清咽功能評價方法-中國保健協(xié)會

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專心-專注-專業(yè)專心-專注-專業(yè)精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專心-專注-專業(yè)清咽功能評價方法（征求意見稿）保健食品評價試驗項目、試驗原則及結(jié)果判定Items, Principles and Result Assessment清咽功能1 試驗項目1.1 動物實驗1.1.1 體重 1.1.2 大鼠棉球植入實驗1.1.3 大鼠足趾腫脹實驗1.1.4 小鼠耳腫脹實驗1.2 人體試食試驗：咽部癥狀、體征2 試驗原則2.1 動物實驗和人體試食試驗所列指標均為必做項目。2.2 應對臨床癥狀、體征進行觀察。2.3 在進行人體試食試驗時，應對受試樣品的食用安全性

2、作進一步的觀察。3 結(jié)果判定3.1 動物實驗：大鼠棉球植入實驗結(jié)果陽性，同時大鼠足趾腫脹實驗或小鼠耳腫脹實驗結(jié)果任意一項陽性，可判定該受試樣品清咽功能動物實驗結(jié)果為陽性。3.2 人體試食試驗：試食組自身比較及試食組與對照組組間比較，咽部癥狀及體征有明顯改善，癥狀及體征的改善率明顯增加，可判定該受試樣品具有清咽功能。清咽功能檢驗方法Method for the Assessment of Clear the Throat Function1 動物實驗1.1 大鼠棉球植入實驗1.1.1 實驗原理采用棉球作為異物植入動物局部皮下，可引起與臨床某些炎癥后期病理變化相似的肉芽組織增生。比較給予受試樣品后

3、，實驗組動物與對照組動物肉芽腫重量的差異，以確定受試樣品是否具有干預急性炎癥（肉芽腫形成）的作用。1.1.2實驗動物推薦使用成年雄性大鼠，體重150220克。每組812只。1.1.3劑量分組及受試樣品給予時間實驗設三個劑量組和一個空白對照組，以人體推薦量的5倍為其中的一個劑量組，另設二個劑量組，必要時設陽性對照組。受試樣品給予時間30天，必要時可延長至45天。1.1.4 儀器和材料手術器械、恒溫干燥箱、天平、注射器、乙醚、碘伏、脫脂棉、脫毛器1.1.5 實驗步驟1.1.5.1 棉球的處理 將脫脂棉制成約2025mg緊致的小棉球，經(jīng)高壓滅菌后，置恒溫干燥箱60C干燥3h，取出無菌條件下稱重，干燥

4、保存，備用。1.1.5.2 肉芽腫的形成和測定 在實驗結(jié)束前8天，用脫毛器脫去大鼠兩側(cè)腹股溝處毛，將大鼠用乙醚淺麻醉，碘伏消毒，在無菌條件下切開大鼠兩側(cè)腹股溝皮膚，植入備用的棉球，縫合切口，繼續(xù)灌胃。實驗結(jié)束當天再給一次受試樣品，1小時后，斷頸處死大鼠，在原縫合處剪開皮膚，剝離并取出棉球肉芽組織，置于已稱重的潔凈平皿，恒溫干燥箱60C開蓋干燥1小時后稱重，計算肉芽腫凈量。肉芽腫凈量（mg）干燥后棉球肉芽腫重量原棉球重量1.1.6 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定 一般采用方差分析，但需先進行方差齊性檢驗，方差齊，則計算F值。若F值 F0.05，結(jié)論為各組均數(shù)間差異無顯著性；若F值F0.05（即P0.05），

5、結(jié)論為各組均數(shù)間差異有顯著性，需進一步使用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計分析。對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)需進行適當?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)分布或方差齊的要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析；若經(jīng)變量轉(zhuǎn)換仍不能達到正態(tài)分布或方差齊的目的，則改用秩和檢驗進行統(tǒng)計分析。結(jié)果判定：實驗組與空白對照組比較，肉芽腫凈量明顯下降，經(jīng)統(tǒng)計處理差異有顯著性，可判定該受試樣品大鼠棉球植入實驗結(jié)果陽性。1.1.7 注意事項1.1.7.1 所用棉球重量及表面積對實驗結(jié)果影響較大，故在實驗中，應盡可能保證所用棉球重量和表面積近似。1.1.7.2 盡量使手術切口的大小一致，以減少差異。1.1.7.3 植

