GBB/T665833定義：質(zhì)量手手冊(cè)是闡闡明一個(gè)個(gè)實(shí)驗(yàn)室室的質(zhì)量量方針，并并描述質(zhì)質(zhì)量體系系的文件件。它既既

31、是質(zhì)量量體系的的表征形形式，又又是質(zhì)量量體系建建立和運(yùn)運(yùn)行的綱綱領(lǐng)。它它對(duì)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室的組組織結(jié)構(gòu)構(gòu)（含職職責(zé)）、程程序、活活動(dòng)能力力（過程程）和資資源作出出規(guī)定，是是實(shí)驗(yàn)室室長(zhǎng)期遵遵循的文文件。66.4質(zhì)量手手冊(cè)的分分類 根根據(jù)手冊(cè)冊(cè)的內(nèi)容容和用途途分為二二類：質(zhì)質(zhì)量保證證手冊(cè)用于于證明，供供客戶使使用，質(zhì)質(zhì)量管理理手冊(cè)用于于運(yùn)行，供供實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)部使使用。66.5質(zhì)量手手冊(cè)的作作用 編編寫質(zhì)量量手冊(cè)的的健全和和完善質(zhì)質(zhì)量體系系的首要要環(huán)節(jié)。根根據(jù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室的內(nèi)內(nèi)外因素素合理調(diào)調(diào)整、選選擇體系系要素，分分配和落落實(shí)質(zhì)量量職責(zé)，理理順管理理關(guān)系，明明確管理理責(zé)任，合合理安排排各類文文件的層層次，把把實(shí)

32、驗(yàn)室室積累的的經(jīng)驗(yàn)變變成法規(guī)規(guī)性文件件。協(xié)調(diào)調(diào)各工作作環(huán)節(jié)的的準(zhǔn)則。 內(nèi)部質(zhì)量審核的依據(jù)；對(duì)外證實(shí)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量保證能力，提高客戶的信任度。6.6質(zhì)量手冊(cè)的特征以客戶為關(guān)注焦點(diǎn)：以病人為中心，為臨床服務(wù)領(lǐng)導(dǎo)作用：創(chuàng)造使員工能夠充分參與實(shí)現(xiàn)目標(biāo)的環(huán)境全員參與：各負(fù)其責(zé)過程方法：將資源和活動(dòng)作為過程進(jìn)行有效管理管理的系統(tǒng)方法：各個(gè)過程的有效連接持續(xù)改進(jìn)：根據(jù)實(shí)際不斷完善基于事實(shí)的決策方法：遵循科學(xué)，實(shí)事求是出報(bào)告與供方互利的關(guān)系：相互協(xié)作，共同獲利6.7質(zhì)量手冊(cè)的結(jié)構(gòu)封面批準(zhǔn)頁(yè)：包括實(shí)驗(yàn)室名稱、標(biāo)志，發(fā)行版次，生效日期，批準(zhǔn)人簽名，手冊(cè)編號(hào)，受控狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)室公正性聲明修訂頁(yè)：以表格描述修訂序號(hào)、修訂

33、的章節(jié)條款和簡(jiǎn)要內(nèi)容、批準(zhǔn)人及日期。目錄：各章節(jié)條款的名稱及頁(yè)碼前言：介紹實(shí)驗(yàn)室的一般情況和手冊(cè)的適用范圍以及手冊(cè)中術(shù)語(yǔ)或縮略語(yǔ)的定義手冊(cè)的管理：對(duì)手冊(cè)的保存、分發(fā)、評(píng)審、修訂以及保密作出規(guī)定質(zhì)量方針及目標(biāo)組織結(jié)構(gòu)及人員責(zé)權(quán)利關(guān)系要素描述：由系列SOP文件對(duì)溯源、人、機(jī)、料、樣、法、測(cè)等質(zhì)量諸要素的陳述支持性文件：包括實(shí)驗(yàn)室平面圖、人員一覽表、儀器設(shè)備一覽表、引用標(biāo)準(zhǔn)及參考文獻(xiàn)等6.8標(biāo)準(zhǔn)操作程序Standard Operational Procedure,簡(jiǎn)稱SOP。程序的定義為：為進(jìn)行某項(xiàng)活動(dòng)所規(guī)定的途徑。SOP是臨床實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部以文件的形式對(duì)質(zhì)量活動(dòng)用規(guī)定的方法進(jìn)行連續(xù)而恰當(dāng)?shù)目刂啤?shí)驗(yàn)室

