大腸埃希氏菌計(jì)數(shù)-產(chǎn)氣課件

1、大腸埃希氏菌計(jì)數(shù) 產(chǎn)氣大腸埃希氏菌計(jì)數(shù) 產(chǎn)氣大腸埃希氏菌計(jì)數(shù) 產(chǎn)氣大腸桿菌的定義廣泛存在于人和溫血?jiǎng)游锏哪c道中，能夠在發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、 生化試驗(yàn) (靛基質(zhì)、甲基紅、試驗(yàn)、檸檬酸鹽)為 或 的革蘭陰性桿菌。2書籍能培養(yǎng)我們的道德情操，給我們巨大的精神力量，鼓舞我們前進(jìn)大腸埃希氏菌計(jì)數(shù) 產(chǎn)氣大腸埃希氏菌計(jì)數(shù) 產(chǎn)氣大腸埃希氏菌大腸桿菌的定義廣泛存在于人和溫血?jiǎng)游锏哪c道中，能夠在發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、 生化試驗(yàn) (靛基質(zhì)、甲基紅、試驗(yàn)、檸檬酸鹽)為 或 的革蘭陰性桿菌。2大腸桿菌的定義廣泛存在于人和溫血?jiǎng)游锏哪c道中，能夠在發(fā)酵乳衛(wèi)生學(xué)意義大腸桿菌的某些菌株對(duì)人有致病性。相對(duì)于大腸菌群和糞大腸菌群，大腸桿

2、菌與糞便污染的相關(guān)性最好，是指示糞便污染最理想的指標(biāo)，應(yīng)用也最悠久。自年被提議作為糞便污染的指示菌以來，已被應(yīng)用了多年 。為什么后來又有了大腸菌群和糞大腸菌群的應(yīng)用？主要的原因是因?yàn)榇竽c桿菌的檢驗(yàn)過于復(fù)雜。3衛(wèi)生學(xué)意義大腸桿菌的某些菌株對(duì)人有致病性。3隨著食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的日益科學(xué)和細(xì)化，以與對(duì)大腸桿菌檢驗(yàn)方法的不斷改進(jìn)，對(duì)特定食品的大腸桿菌的檢驗(yàn)需求肯定會(huì)越來越多?？勺鳛樵u(píng)價(jià)消毒效果的指示菌。4隨著食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的日益科學(xué)和細(xì)化，以與對(duì)大腸桿菌檢驗(yàn)方法的不大腸桿菌的生化特性形態(tài)與染色：革蘭染色朱陰性無芽胞的短小桿菌；多數(shù)菌株有根鞭毛，能運(yùn)動(dòng)。少數(shù)菌有莢膜。培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧。最適溫度，但在也

3、能生長(zhǎng)。最適。5大腸桿菌的生化特性形態(tài)與染色：5 大腸埃希氏菌計(jì)數(shù) “大腸桿菌平板計(jì)數(shù)”改為“大腸埃希氏菌平板計(jì)數(shù)法”刪除大腸桿菌測(cè)試片計(jì)數(shù)法6 大腸埃希氏菌計(jì)數(shù) “大腸桿菌平板計(jì)數(shù)”改為“大腸桿菌計(jì)數(shù)第一法：法第二法：大腸埃希氏菌平板計(jì)數(shù)法7大腸桿菌計(jì)數(shù)第一法：法7第一法 大腸桿菌計(jì)數(shù)法8第一法 大腸桿菌計(jì)數(shù)法8大腸桿菌計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序檢樣()稀釋液，均質(zhì)倍稀釋選擇個(gè)連續(xù)稀釋度樣品勻液接種不產(chǎn)氣產(chǎn)氣肉湯不產(chǎn)氣產(chǎn)氣瓊脂平板營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng) 生化試驗(yàn)，革蘭染色查表，報(bào)告9大腸桿菌計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序檢樣()稀釋液，均質(zhì)倍稀釋選擇個(gè)連續(xù)稀樣品的稀釋固體和半固體食品：稱取樣品，放入盛有 生理鹽水或磷酸鹽緩沖