6、入棉球后，將切口縫合牢固，以免在實驗過程中棉球脫落，影響實驗結(jié)果。1.2 大鼠足趾腫脹實驗 1.2.1 實驗原理用一定量的致炎劑，注入大鼠后肢足趾皮下，造成足趾腫脹，然后測定足趾容積，比較實驗組和對照組致炎劑作用前后足趾容積的變化，以確定受試樣品是否具有干預急性炎癥（足趾腫脹）的作用。1.2.2 實驗動物 同1.1.2。1.2.3 劑量分組及受試樣品給予時間同1.1.31.2.4儀器和材料：致炎劑（推薦使用葡聚糖4萬）、足趾容積測量儀、無菌蒸餾水、0.25ml注射器。1.2.5 實驗步驟1.2.5.1致炎劑的配制 用無菌蒸餾水配成濃度為1%的葡聚糖4萬，備用。1.2.5.2 足趾腫脹及測定 實

7、驗結(jié)束當天再給一次受試樣品，1小時后，用足趾容積測量儀測量各組大鼠右后足趾的容積，作為0h足趾容積。然后在大鼠右后足趾皮下注入1葡聚糖4萬0.1mL/只，分別在致炎后1、2、4、6小時測量各鼠足趾的容積，同一部位測量3次，取平均值。以不同時間所測足趾容積與致炎劑作用前的足趾容積之差為腫脹值，計算各個時間段的足趾腫脹率。腫脹率（%）=腫脹值致炎前足趾容積100。1.2.6 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定一般采用方差分析，但需先進行方差齊性檢驗，方差齊，則計算F值。若F值 F0.05，結(jié)論為各組均數(shù)間差異無顯著性；若F值F0.05（即P0.05），結(jié)論為各組均數(shù)間差異有顯著性，需進一步使用多個實驗組和一個對照

8、組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計分析。對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)需進行適當?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)分布或方差齊的要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析；若經(jīng)變量轉(zhuǎn)換仍不能達到正態(tài)分布或方差齊的目的，則改用秩和檢驗進行統(tǒng)計分析。結(jié)果判定：實驗組與空白對照組比較，任一時間點刺激前后足趾容積腫脹率明顯減少，差異有顯著性，可判定該受試樣品大鼠足趾腫脹實驗結(jié)果陽性。1.2.7 注意事項1.2.7.1 致炎劑注入的質(zhì)量對實驗結(jié)果影響很大，在注入致炎劑時，應將動物后肢拉直，從右后足掌心向踝關節(jié)方向皮下注射致炎劑，并應盡可能使動物不動。建議由專人負責致炎劑的注射，以保證實驗結(jié)果的一致性。1.2.7.2 測量足趾容積

9、時，嚴格按儀器說明操作。注意應在鼠足某處用記號筆畫線作為測量標線，將鼠足緩緩放入測量筒內(nèi)，當水平面與鼠足上的測量標線重疊時，踏動腳踏開關，記錄足趾容積，用吸水紙擦干鼠足上的水后，分別再進行第2次和第3次測定。為避免測量誤差，測定人員應事先進行訓練，掌握將鼠足放入測量筒內(nèi)的最佳方式，每個樣品的測量最好由專人進行。1.2.7.3 保證每次測定的部位要固定。1.3 小鼠耳腫脹實驗1.3.1 實驗原理二甲苯為無色澄清液體，涂抹于小鼠耳廓后，由于其刺激作用，可引起鼠耳局部毛細血管充血，通透性增加，導致急性炎癥。比較實驗組和對照組二甲苯作用后耳腫脹率的差異，以確定受試樣品是否具有干預急性炎癥（小鼠耳腫脹）

10、的作用。1.3.2 儀器和材料直徑9mm打孔器、致炎劑（二甲苯）、微量加樣器、分析天平（千分之一）1.3.3 實驗動物推薦使用雄性BALB/C小鼠，體重1822克，每組1015只。1.3.4劑量分組及受試樣品給予時間實驗設三個劑量組、一個空白對照組和一個模型對照組，三個劑量組中應包括一個人體推薦量的10倍劑量組。受試樣品給予時間30天，必要時可延長至45天。1.3.5 實驗步驟汲取二甲苯20l，滴加在小鼠右耳外側(cè)面耳廓的中央，讓其自由擴散，30min后，將小鼠脫頸椎處死，剪下雙耳，用9mm直徑打孔器在兩耳相同部位打下耳片并稱重，以兩耳重量之差為耳廓腫脹值，計算耳廓腫脹率。耳廓腫脹率（%）=耳廓