34、的SOP應(yīng)涵蓋所有的質(zhì)量活動(dòng)，包括檢測(cè)或校準(zhǔn)計(jì)劃、管理性程序、技術(shù)性程序、項(xiàng)目操作程序和記錄表格等。由于影響每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量活動(dòng)的條件和因素不一樣，一個(gè)SOP只在某個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)有效，而不一定適用于其他實(shí)驗(yàn)室。6.9標(biāo)準(zhǔn)操作程序的一般要求對(duì)完成各項(xiàng)質(zhì)量活動(dòng)的方法作出規(guī)定，每個(gè)SOP都應(yīng)對(duì)一個(gè)或一組相互關(guān)系的活動(dòng)進(jìn)行描述；每個(gè)SOP應(yīng)說明該項(xiàng)質(zhì)量各環(huán)節(jié)的輸入、轉(zhuǎn)換和輸出所需的文件、物資、人員、記錄以及它們與有關(guān)活動(dòng)的接口關(guān)系；規(guī)定開展質(zhì)量活動(dòng)的各個(gè)環(huán)節(jié)的物資、人員、信息和環(huán)境等方面應(yīng)具備的條件；明確每個(gè)環(huán)節(jié)轉(zhuǎn)換過程中各項(xiàng)因素的要求，即由誰(shuí)做、做什么、做到什么程序、達(dá)到什么要求，如何控制、形成什么記錄

35、和報(bào)告，以及相應(yīng)的審批手續(xù)；規(guī)定在質(zhì)量活動(dòng)中需要注意的例外或特殊情況的糾正措施；SOP應(yīng)簡(jiǎn)練、明確和易懂并且工作人員熟練掌握和嚴(yán)格遵守。6.10推薦PCR實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊(cè)目錄1.質(zhì)量方針和宗旨2.工作制度2.1實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置、布局及組織結(jié)構(gòu)2.2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度2.3實(shí)驗(yàn)室的人員配置及管理制度2.4生物防護(hù)與安全制度2.5實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理制度2.6實(shí)驗(yàn)室清潔消毒制度2.7儀器設(shè)備的管理制度2.8儀器、試劑、耗材購(gòu)置程序及管理制度2.9臨床標(biāo)本的管理制度2.10實(shí)驗(yàn)室記錄的管理制度2.11質(zhì)量控制工作管理制度2.12結(jié)果報(bào)告管理制度2.13崗位責(zé)任制2.14抱怨制度3.操作指導(dǎo)書（SOP）3.1消

36、毒標(biāo)準(zhǔn)操作程序3.2超凈工作臺(tái)使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序3.3超凈工作臺(tái)維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序3.4PCR儀使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序3.5 PCR儀維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序3.6臺(tái)式離心機(jī)使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序3.7 高速冷凍離心操作標(biāo)準(zhǔn)操作程序3.8 移液器使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序3.9 加樣器校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序3.10 冰箱維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序3.11 電熱恒溫水浴箱操作程序3.12 電子天平使用和校正操作程序3.13 可移動(dòng)紫外消毒車使用操作程序3.14 溫度計(jì)校準(zhǔn)程序3.15 試劑的質(zhì)檢操作程序3.16 標(biāo)本唯一標(biāo)識(shí)編號(hào)編制規(guī)則3.17 臨床標(biāo)本的采集及處理操作程序3.18 臨床標(biāo)本的保存程序3.19 乙肝病毒核酸擴(kuò)增

37、熒光檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序3.20 室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序3.21 室間質(zhì)評(píng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序4.引用圖表4.1 實(shí)驗(yàn)室組織結(jié)構(gòu)圖4.2 實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表4.3 人員培訓(xùn)計(jì)劃及培訓(xùn)記錄表4.4 主要儀器設(shè)備一覽表4.5 臨床送檢標(biāo)本流程圖4.6 PCR擴(kuò)增可接受標(biāo)本記錄表4.7 PCR擴(kuò)增拒收標(biāo)本記錄表4.8 室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果記錄表4.9 室間質(zhì)控記錄表4.10 消耗性材料驗(yàn)收記錄表4.11 試劑驗(yàn)收記錄表4.12 故障處理表4.13 儀器設(shè)備使用記錄表4.14 儀器設(shè)備維護(hù)保養(yǎng)記錄表4.15 實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表4.16 工作區(qū)溫度、濕度記錄表4.17 抱怨記錄表4.18 標(biāo)本超低溫保存記錄表4.19

38、 應(yīng)急處理記錄表4.20 垃圾處理記錄表4.21 冰箱溫度記錄表4.22 水浴箱溫度記錄表4.23 移動(dòng)紫外消毒車記錄表4.24 設(shè)備校正記錄表4.25 檢測(cè)結(jié)果報(bào)告流程4.26 報(bào)告單樣張6.11 文件格式一 目的二范圍三職責(zé)四工作流程五引用文件及表格6.12 寫作技巧目的：WHY，為什么要開展這項(xiàng)活動(dòng)范圍：WHAT，活動(dòng)涉及的方面職責(zé)：WHO+WHAT，誰(shuí)做，誰(shuí)負(fù)責(zé)工作流程：列出活動(dòng)順序和細(xì)節(jié)，明確各環(huán)節(jié)“輸入轉(zhuǎn)換輸出”，即做何事（WHAT）、何人做（WHO）、何時(shí)做（WHEN）、何地做（WHERE）、如何做（HOW）引用文件和表格：開展此項(xiàng)活動(dòng)涉及的文件、標(biāo)準(zhǔn)以及使用的表格、證明文件和記

