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文檔簡介

如果有標(biāo)準(zhǔn)曲線,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計算。一般都是相對量。則用delta delta CT方法來計算。舉例如下:對照組基因A的CT值為20,內(nèi)參(比如0actin)C值15。實驗組基因A CT值18,內(nèi) 參CT值14。首先算加樣量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是對照組的 2倍?;駻: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是說基因A的量在實驗組是對照組的4 倍。但是由于加樣量是2倍,所以4處以2=2,最后的相對量是2倍。幾點注意:1。必須確定擴增的特異性2。只有相同目標(biāo)的CT值才能相減(擴增效率有可能不同)3。2的某次方只是理論值,實際擴增效率低于2。4。最好不用Syber Green由Ct值用2-AACt法計算計算表達量差異的原理,可以看下面的圖片:3.2淄法相對定量3.1 II理想的PCR反應(yīng)中,PCR產(chǎn)物的量隨著循環(huán)瓣加呈指數(shù)擴增;其甲n: PCRg環(huán)的艘Xn:第n次循環(huán)后的產(chǎn)物量Xo:起始模板量因此有 X。r霎gWTasaPCRJMgAB.sYBRGi亓/忸H吒至2蓊尹 津薯 sPCRsm 映需4津lweshs1PCRHS饕竺 監(jiān)流煩堅湍S.里膺揉逕葺SL.L河ss-e5成前苛靛誓,需鸚AtO :GAPjH. actin, 1曲RNA等現(xiàn)誡正篇巍田觥融勤H賊疏 A

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