11、腫脹值對照耳片重量1001.3.6 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定一般采用方差分析，但需先進行方差齊性檢驗，方差齊，則計算F值。若F值50）的資料應用秩和檢驗。改善率為計數(shù)資料，可用X2檢驗，四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時，應改用確切概率法。結(jié)果判定：試食組自身比較及試食組與對照組組間比較，咽部臨床癥狀、體征積分明顯降低，且癥狀、體征改善率較對照組有明顯增加，差異有顯著性，可判定該受試樣品具有清咽功能。2.7 注意事項 因咽部癥狀檢查帶有較大的主觀性，建議由專人負責所有受試者試食前后的檢查，盡可能保證判斷標準的一致性。清咽功能評價方法修改說明一、承擔單位： 四川大學

12、華西公共衛(wèi)生學院分析測試中心，該單位是國家標準“食品安全性毒理學評價程序和方法”（GB15193）、保健食品檢驗與評價技術規(guī)范（2003年版）等多項國家標準和技術規(guī)范的起草單位之一，是衛(wèi)生部認定的保健食品功能學檢驗機構，在保健食品功能學評價及其方法研究、相關國家標準與技術規(guī)范的起草和方法驗證等方面有豐富的經(jīng)驗。二、主要工作過程為了做好技術規(guī)范的制定工作，國家食品藥品監(jiān)督管理局保健食品化妝品監(jiān)管司（簡稱?；荆┯?009年4月召開了“保健食品功能評方法及有關程序修訂”課題協(xié)作組工作會議，參會的有中國疾病預防控制中心營養(yǎng)與食品安全所、廣東省疾病預防控制中心、上海市疾病預防與控制中心、北京市疾病預防

13、控制中心、四川大學華西公共衛(wèi)生學院、中國中醫(yī)研究院東直門醫(yī)院和國家食品藥品監(jiān)督管理局保健食品審評中心的專家近15人，會上對“保健食品功能評價方法及有關程序修訂”修訂的原則和框架作了充分的討論，在討論稿的基礎上，又分別征求了相關專家的意見。四川大學華西公共衛(wèi)生學院分析測試中心于2009年11月牽頭成立項目協(xié)作組，四川省疾病預防控制中心和湖南省疾病預防控制中心為本項目的協(xié)作單位。2009年12月到2010年2月進行了廣泛的文獻調(diào)研和意見征詢等前期工作， 2010年2月底召開了清咽功能評價程序與檢驗方法修訂課題協(xié)作組第一次工作會議，根據(jù)前期調(diào)研和該課題立項時確定的主要目標和擬修改的主要內(nèi)容，對促進排

14、鉛功能評價程序與檢驗方法修訂的原則以及具體的修訂內(nèi)容等進行了充分的討論，制定了工作計劃、進度安排和初步的修訂方案。其后又分別征求了相關專家和檢測機構的意見，對修訂方案初稿再次進行了修改。2010年48月由四川大學華西公共衛(wèi)生學院分析測試中心負責，按修訂方案進行了動物實驗研究。并于2010年8月31日在北京由?；窘M織的保健食品功能學評價程序與檢驗方法修訂中期匯報與討論會上匯報了該項目的進展情況和存在問題。根據(jù)動物實驗研究結(jié)果和中期匯報會上專家的意見，2010年10月召開了清咽功能評價程序與檢驗方法修訂課題協(xié)作組第二次工作會議，重點討論了動物試驗方法改和指標方面的問題，同時對該功能人體試食試驗方

15、法修訂的原則以及具體的修訂內(nèi)容等作了進一步的討論。其后，由四川省疾病預防控制中心和湖南省疾病預防控制中心對該功能檢驗方法修訂方案行了驗證。在此基礎上形成了清咽功能評價程序與檢驗方法（初稿），在征求相關專家和檢測機構的意見后，對該修訂稿再次進行了修改。2011年1月召開了課題協(xié)作組第三次工作會議，綜合各方意見最終形成了清咽功能評價程序與檢驗方法（征求意見稿）。2011年4月1日在北京由國家食品藥品監(jiān)督管理局許可司組織的、由本單位負責完成的清咽等四個功能方法修改稿匯報和征求意見會上做了詳細的匯報，并聽取了與會專家的意見。會后又再次征求了相關檢測機構和專家的意見，對此“征求意見稿”作了進一步的修改與