39、錄保存期7評(píng)審中常見問題7.1手冊(cè) 文件不全，無(wú)系統(tǒng)性；質(zhì)量要素描述不全；格式不對(duì)；與實(shí)際工作脫節(jié)；無(wú)現(xiàn)行有效性（無(wú)手簽，各區(qū)無(wú)相應(yīng)手冊(cè)）；記錄不全、不規(guī)范7.2人員 人員檔案：每人一個(gè)檔案袋，有關(guān)資格證書（如上崗證）、培訓(xùn)、技能和經(jīng)歷等。培訓(xùn)計(jì)劃及實(shí)施記錄：每人有年度、季度、月的培訓(xùn)內(nèi)容及實(shí)施記錄；內(nèi)容包括外出學(xué)習(xí)、進(jìn)修，內(nèi)部質(zhì)量手冊(cè)學(xué)習(xí)、業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)、新項(xiàng)目引進(jìn)等。7.3設(shè)施與環(huán)境 通風(fēng)、紫外、清潔、消毒的程序及記錄、生物安全防護(hù)的程序及記錄、生物垃圾的處理。7.4儀器設(shè)備 采購(gòu)程序及驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)；校準(zhǔn)程序及狀態(tài)標(biāo)識(shí)，使用、維護(hù)、保養(yǎng)的程序及記錄；檔案：每個(gè)與檢測(cè)質(zhì)量相關(guān)的設(shè)備均應(yīng)建檔，內(nèi)容包括：

40、設(shè)備的名稱；制造商名稱、型號(hào)、序號(hào)或其它唯一性標(biāo)識(shí)；接收日期和啟用日期；）目前放置地點(diǎn)；接收時(shí)的狀態(tài)（例如全新的、經(jīng)改裝的）；儀器使用說明書或其復(fù)印件；校準(zhǔn)和/或檢測(cè)的日期和結(jié)果以及下次校準(zhǔn)和/或檢測(cè)的日期；迄今所進(jìn)行的維護(hù)和今后維護(hù)計(jì)劃的細(xì)節(jié)；損壞、故障、改裝或修理的歷史。7.4料（試劑、耗品） 采購(gòu)程序及領(lǐng)用記錄，質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)、程序及記錄，應(yīng)急程序；缺貨、試劑變質(zhì)；室內(nèi)質(zhì)控品。7.5樣（品） 標(biāo)本唯一編號(hào)，年月日項(xiàng)目順序號(hào)；標(biāo)本采集標(biāo)準(zhǔn)操作程序；標(biāo)本接受（拒收）標(biāo)準(zhǔn)、交接記錄；標(biāo)本保存、銷毀的程序及記錄；標(biāo)本處理標(biāo)準(zhǔn)操作程序7.6（方）法 方法學(xué)的有效性依據(jù)；SOP的合理性生搬硬套；分區(qū)操作的

41、協(xié)作流程合理；質(zhì)控點(diǎn)的安排提取效率、擴(kuò)增效率；基線的調(diào)整CT值、本底熒光值。7.7（檢）測(cè)室內(nèi)質(zhì)控的SOP：耗品質(zhì)檢，試劑質(zhì)檢，質(zhì)控方法（糾錯(cuò)措施），質(zhì)控圖。室間質(zhì)評(píng)的SOP：糾偏措施7.8報(bào)告發(fā)放范圍：門診、病區(qū)、外單位發(fā)放方式：保密、電子、郵件報(bào)告單的格式：唯一編號(hào)、檢測(cè)下限、實(shí)驗(yàn)室申明審核、標(biāo)準(zhǔn)、不合格報(bào)告的處理7.9抱怨實(shí)驗(yàn)室服務(wù)、質(zhì)量改進(jìn)的依據(jù)對(duì)象：病人、醫(yī)生、工作人員。SOP應(yīng)明確方式、職責(zé)、反饋、記錄。 臨床基因擴(kuò)擴(kuò)增檢驗(yàn)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室室管理暫暫行辦法法如何迎接臨臨床基因因擴(kuò)增檢檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室技術(shù)術(shù)驗(yàn)收設(shè)計(jì)與驗(yàn)收收標(biāo)準(zhǔn)臨床基因擴(kuò)擴(kuò)增檢驗(yàn)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室室工作規(guī)規(guī)范為使基因擴(kuò)擴(kuò)增檢驗(yàn)驗(yàn)技術(shù)有有效地