4、液的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，于 均質(zhì)，或放入盛有 生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，用均質(zhì)器拍打，制成的樣品勻液。樣品勻液的值應(yīng)在之間，必要時(shí)分別用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)。10樣品的稀釋固體和半固體食品：稱取樣品，放入盛有 生理鹽水或磷用無菌吸管或微量移液器吸取：樣品勻液，沿管壁徐徐注盛有磷酸鹽緩沖液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸與稀釋液面)，振搖試管或換用一支無菌吸管或吸頭反復(fù)吹打，使其混合均勻，制成：的樣品勻液。根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，按上述操作，依次制成倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋次，換用支無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至接種完畢，全過程不得超過。11用無菌吸管或微量移液器吸?。簶悠穭蛞?，沿管壁

5、徐徐注盛有磷酸鹽初發(fā)酵試驗(yàn)選擇適宜的三個(gè)連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液）。每個(gè)稀釋度接種管肉湯，每管接種（如接種量需要超過 ，則用雙料肉湯），培養(yǎng)，觀察小導(dǎo)管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，如未產(chǎn)氣繼續(xù)培養(yǎng)至。記錄在內(nèi)產(chǎn)氣的管數(shù)。如所有肉湯管均未產(chǎn)氣，即可報(bào)告大腸桿菌結(jié)果；如有產(chǎn)氣者，則進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。12初發(fā)酵試驗(yàn)選擇適宜的三個(gè)連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)用接種環(huán)分別從所有內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)氣的管取培養(yǎng)物環(huán)，移種到已提前預(yù)溫至的肉湯管中，放入帶蓋的水浴箱內(nèi)，水浴的水面應(yīng)高于肉湯培養(yǎng)基液面，培養(yǎng)，檢查小導(dǎo)管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，如未產(chǎn)氣繼續(xù)培養(yǎng)至。記錄在和內(nèi)產(chǎn)氣的肉湯管數(shù)。如所有肉湯管均未產(chǎn)

6、氣，即可報(bào)告大腸桿菌結(jié)果。如有產(chǎn)氣者，則進(jìn)行平板分離培養(yǎng)。13復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)用接種環(huán)分別從所有內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)氣的管取培養(yǎng)物環(huán)，移種伊紅美藍(lán)平板分離培養(yǎng)輕輕振搖各產(chǎn)氣管，用接種環(huán)取培養(yǎng)物劃線分離于伊紅美藍(lán)（）平板。培養(yǎng)后，檢驗(yàn)平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。14伊紅美藍(lán)平板分離培養(yǎng)輕輕振搖各產(chǎn)氣管，用接種環(huán)取培養(yǎng)物劃線分營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面或平板培養(yǎng)從每個(gè)平板上挑選個(gè)典型菌落，如無典型菌落則挑取可疑菌落。用接種針接觸菌落中心部位，移種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面或平板上， 培養(yǎng)，取培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭染色和生化試驗(yàn)。15營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面或平板培養(yǎng)從每個(gè)平板上挑選個(gè)典型菌落，如無典型菌生化試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)：將培養(yǎng)物接種于蛋白胨

7、水，培養(yǎng) ，加靛基質(zhì)試劑，上層出現(xiàn)紅色為陽性。試驗(yàn)：將培養(yǎng)物接種于培養(yǎng)基，培養(yǎng)，移取培養(yǎng)物至小試管中，加萘酚乙醇溶液、氫氧化鉀和少許肌酸結(jié)晶。振搖后靜置，如出現(xiàn)伊紅色為試驗(yàn)陽性。16生化試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)：將培養(yǎng)物接種于蛋白胨水，培養(yǎng) ，將試驗(yàn)剩余培養(yǎng)物再培養(yǎng)后，滴加滴甲基紅試劑，培養(yǎng)物變紅為甲基紅試驗(yàn)陽性；變黃為陰性。檸檬酸鹽利用試驗(yàn)：將培養(yǎng)物接種于氏檸檬酸鹽肉湯， 培養(yǎng)，記錄有無細(xì)菌生長(zhǎng)，生長(zhǎng)為陽性。17將試驗(yàn)剩余培養(yǎng)物再培養(yǎng)后，滴加滴甲基紅試劑，培養(yǎng)物變紅為甲基大腸桿菌與非大腸桿菌的生化鑒別靛基質(zhì)()甲基紅()試驗(yàn) ()枸櫞酸鹽()鑒定(型別)典型大腸桿菌非典型大腸桿菌典型中間型非典型中間型