16、完善。三、編制原則1合法性原則：修訂工作符合國家相關法律法規(guī)并遵循相關管理部門的政策要求。2. 科學性原則：修訂工作遵循科學性的原則，廣泛征求相關領域?qū)＜业囊庖姴⑦M行文獻調(diào)研，各項技術指標應具有科學依據(jù)并經(jīng)科學驗證。3. 先進性原則：注意國內(nèi)管理部門發(fā)布的新管理措施，兼顧了技術發(fā)展的前瞻性。4. 實用性原則：從保護公眾身體健康的角度出發(fā)，充分考慮國情，兼顧我國保健食品功能檢測機構的水平，對內(nèi)容進行客觀量化和具體明確化，盡量提高可操作性。5協(xié)調(diào)性原則：盡可能與本規(guī)范的其他部分一致，注意合理性與有效性、通俗性和規(guī)范性之間的關系。四、主要修訂內(nèi)容及新舊規(guī)范對比本修訂稿與原規(guī)范比較，具體修改部分見下表

17、。序號原方法現(xiàn)方法修訂理由序號內(nèi)容序號內(nèi)容1(程序)8.1.1動物實驗8.1.1 大鼠棉球植入實驗8.1.2 大鼠足趾腫脹實驗1.1動物實驗1.1.1 體重1.1.2 大鼠棉球植入實驗1.1.3 大鼠足趾腫脹實驗1.1.4 小鼠耳腫脹實驗實驗項目更完善2(程序)8.2.2大鼠棉球植入實驗和大鼠足趾腫脹實驗任選其一2.1動物實驗和人體試食實驗所列指標均為必做項目。實驗項目更完善提高標準3(程序)無2.2應對臨床癥狀、體征進行觀察。盡可能保證判斷結(jié)果時的客觀性4(程序)8.3.1大鼠棉球植入實驗或大鼠足趾腫脹實驗結(jié)果陽性，可判定該受試樣品清咽功能動物實驗結(jié)果陽性3.1大鼠棉球植入實驗結(jié)果陽性，同時

18、大鼠足趾腫脹實驗或小鼠耳腫脹實驗結(jié)果任意一項陽性，可判定該受試樣品清咽功能動物實驗結(jié)果為陽性。更好、更全面的評價保健食品的清咽功能5(方法)1動物實驗動物消炎實驗可選大鼠棉球植入實驗和大鼠足趾腫脹實驗任一種1動物實驗刪去判斷標準已修訂，兩種方法都要做。6(以下均為方法)1.1.1實驗原理采用棉球等異物動物局部皮下植入，可引起與臨床某些炎癥后期病理變化相似的肉芽組織增生。然后觀察受試樣品對肉芽腫重量的影響。1.1.1實驗原理采用棉球作為異物植入動物局部皮下，可引起與臨床某些炎癥后期病理變化相似的肉芽組織增生。比較給予受試樣品后，實驗組動物與對照組動物肉芽腫重量的差異，以確定受試樣品是否具有干預急

19、性炎癥（肉芽腫形成）的作用。文字表述更完善，異物限制為棉球，實驗更具規(guī)范性。71.1.2材料手術器械、烘箱、天平、注射器1.1.4儀器與材料手術器械、恒溫干燥箱、天平、注射器、乙醚、碘伏、脫脂棉、脫毛器更完善81.1.3實驗動物推薦用大鼠，單一性別，體重150220克。每組812只。1.1.2實驗動物推薦使用成年雄性大鼠，體重150220克。每組812只。查閱文獻所用動物多為雄性91.1.4實驗步驟大鼠在乙醚淺麻醉無菌條件下作切口，將已經(jīng)稱重棉球，經(jīng)高壓滅菌每個棉球再加氯芐青霉素1mg/0.1ml，50C烘箱烘干后，植入大鼠兩側(cè)腋窩下（或兩側(cè)腹股溝皮下）。術后隨機分為空白對照組和3個受試樣品各