42、應(yīng)應(yīng)用于臨臨床，更更好地為為疾病的的預(yù)防、診診斷和治治療服務(wù)務(wù)，保證證檢驗(yàn)質(zhì)質(zhì)量，特特制定本本規(guī)范。一、臨床基基因擴(kuò)增增檢驗(yàn)實(shí)實(shí)驗(yàn)室的的規(guī)范化化設(shè)置及及其管理理臨床基因擴(kuò)擴(kuò)增檢驗(yàn)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室室的規(guī)范范化設(shè)置置詳見臨臨床基因因擴(kuò)增檢檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室管理理暫行辦辦法(衛(wèi)醫(yī)發(fā)發(fā)2000210號(hào)號(hào)文)附附件臨臨床基因因擴(kuò)增檢檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室基本本設(shè)置標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)。為為避免污污染，必必須嚴(yán)格格遵循臨臨床基因因擴(kuò)增檢檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室設(shè)置置標(biāo)準(zhǔn)設(shè)設(shè)置臨床床基因擴(kuò)擴(kuò)增檢驗(yàn)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室室。臨床床基因擴(kuò)擴(kuò)增檢驗(yàn)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室室四個(gè)隔隔開的工工作區(qū)域域中每一一區(qū)域都都須有專專用的儀儀器設(shè)備備。各區(qū)區(qū)域都必必須有明明確的標(biāo)標(biāo)記，以以避免設(shè)設(shè)備物品品

43、如加樣樣器或試試劑等從從其各自自的區(qū)域域內(nèi)移出出從而造造成不同同的工作作區(qū)域間間設(shè)備物物品發(fā)生生混淆。進(jìn)進(jìn)入各個(gè)個(gè)工作區(qū)區(qū)域必須須嚴(yán)格遵遵循單一一方向順順序，即即只能從從試劑貯貯存和準(zhǔn)準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)標(biāo)本制備備區(qū)、擴(kuò)擴(kuò)增反應(yīng)應(yīng)混合物物配制和和擴(kuò)增區(qū)區(qū)(簡(jiǎn)稱稱擴(kuò)增區(qū)區(qū))至產(chǎn)產(chǎn)物分析析區(qū)，避避免發(fā)生生交叉污污染。在在不同的的工作區(qū)區(qū)域應(yīng)使使用不同同顏色或或有明顯顯區(qū)別標(biāo)標(biāo)志的工工作服，以以便于鑒鑒別。此此外，當(dāng)當(dāng)工作者者離開工工作區(qū)時(shí)時(shí)，不得得將各區(qū)區(qū)特定的的工作服服帶出。清潔方法不當(dāng)也是污染發(fā)生的一個(gè)主要原因，因此實(shí)驗(yàn)室的清潔應(yīng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)至擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進(jìn)行。不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)有其各自的清

44、潔用具以防止交叉污染。(一)試劑劑貯存和和準(zhǔn)備區(qū)區(qū)下述操作在在該區(qū)進(jìn)進(jìn)行：貯貯存試劑劑的制備備、試劑劑的分裝裝和主反反應(yīng)混合合液的制制備。貯貯存試劑劑和用于于標(biāo)本制制備的材材料應(yīng)直直接運(yùn)送送至試劑劑貯存和和準(zhǔn)備區(qū)區(qū)，不能能經(jīng)過產(chǎn)產(chǎn)物分析析區(qū)。在在打開含含有反應(yīng)應(yīng)混合液液的離心心管或試試管前，應(yīng)應(yīng)將其快快速離心心數(shù)秒。試試劑原材材料必須須貯存在在本區(qū)內(nèi)內(nèi)，并在在本區(qū)內(nèi)內(nèi)制備成成所需的的貯存試試劑。當(dāng)當(dāng)貯存試試劑溶液液經(jīng)檢查查可用后后，應(yīng)將將其分裝裝貯存?zhèn)鋫溆?，避避免由于于?jīng)常打打開反應(yīng)應(yīng)管吸液液而造成成污染。含反應(yīng)混合液的離心管或試管在冰凍前都應(yīng)快速離心數(shù)秒。大多數(shù)用于擴(kuò)增的試劑都應(yīng)冰凍貯存。為

45、避免因單次反應(yīng)取液而頻繁的凍融主貯存試劑，應(yīng)分裝冰凍貯存試劑溶液。貯存試劑的分裝體積根據(jù)通常在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)一次測(cè)定所需的擴(kuò)增反應(yīng)數(shù)來(lái)決定。主反應(yīng)混合液的組成成份尤其是聚合酶的適用性和穩(wěn)定性通過預(yù)試驗(yàn)來(lái)檢查，評(píng)價(jià)結(jié)果必須有書面報(bào)告。對(duì)于熱啟動(dòng)技術(shù)(在第一個(gè)高溫變性步驟后加入酶)，聚合酶也可不包含在主反應(yīng)混合液中。在整個(gè)本區(qū)的實(shí)驗(yàn)操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。此外，操作中使用一次性帽子也是一個(gè)有效地防止污染的措施。嚴(yán)禁用嘴吸取液體，加樣器和吸頭等必須經(jīng)高壓處理。工作結(jié)束后必須立即對(duì)工作區(qū)進(jìn)行清潔。本工作區(qū)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面應(yīng)可耐受諸如次氯酸鈉的化學(xué)物質(zhì)的消毒清潔作用。實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面的紫外照射應(yīng)方便有