8、非典型產(chǎn)氣腸桿菌非典型產(chǎn)氣腸桿菌18大腸桿菌與非大腸桿菌的生化鑒別靛基質(zhì)甲基紅()試驗(yàn) ()枸櫞大腸桿菌計(jì)數(shù)的報(bào)告大腸桿菌為革蘭染色陰性無芽胞桿菌、發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣；試驗(yàn)為或。只要有個(gè)菌落鑒定為大腸桿菌，其代表的肉湯管即為大腸桿菌陽性。依據(jù)肉湯陽性管數(shù)查表，報(bào)告每或每樣品中大腸桿菌值。19大腸桿菌計(jì)數(shù)的報(bào)告大腸桿菌為革蘭染色陰性無芽胞桿菌、發(fā)酵乳糖肉湯肉湯主要成分：乳糖、膽鹽、胰蛋白胨。大腸桿菌因分解乳糖而產(chǎn)氣，使小導(dǎo)管中可見氣泡。20肉湯肉湯主要成分：乳糖、膽鹽、胰蛋白胨。20肉湯結(jié)果判定 培養(yǎng)接種前的肉湯產(chǎn)氣為陽性不產(chǎn)氣為陰性21肉湯結(jié)果判定 培養(yǎng)接種前的肉湯產(chǎn)氣為陽性不產(chǎn)氣為陰瓊脂上

9、大腸桿菌的典型菌落與可疑菌落典型菌落：具黑色中心有光澤或無光澤的菌落。非典型的可疑菌落：粉紅色，無黑心典型的大腸桿菌的菌落非典型的大腸桿菌的菌落22瓊脂上大腸桿菌的典型菌落與可疑菌落典型菌落：具黑色中心有光試驗(yàn)原理甲基紅試驗(yàn)( )原理：本試驗(yàn)是用甲基紅指示劑測(cè)定細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖時(shí)產(chǎn)生的氫離子濃度的試驗(yàn)。大腸桿菌和大腸菌群能分解葡萄糖產(chǎn)生大量酸性產(chǎn)物，使甲基紅指示劑變?yōu)榧t色。注意：培養(yǎng)時(shí)間不得；接種菌量濃度不宜過大，否則細(xì)菌生長(zhǎng)受抑制，因此，接種量、試管大小應(yīng)盡量標(biāo)準(zhǔn)化，否則影響結(jié)果判定與重復(fù)性差23試驗(yàn)原理甲基紅試驗(yàn)( )原理：本試驗(yàn)是用甲基紅指示劑測(cè)定細(xì)菌靛基質(zhì)試驗(yàn)()原理：細(xì)菌(如大腸埃希菌

10、、大腸菌群等)含有色氨酸酶，將蛋白胨中的色氨酸分解，生成靛基質(zhì)。靛基質(zhì)與對(duì)二甲基苯甲醛作用，形成紅色的玖瑰靛基質(zhì)(紅色的醇層，為醌型結(jié)構(gòu)的紅色集約化化合物)，呈紅色。注意：蛋白胨的色氨酸含量與靛基質(zhì)試驗(yàn)陽性反應(yīng)密切相關(guān)，若蛋白胨水中加入的色氨酸或選用色氨酸高的胰蛋白胨做靛基質(zhì)試驗(yàn)效果更佳。24靛基質(zhì)試驗(yàn)()原理：細(xì)菌(如大腸埃希菌、大腸菌群等)含有色氨試驗(yàn)()原理：本試驗(yàn)是檢查細(xì)菌利用葡萄后所產(chǎn)生的代謝終產(chǎn)物乙酰甲基甲醇的實(shí)驗(yàn)。細(xì)菌在葡萄糖代謝中生成丙酮酸，丙酮酸僅是中間產(chǎn)物。隨細(xì)菌種屬不同而有多種分解途徑，使丙酮酸進(jìn)一步分解為不同的終產(chǎn)物，借此鑒定菌種。注意：在加入試劑時(shí)一定要加萘酚，使其先