20、劑量組。受試樣品各劑量組給予不同劑量的受試樣品，空白對照組給予溶劑。實驗結(jié)束當天再給一次受試樣品，1小時后將大鼠斷頸處死，剝離并取出棉球肉芽組織，于60C90C烘箱內(nèi)干燥1小時后稱重，減去原棉球重量，即為肉芽腫凈量。比較各劑量組與空白對照組肉芽腫重量。肉芽腫凈量（mg）干燥后棉球肉芽腫重量原棉球重量1.1.5實驗步驟1.1.5.1 棉球的處理 將脫脂棉制成約2025mg緊致的小棉球，經(jīng)高壓滅菌后，置恒溫干燥箱60C干燥3h，取出無菌條件下稱重，干燥保存，備用。1.1.5.2 肉芽腫的形成和測定在實驗結(jié)束前8天，用脫毛器脫去大鼠兩側(cè)腹股溝處毛，將大鼠用乙醚淺麻醉，碘伏消毒，在無菌條件下切開大鼠兩

21、側(cè)腹股溝皮膚，植入備用的棉球，縫合切口，繼續(xù)灌胃。實驗結(jié)束當天再給一次受試樣品，1小時后，斷頸處死大鼠，在原縫合處剪開皮膚，剝離并取出棉球肉芽組織，置于已稱重的潔凈平皿，恒溫干燥箱60C開蓋干燥1小時后稱重，計算肉芽腫凈量。肉芽腫凈量（mg）干燥后棉球肉芽腫重量原棉球重量細化操作步驟，更具操作性101.1.71.1.7 注意事項1.1.7.1 所用棉球重量可在1050mg范圍內(nèi)，但同一實驗，所用棉球重量應相似。1.1.7.2由于棉球的表面積對實驗結(jié)果影響較大，故應使棉球形狀和植入部位的形狀大小一致以減少差異。1.1.7.3 動物攝食量的降低和體重減輕，亦可降低肉芽腫重量，故應以mg（肉芽腫）/

22、100g（體重）表示。6.21.1.7 注意事項1.1.7.1 所用棉球重量及表面積對實驗結(jié)果影響較大，故在實驗中，應盡可能保證所用棉球重量和表面積近似。1.1.7.2 盡量使手術切口的大小一致，以減少差異。1.1.7.3 植入棉球后，將切口縫合牢固，以免在實驗過程中棉球脫落，影響實驗結(jié)果。完善111.2.1實驗原理用一定量的致炎劑，注入大鼠后肢足趾皮下，造成足趾腫脹，然后測定足趾部厚度，比較實驗組和對照組足趾部厚度的變化。實驗原理用一定量的致炎劑，注入大鼠后肢足趾皮下，造成足趾腫脹，然后測定足趾容積，比較實驗組和對照組致炎劑作用前后足趾容積的變化，以確定受試樣品是否具有干預急性炎癥（足趾腫脹

23、）的作用。與足趾腫脹測量方法修改相一致121.2.2材料：游標卡尺（精密度0.02mm）、微量注射器（50l）。1.2.4儀器和材料：致炎劑（推薦使用葡聚糖4萬）、足趾容積測量儀、無菌蒸餾水、0.25ml注射器。完善131.2.4實驗步驟大鼠按體重分為空白對照組和3個受試樣品劑量組，受試樣品各劑量組給予不同劑量的受試樣品，空白對照組給予溶劑。實驗結(jié)束當天再給一次受試樣品，1小時后，于大鼠右足趾皮下注入1%角叉菜膠0.1ml/只（致炎劑可選用角叉菜膠、瓊脂、右旋糖酐等），分別在致炎后1、3、6小時，測量各鼠用足趾容積測量儀測量各組大鼠右后足趾的容積，作為0h足趾容積。然后在大鼠右后足趾皮下注入1

24、葡聚糖4萬0.1mL/只，分別在致炎后1、2、4、6小時測量各鼠足趾部厚度，同一部位測量3次，取平均值。分別比較各劑量組和空白對照組不同時間點足趾部厚度得差異情況。1.2.5實驗步驟1.2.5.1致炎劑的配制 用無菌蒸餾水配成濃度為1%的葡聚糖4萬，備用。1.2.5.2 足趾腫脹及測定 實驗結(jié)束當天再給一次受試樣品，1小時后，用足趾容積測量儀測量各組大鼠右后足趾的容積，作為0h足趾容積。然后在大鼠右后足趾皮下注入1葡聚糖4萬0.1mL/只，分別在致炎后1、2、4、6小時測量各鼠足趾的容積，同一部位測量3次，取平均值。以不同時間所測足趾容積與致炎劑作用前的足趾容積之差為腫脹值，計算各個時間段的足