46、效。由于紫外照射的距離和能量對(duì)去污染的效果非常關(guān)鍵，因此可使用可移動(dòng)紫外燈(254nm波長(zhǎng))，在工作完成后調(diào)至實(shí)驗(yàn)臺(tái)上6090cm內(nèi)照射。由于擴(kuò)增產(chǎn)物僅幾百bp，對(duì)紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴(kuò)增片段必須延長(zhǎng)照射時(shí)間，最好是照射過夜。實(shí)驗(yàn)室及其設(shè)備的使用必須有日常記錄。(二)標(biāo)本本制備區(qū)區(qū)下述操作在在該區(qū)進(jìn)進(jìn)行：臨臨床標(biāo)本本的保存存，核酸酸(RNNA、DDNA)提取、貯貯存及其其加入至至擴(kuò)增反反應(yīng)管和和測(cè)定RRNA時(shí)時(shí)cDNNA的合合成。要要正確使使用加樣樣器。由由于在加加樣操作作中可能能會(huì)發(fā)生生氣溶膠膠所致的的污染，所所以應(yīng)避避免在本本區(qū)內(nèi)不不必要的的走動(dòng)?？煽赏ㄟ^在在本區(qū)內(nèi)內(nèi)設(shè)立正正壓條

47、件件避免從從鄰近區(qū)區(qū)進(jìn)入本本區(qū)的氣氣溶膠污污染。為為避免樣樣本間的的交叉污污染，加加入待測(cè)測(cè)核酸后后，必須須蓋好含含反應(yīng)混混合液的的反應(yīng)管管。對(duì)具具有潛在在傳染危危險(xiǎn)性的的材料，必必須有明明確的樣樣本處理理和滅活活程序。 用過的的加樣器器吸頭必必須放入入專門的的消毒(例如含含次氯酸酸鈉溶液液)容器器內(nèi)。實(shí)實(shí)驗(yàn)室桌桌椅表面面每次工工作后都都要清潔潔，實(shí)驗(yàn)驗(yàn)材料(原始血血標(biāo)本、血血清標(biāo)本本、提取取中的標(biāo)標(biāo)本與試試劑的混混合液等等)如出出現(xiàn)外濺濺，則必必須分別別處理并并作出記記錄。對(duì)對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)臺(tái)適當(dāng)?shù)牡淖贤庹照丈?2254nnm波長(zhǎng)長(zhǎng)，與工工作臺(tái)面面近距離離)適合合于滅活活去污染染?？梢埔苿?dòng)紫外外線管

48、燈燈可用來(lái)來(lái)確保工工作后對(duì)對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)臺(tái)面的充充分照射射。樣本本處理對(duì)對(duì)核酸擴(kuò)擴(kuò)增有很很大影響響，必須須使用有有效的核核酸提取取方法，可可在開展展臨床標(biāo)標(biāo)本檢測(cè)測(cè)前對(duì)提提取方法法進(jìn)行評(píng)評(píng)價(jià)。用用于RNNA擴(kuò)增增檢測(cè)的的樣本制制備好以以后，應(yīng)應(yīng)立即進(jìn)進(jìn)行cDDNA合合成，因因?yàn)閏DDNA鏈鏈較RNNA穩(wěn)定定，保存存相對(duì)容容易。為為保證逆逆轉(zhuǎn)錄反反應(yīng)的需需要，應(yīng)應(yīng)在標(biāo)本本制備區(qū)區(qū)設(shè)置一一個(gè)以上上的溫育育裝置。cDNA合成的理想溫度依所使用的酶而定，傾向于使用一步法：即使用在擴(kuò)增反應(yīng)緩沖液條件下具有逆轉(zhuǎn)錄活性的熱穩(wěn)定的DNA聚合酶進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，其較cDNA合成后再開蓋以調(diào)節(jié)緩沖液或加入聚合酶進(jìn)行擴(kuò)增發(fā)生污