11、與丁二酮和胍基復(fù)合物結(jié)合，而后再加入氫氧化鈉。25試驗(yàn)()原理：本試驗(yàn)是檢查細(xì)菌利用葡萄后所產(chǎn)生的代謝終產(chǎn)物乙若先加入氫氧化鈉溶液，氫氧化鈉可與培養(yǎng)基中蛋白胨某些成分反應(yīng)，產(chǎn)生橙紅色，造成假陽性的結(jié)果。氫氧化鈉溶液的加入量不超過，如過量可與萘酚反應(yīng)出現(xiàn)棕色，使弱陽性結(jié)果不易觀察。若已知的陽性菌株，偶不出現(xiàn)陽性反應(yīng)時(shí)，可把含試劑的培養(yǎng)物輕微加熱株，陽性菌經(jīng)加溫后一般即可產(chǎn)生陽性反應(yīng)。而陰性菌株仍為陰性反應(yīng)。26若先加入氫氧化鈉溶液，氫氧化鈉可與培養(yǎng)基中蛋白胨某些成分反應(yīng)在試驗(yàn)中，為檢出最小量乙酰甲基甲醇的最顯著變化，結(jié)果觀察可延至，但要注意氫氧化鈉對(duì)萘酚的作用，不要將棕色錯(cuò)判為陽性結(jié)果。也可將試

12、驗(yàn)管置培養(yǎng)后再觀察結(jié)果，若無紅色出現(xiàn)，即為陰性。27在試驗(yàn)中，為檢出最小量乙酰甲基甲醇的最顯著變化，結(jié)果觀察可延檸檬酸鹽(枸櫞鹽)試驗(yàn)()原理：某些細(xì)菌可利用檸檬酸鹽為碳源，同時(shí)利用銨鹽為氮源提供能量而生長(zhǎng)。注意：本試驗(yàn)是以細(xì)菌生長(zhǎng)后培養(yǎng)基的濁度判定結(jié)果的。因此接種待試培養(yǎng)物過多時(shí)，容易造成假陽性結(jié)果。一般宜采用滅菌生理鹽水制成菌懸液接種為好。28檸檬酸鹽(枸櫞鹽)試驗(yàn)()原理：某些細(xì)菌可利用檸檬酸鹽為碳源 試驗(yàn)的最佳觀察結(jié)果時(shí)間靛基質(zhì)試驗(yàn)：， ；甲基紅試驗(yàn)：，；滴加甲基紅試劑，出現(xiàn)紅色為陽性；出現(xiàn)黃色為陰性結(jié)果。試驗(yàn)： ， ；滴加試劑后若未出現(xiàn)伊紅色，應(yīng)再培養(yǎng)后再觀察結(jié)果。檸檬酸鹽試驗(yàn)： ，

13、 ；觀察有無細(xì)菌生長(zhǎng)。有細(xì)菌生長(zhǎng)培養(yǎng)基可變?yōu)樗{(lán)色。29 試驗(yàn)的最佳觀察結(jié)果時(shí)間靛基質(zhì)試驗(yàn)：， ；29大腸桿菌 試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)試驗(yàn)檸檬酸鹽試驗(yàn)30大腸桿菌 試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)試驗(yàn)檸檬酸鹽試驗(yàn)30第二法大腸埃希氏菌平板計(jì)數(shù)法31第二法大腸埃希氏菌平板計(jì)數(shù)法31原理甲基傘形酮葡萄糖苷，英文縮寫 。是一種不產(chǎn)生熒光的底物。由于的大腸桿菌都具有葡萄糖苷酶，能分解葡萄糖苷，而使甲基傘形酮游離出來，在紫外光下產(chǎn)生藍(lán)色熒光。觀察到藍(lán)色熒光即可認(rèn)為是大腸桿菌陽性。對(duì)大腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖既沒有抑制作用也沒有促進(jìn)作用，對(duì)菌落形態(tài)也沒有影響。32原理甲基傘形酮葡萄糖苷，英文縮寫 。是一種不產(chǎn)生熒光的底物