25、趾腫脹率。腫脹率（%）=腫脹值致炎前足趾容積100。更清晰，更具可操作性141.2.5數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定足趾厚度為計量資料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，則計算F值。若F值 F0.05，結(jié)論為各組均數(shù)間差異無顯著性；若F值F0.05（即P0.05），結(jié)論為各組均數(shù)間差異有顯著性，需進一步使用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計分析。對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)需進行適當?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)分布或方差齊的要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析；若經(jīng)變量轉(zhuǎn)換仍不能達到正態(tài)分布或方差齊的目的，則改用秩和檢驗進行統(tǒng)計分析。以致炎劑刺激前后足趾厚度的差值變化來

26、表示炎癥反應的程度，實驗組與空白對照組比較，任一時間點刺激前后足趾厚度的差值明顯減少，差異有顯著性，可判定該受試樣品大鼠足趾腫脹實驗結(jié)果陽性。1.2.6數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定一般采用方差分析，但需先進行方差齊性檢驗，方差齊，則計算F值。若F值 F0.05，結(jié)論為各組均數(shù)間差異無顯著性；若F值F0.05（即P0.05），結(jié)論為各組均數(shù)間差異有顯著性，需進一步使用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計分析。對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)需進行適當?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)分布或方差齊的要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析；若經(jīng)變量轉(zhuǎn)換仍不能達到正態(tài)分布或方差齊的目的，則改用秩和檢驗進行統(tǒng)計分析。結(jié)

27、果判定：實驗組與空白對照組比較，任一時間點刺激前后足趾容積腫脹率明顯減少，差異有顯著性，可判定該受試樣品大鼠足趾腫脹實驗結(jié)果陽性。與測量方法修改相一致151.2.6注意事項1.2.6.1 致炎劑若要注入足趾皮下，應將動物后肢拉直，針頭刺入足趾中部皮下先向上注射一部分，再調(diào)轉(zhuǎn)針頭向下注射（共0.1ml）。1.2.6.2測量足趾厚度時，最好由專人來進行。卡尺緊貼足趾部，但不要加壓，否則會影響測量結(jié)果。1.2.6.3 每次測量的部位要固定。1.2.7注意事項1.2.7.1 致炎劑注入的質(zhì)量對實驗結(jié)果影響很大，在注入致炎劑時，應將動物后肢拉直，從右后足掌心向踝關節(jié)方向皮下注射致炎劑，并應盡可能使動物不

28、動。建議由專人負責致炎劑的注射，以保證實驗結(jié)果的一致性。1.2.7.2 測量足趾容積時，嚴格按儀器說明操作。注意應在鼠足某處用記號筆畫線作為測量標線，將鼠足緩緩放入測量筒內(nèi)，當水平面與鼠足上的測量標線重疊時，踏動腳踏開關，記錄足趾容積，用吸水紙擦干鼠足上的水后，分別再進行第2次和第3次測定。為避免測量誤差，測定人員應事先進行訓練，掌握將鼠足放入測量筒內(nèi)的最佳方式，每個樣品的測量最好由專人進行。1.2.7.3 保證每次測定的部位要固定。與測量方法修改相一致，更完善。16無1.3 小鼠耳腫脹實驗1.3.1 實驗原理二甲苯為無色澄清液體，涂抹于小鼠耳廓后，由于其刺激作用，可引起鼠耳局部毛細血管充血，通透性增加，導致急性炎癥。比較實驗組和對照組二甲苯作用后耳腫脹率的差異，以確定受試樣品是否具有干預急性炎癥（小鼠耳腫脹）的作用。1.3.2 儀器和材料直徑9mm打孔器、致炎劑（二甲苯）、微量加樣器、分析天平（千分之一）1.3.3 實驗動物推薦使用雄性BALB/C小鼠，體重1822克，每組1015只。1.3.4劑量分組及受試樣品給予時間實驗設三個劑量組、一個空白對照組和