49、染的可能性降低。待測(cè)RNA的cDNA拷貝須保存在標(biāo)本制備區(qū)，不得在本區(qū)對(duì)樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增。 (三)擴(kuò)增增區(qū)下述工作在在本區(qū)內(nèi)內(nèi)進(jìn)行：DNAA或cDDNA擴(kuò)擴(kuò)增。此此外，已已制備的的DNAA模板和和合成的的cDNNA(來(lái)來(lái)自樣本本制備區(qū)區(qū))的加加入和主主反應(yīng)混混合液(來(lái)自試試劑貯存存和制備備區(qū))制制備成反反應(yīng)混合合液等也也可在本本區(qū)內(nèi)進(jìn)進(jìn)行。在在巢式PPCR測(cè)測(cè)定中，通通常在第第一輪擴(kuò)擴(kuò)增后必必須打開開反應(yīng)管管，因此此巢式擴(kuò)擴(kuò)增有較較高的污污染危險(xiǎn)險(xiǎn)性，第第二次加加樣必須須在本區(qū)區(qū)內(nèi)進(jìn)行行。不能能從本區(qū)區(qū)再進(jìn)入入任何上游區(qū)域，可可降低本本區(qū)的氣氣壓以避避免氣溶溶膠從本本區(qū)漏出出。 為為避免氣氣

50、溶膠所所致的污污染，應(yīng)應(yīng)盡量減減少在本本區(qū)內(nèi)的的走動(dòng)。如如有加樣樣則應(yīng)在在超凈臺(tái)臺(tái)內(nèi)進(jìn)行行。打開開預(yù)處理理過的反反應(yīng)混合合液時(shí)必必須防止止液體濺濺出，尤尤其是在在巢式擴(kuò)擴(kuò)增步驟驟之間。一一個(gè)簡(jiǎn)單單的方法法是在打打開反應(yīng)應(yīng)管前快快速離心心數(shù)秒?？煽墒褂皿w體積較小小的離心心機(jī)，因因其所占占實(shí)驗(yàn)臺(tái)臺(tái)面小，易易于用一一只手操操作，適適合于大大多數(shù)超超凈臺(tái)。防防潮屏障障如石蠟蠟油或輕輕礦物油油也具有有防污染染作用，但但必須注注意的是是，礦物物油本身身也可能能成為一一種持續(xù)續(xù)性的污污染源。用用過的加加樣器必必須注意意清潔消消毒。 完成操操作及每每天工作作后都必必須對(duì)實(shí)實(shí)驗(yàn)室臺(tái)臺(tái)面進(jìn)行行清潔和和消毒，紫紫外

51、照射射方法與與前面區(qū)區(qū)域相同同。如有有溶液濺濺出，必必須處理理并作出出記錄。(四)擴(kuò)增增產(chǎn)物分分析區(qū)下述操作在在本區(qū)內(nèi)內(nèi)進(jìn)行：擴(kuò)增片片段的測(cè)測(cè)定。核核酸擴(kuò)增增后產(chǎn)物物的分析析方法多多種多樣樣，如膜膜上或微微孔板上上探針雜雜交方法法(同位位素標(biāo)記記或非同同位素標(biāo)標(biāo)記)、瓊瓊脂糖凝凝膠電泳泳、聚丙丙烯酰胺胺凝膠電電泳、SSouttherrn轉(zhuǎn)移移、核酸酸測(cè)序方方法等。目目前國(guó)內(nèi)內(nèi)的商品品試劑盒盒絕大部部分均采采用非同同位素標(biāo)標(biāo)記的微微孔板上上探針雜雜交方法法，即PPCR-ELIISA方方法，也也有膜上上探針雜雜交方法法。本區(qū)區(qū)是最主主要的擴(kuò)擴(kuò)增產(chǎn)物物污染來(lái)來(lái)源，因因此必須須注意避避免通過過本區(qū)的的

52、物品及及工作服服將擴(kuò)增增產(chǎn)物帶帶出。在在使用PPCR-ELIISA方方法檢測(cè)測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)產(chǎn)物時(shí)，必必須使用用洗板機(jī)機(jī)洗板，廢廢液必須須收集至至1mool/LL HCC1中，并并且不能能在實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室內(nèi)傾傾倒，而而應(yīng)至遠(yuǎn)遠(yuǎn)離PCCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室的地地方棄掉掉。用過過的吸頭頭也必須須放至11moll/L HCll中浸泡泡后再放放到垃圾圾袋中按按程序處處理，如如焚燒。由于本區(qū)有可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或同位素等，故應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。本區(qū)的清潔消毒和紫外照射方法同前面區(qū)域。本區(qū)如采用負(fù)壓條件或減壓情況下(如安裝排風(fēng)扇)可減少擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至前面區(qū)域的可能性。二、臨