14、對(duì)平板計(jì)數(shù)法的評(píng)估優(yōu)勢(shì)：許多研究結(jié)果都證實(shí)，方法的可靠性是相同于或高于常規(guī)方法，準(zhǔn)確性高于疏水格濾膜法。當(dāng)普通變形桿菌等背景菌或雜菌存在時(shí)，對(duì)大腸桿菌發(fā)酵乳糖的產(chǎn)氣能力具有抑制作用，但對(duì)分解產(chǎn)生熒光的能力沒有抑制作用。33對(duì)平板計(jì)數(shù)法的評(píng)估優(yōu)勢(shì)：33研究還證實(shí)，大腸桿菌的熒光反應(yīng)比產(chǎn)氣反應(yīng)出現(xiàn)得更早，并且不受食品的影響，目前，僅發(fā)現(xiàn)對(duì)牡蠣不適合用方法，因?yàn)槟迪牼哂袃?nèi)源性葡萄糖苷酸酶。34研究還證實(shí)，大腸桿菌的熒光反應(yīng)比產(chǎn)氣反應(yīng)出現(xiàn)得更早，并且不受本方法是通過熒光的產(chǎn)生判定結(jié)果的，實(shí)驗(yàn)過程中所使用的器皿易受洗滌劑中的熒光增白劑的影響，而產(chǎn)生假陽性或陰性對(duì)照顯熒光的現(xiàn)象。需在紫外燈下觀察結(jié)果與計(jì)數(shù)

15、，時(shí)間太長(zhǎng)對(duì)人的眼睛有損傷，實(shí)驗(yàn)時(shí)需特別的安全防護(hù) 。利用大腸桿菌能產(chǎn)生葡萄糖苷酸酶的特性進(jìn)行檢驗(yàn)的方法除了以外，還有溴氯吲哚葡糖苷酸等。35本方法是通過熒光的產(chǎn)生判定結(jié)果的，實(shí)驗(yàn)過程中所使用的器皿易受平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序檢樣()稀釋液，均質(zhì)倍系列稀釋選擇個(gè)適宜稀釋度的樣液，接種平板紫外光下，計(jì)數(shù)發(fā)熒光的菌落報(bào)告結(jié)果36平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序檢樣()稀釋液，均質(zhì)倍系列稀釋選擇個(gè)適宜稀檢驗(yàn)選取個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液，每個(gè)稀釋度分別取注入兩個(gè)無菌平皿。另取樣品稀釋液注入一無菌平皿中，作空白對(duì)照。將預(yù)熱至士的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂 傾注于每個(gè)平皿中。小心旋轉(zhuǎn)平皿，將培養(yǎng)基與樣品勻液充分混勻。待瓊脂凝固

16、后，再加 覆蓋平板表層。 凝固后翻轉(zhuǎn)平板，培養(yǎng) 。注：空白對(duì)照不加覆蓋。37檢驗(yàn)選取個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液，每個(gè)稀釋度分別取注入大腸桿菌平板計(jì)數(shù)與報(bào)告選擇菌落數(shù)為的平板，暗室中波長(zhǎng)紫外燈照射下，計(jì)數(shù)平板上發(fā)淺藍(lán)色熒光的菌落。兩個(gè)平板上發(fā)熒光菌落數(shù)的平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，報(bào)告每克(或毫升)樣品中大腸桿菌數(shù)，以()表示。38大腸桿菌平板計(jì)數(shù)與報(bào)告選擇菌落數(shù)為的平板，暗室中波長(zhǎng)紫外大腸桿菌在平板上的典型菌落39大腸桿菌在平板上的典型菌落39 溴氯吲哚葡萄糖苷酶顯色培養(yǎng)基技術(shù)原理：葡萄糖苷酶陽性的大腸桿菌經(jīng)培養(yǎng)后，分解酶底物中的葡萄糖苷，使溴氯吲哚游離形成藍(lán)綠色的菌落。40 溴氯吲哚葡萄糖苷酶顯色

17、培養(yǎng)基技術(shù)原理：葡萄糖苷酶顯色培養(yǎng)基平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序檢樣()稀釋液，均質(zhì)倍系列稀釋選擇個(gè)適宜稀釋度的樣液，接種平板計(jì)數(shù)藍(lán)綠色的菌落報(bào)告結(jié)果41顯色培養(yǎng)基平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序檢樣()稀釋液，均質(zhì)倍系列稀釋選樣品的制備試驗(yàn)樣品的制備：參考 和產(chǎn)品相關(guān)的具體國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。42樣品的制備試驗(yàn)樣品的制備：參考 和產(chǎn)品相關(guān)的具體國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。4接種使用無菌吸管或移液器()，吸取液體樣本或其它樣本的初始懸浮液()，轉(zhuǎn)移至無菌平皿中。 每一稀釋度接種二塊平皿。如有必要，重復(fù)上述操作接種樣本的更高稀釋度，每接種一個(gè)稀釋度更換一支無菌吸管。在接種后的平皿中傾注事先在水浴箱中冷卻至的培養(yǎng)基 。43接種使用無菌吸管或移液器(