53、床基基因擴(kuò)增增檢驗(yàn)實(shí)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)質(zhì)量保證證臨床基因擴(kuò)擴(kuò)增檢驗(yàn)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室室質(zhì)量保保證涉及及到整個(gè)個(gè)基因擴(kuò)擴(kuò)增檢驗(yàn)驗(yàn)的所有有階段，即即測(cè)定分分析前的的標(biāo)本采采集處理理、測(cè)定定中的核核酸提取取、擴(kuò)增增和產(chǎn)物物分析以以及測(cè)定定后的結(jié)結(jié)果報(bào)告告等。(一)標(biāo)本本的采集集常用于基因因擴(kuò)增檢檢測(cè)的臨臨床標(biāo)本本包括EEDTAA或枸櫞櫞酸鈉抗抗凝全血血或骨髓髓、血清清或血漿漿、痰、腦腦脊液、尿尿及分泌泌物等。采采血液等等樣本時(shí)時(shí)，應(yīng)使使用一次次性密閉閉容器，如如真空采采血管。當(dāng)當(dāng)使用非非密閉采采樣系統(tǒng)統(tǒng)時(shí)，如如尿、分分泌物和和骨髓的的采樣，必必須注意意防止來(lái)來(lái)自采樣樣者的皮皮屑或分分泌物的的污染。采采樣時(shí)必必須戴一一次

54、性手手套。玻玻璃器皿皿在使用用前應(yīng)高高壓處理理，因?yàn)闉椴Ａ髌髅蟪：胁灰滓资Щ畹牡腞NAA酶。最最好是熱熱滅菌，2250烘烤44小時(shí)以以上可使使RNAA酶永久久性失活活。全血血和骨髓髓標(biāo)本必必須進(jìn)行行抗凝處處理。EEDTAA和枸櫞櫞酸鹽是是首選的的抗凝劑劑。不能能使用肝肝素抗凝凝，因?yàn)闉楦嗡厥鞘荰aqq酶的強(qiáng)強(qiáng)抑制劑劑，而且且在其后后的核酸酸提取步步驟中很很難去除除。臨床床用于RRNA(如HCCV RRNA)擴(kuò)增檢檢測(cè)的血血標(biāo)本建建議進(jìn)行行抗凝處處理，并并盡快(3小時(shí)時(shí)以內(nèi))分離血血漿，以以避免RRNA的的降解。如如未作抗抗凝處理理，則抽抽血后，必必須在11小時(shí)內(nèi)內(nèi)分離血血清。(二)標(biāo)本本

55、的穩(wěn)定定化處理理用于DNAA擴(kuò)增檢檢測(cè)的標(biāo)標(biāo)本，采采集后一一般不需需要特殊殊的穩(wěn)定定化處理理，但標(biāo)標(biāo)本應(yīng)及及時(shí)送至至實(shí)驗(yàn)室室。由于于RNAA易受RRNA酶酶的降解解，因此此用于RRNA測(cè)測(cè)定的標(biāo)標(biāo)本有時(shí)時(shí)必須進(jìn)進(jìn)行穩(wěn)定定化處理理，如流流行病學(xué)學(xué)調(diào)查的的現(xiàn)場(chǎng)采采樣。異異硫氰酸酸胍鹽(Guaaniddinee thhioccyannatee,GIITC)可使DDNA酶酶和RNNA酶立立即失活活，因此此在采集集標(biāo)本時(shí)時(shí)，可將將標(biāo)本材材料如血血清或血血漿按11:4的的比例加加至含有有5mool/LL GIITC的的試管中中，從而而使血清清(漿)中的RRNA酶酶不可逆逆失活。經(jīng)經(jīng)上述穩(wěn)穩(wěn)定化處處理后，標(biāo)

56、標(biāo)本一般般不需要要冷藏即即可郵寄寄。對(duì)于于特定的的檢測(cè)項(xiàng)項(xiàng)目，上上述穩(wěn)定定化處理理方法的的效果究究竟如何何，要使使用相應(yīng)應(yīng)的逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄PCCR測(cè)定定方法來(lái)來(lái)評(píng)價(jià)。(三)標(biāo)本本的運(yùn)送送標(biāo)本采集后后必須盡盡快送至至實(shí)驗(yàn)室室。經(jīng)過過適當(dāng)穩(wěn)穩(wěn)定化處處理的標(biāo)標(biāo)本可在在常溫下下通過郵郵寄運(yùn)送送。如用用于DNNA擴(kuò)增增檢測(cè)的的EDTTA抗凝凝全血標(biāo)標(biāo)本及用用于RNNA擴(kuò)增增檢測(cè)的的經(jīng)GIITC穩(wěn)穩(wěn)定化處處理的標(biāo)標(biāo)本。通通常在運(yùn)運(yùn)送時(shí)，應(yīng)應(yīng)采用不不易破碎碎的容器器裝載標(biāo)標(biāo)本。用用于RNNA檢測(cè)測(cè)的標(biāo)本本，如果果未經(jīng)穩(wěn)穩(wěn)定化處處理，則則必須速速凍后，放放在干冰冰中運(yùn)送送。(四)標(biāo)本本的貯存存臨床體液標(biāo)標(biāo)本如血血清

57、/血血漿等可可于-770下下長(zhǎng)時(shí)間間貯存。用用于DNNA測(cè)定定的已純純化核酸酸樣本可可在100mmool/LL Trris-1 mmmoll/L EDTTA緩沖沖液(ppH 77.5-8.00)中44保存存。用于于RNAA測(cè)定的的已純化化核酸樣樣本應(yīng)在在緩沖液液中-880或或液氮中中貯存。用用乙醇沉沉淀的核核酸樣本本貯存在在-200即可可。用GGITCC處理的的RNAA標(biāo)本在在室溫可可保存77天。(五)標(biāo)本本的處理理(核酸酸提取)標(biāo)本處理即即核酸提提取純化化是決定定擴(kuò)增檢檢測(cè)成敗敗的關(guān)鍵鍵性步驟驟，在使使用商品品核酸提提取試劑劑提取臨臨床標(biāo)本本中的核核酸模板板前，應(yīng)應(yīng)對(duì)其進(jìn)進(jìn)行充分分評(píng)價(jià)以以驗(yàn)

58、證其其提取的的有效性性。通常常，核酸酸制備質(zhì)質(zhì)量不高高是由于于抑制物物去除不不完全所所致，抑抑制物可可能來(lái)源源于標(biāo)本本本身(如血紅紅素及其其前體或或降解產(chǎn)產(chǎn)物)或或核酸提提取過程程中殘留留的有機(jī)機(jī)溶劑(如酚、氯氯仿等)，這些些物質(zhì)對(duì)對(duì)其后的的Taqq酶擴(kuò)增增反應(yīng)步步驟具有有強(qiáng)烈的的抑制作作用，從從而影響響靶核酸酸的擴(kuò)增增測(cè)定。當(dāng)當(dāng)標(biāo)本為為痰時(shí)，則則必須先先進(jìn)行液液化處理理，再提提取核酸酸。需注注意的是是，液化化時(shí)不能能加熱，液液化時(shí)間間不能過過長(zhǎng)。此此外，當(dāng)當(dāng)靶核酸酸為RNNA時(shí)，逆逆轉(zhuǎn)錄PPCR測(cè)測(cè)定失敗敗的常見見原因是是標(biāo)本在在運(yùn)送前前未經(jīng)充充分的穩(wěn)穩(wěn)定化處處理及核核酸提取取試劑的的RNA

59、A酶的污污染。對(duì)對(duì)于前者者，要核核查測(cè)定定分析前前的步驟驟，如果果發(fā)現(xiàn)有有RNAA降解的的證據(jù)，實(shí)實(shí)驗(yàn)室則則應(yīng)拒絕絕接受標(biāo)標(biāo)本，要要求重新新采取標(biāo)標(biāo)本，并并對(duì)運(yùn)送送者給以以詳細(xì)的的指導(dǎo)。對(duì)對(duì)于后者者，建議議使用高高質(zhì)量的的商品核核酸提取取試劑。(六)靶核核酸的逆逆轉(zhuǎn)錄(RT)和擴(kuò)增增1、靶RNNA的逆逆轉(zhuǎn)錄 cDNNA合成成為逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄PCCR中的的第一個(gè)個(gè)酶反應(yīng)應(yīng)步驟，所所產(chǎn)生的的cDNNA為靶靶RNAA的反向向互補(bǔ)鏈鏈，為后后面擴(kuò)增增的模板板。下述述因素通通常影響響cDNNA合成成的效率率：(11)逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄效率率的降低低或完全全缺乏。其其可能的的原因有有逆轉(zhuǎn)錄錄酶質(zhì)量量不高、試試劑降解解變質(zhì)

60、或或加樣錯(cuò)錯(cuò)誤等；(2)用于逆逆轉(zhuǎn)錄的的標(biāo)本中中存在逆逆轉(zhuǎn)錄或或Taqq酶的抑抑制物(如酚、氯氯仿、血血紅素等等)；(3)RRNA酶酶的存在在導(dǎo)致RRNA的的降解。2、核酸的擴(kuò)增 有多種因素可引起核酸擴(kuò)增檢測(cè)的假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，如擴(kuò)增靶核酸中抑制劑存在、Taq酶失活、退火溫度不對(duì)、Mg+濃度不佳、患者標(biāo)本或試劑受污染等。擴(kuò)增儀孔中熱傳導(dǎo)的均一性極為重要，必須定期對(duì)擴(kuò)增儀的溫度控制和加熱模塊中熱傳導(dǎo)的一致性進(jìn)行檢查，以避免假陰性結(jié)果。(七)污染染 在實(shí)際工作作中，常常見有以以下幾種種污染類類型：擴(kuò)擴(kuò)增片段段的污染染(產(chǎn)物物污染)；天然然基因組組DNAA的污染染、試劑劑污染(貯存液液或工作作液)