18、)，吸取液體樣本或其它樣本的初始懸小心將培養(yǎng)基和接種物混勻，并將平皿放在冷的水平面上待其凝固。 從接種到傾注培養(yǎng)基不要超過。 44小心將培養(yǎng)基和接種物混勻，并將平皿放在冷的水平面上待其凝固。培養(yǎng)倒置已凝固的平皿， 將其放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 。但總培養(yǎng)時(shí)間不要超過。注：如樣品經(jīng)深加工，可將初始培養(yǎng)溫度設(shè)為，培養(yǎng)后再提高至培養(yǎng)。但培養(yǎng)溫度不要超過。45培養(yǎng)倒置已凝固的平皿， 將其放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 。但總培菌落計(jì)數(shù)在規(guī)定的培養(yǎng)結(jié)束后，選擇總菌落(典型和非典型菌落)數(shù)少于、典型菌落數(shù)少于的平板，計(jì)算每一個(gè)平板上典型的葡萄糖苷酶陽性的大腸桿菌菌落數(shù)。46菌落計(jì)數(shù)在規(guī)定的培養(yǎng)結(jié)束后，選擇總菌落(典型和非典型菌

19、落)數(shù)結(jié)果計(jì)算至少有一個(gè)平板其藍(lán)色菌落數(shù)不少于 時(shí)，按以下公式計(jì)算：兩個(gè)稀釋度所有平板藍(lán)色菌落數(shù)之和，其中兩個(gè)連續(xù)稀釋度中至少有一個(gè)稀釋度的藍(lán)色菌落數(shù)不少于。：第一個(gè)稀釋度平板個(gè)數(shù)。：每個(gè)平板接種的體積()。：第二個(gè)稀釋度平板個(gè)數(shù)。：稀釋因子，相當(dāng)于第一稀釋度 。47結(jié)果計(jì)算至少有一個(gè)平板其藍(lán)色菌落數(shù)不少于 時(shí)，按以下公式計(jì)算如兩個(gè)平板的藍(lán)色菌落數(shù)少于，按以下公式計(jì)算： ：兩個(gè)平板藍(lán)色菌落數(shù)之和。：每個(gè)平板接種的體積()。：平板個(gè)數(shù)（在本例中）。：稀釋因子，相當(dāng)于第一稀釋度 。48如兩個(gè)平板的藍(lán)色菌落數(shù)少于，按以下公式計(jì)算： ：兩個(gè)平板藍(lán)結(jié)果表達(dá)結(jié)果以兩位有效數(shù)字表示。每(液體產(chǎn)品)或每(其它

20、產(chǎn)品)中葡萄糖苷酶陽性的大腸桿菌數(shù)以兩位整數(shù)(如少于時(shí))表達(dá)?；蛞猿艘缘闹笖?shù)表達(dá)。 49結(jié)果表達(dá)結(jié)果以兩位有效數(shù)字表示。49大腸桿菌顯色培養(yǎng)基50大腸桿菌顯色培養(yǎng)基50大腸桿菌顯色培養(yǎng)基大腸桿菌雜菌51大腸桿菌顯色培養(yǎng)基大腸桿菌雜菌51顯色培養(yǎng)基同時(shí)檢測(cè)大腸桿菌和大腸菌群大腸桿菌大腸菌群52顯色培養(yǎng)基同時(shí)檢測(cè)大腸桿菌和大腸菌群大腸桿菌大腸菌群52 產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌檢驗(yàn) 53 產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌檢驗(yàn) 53內(nèi)容、標(biāo)準(zhǔn)的變更、生物學(xué)特性（菌體形態(tài)學(xué)特征、 培養(yǎng)特性和抵抗力）、培養(yǎng)基和試劑、檢驗(yàn)程序54內(nèi)容54 產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的變更 液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基英文名字由改為；步驟標(biāo)準(zhǔn)新的檢驗(yàn)方法

21、選擇性分離（亞硫酸鹽多粘菌素磺胺嘧啶瓊脂）（胰月示亞硫酸鹽環(huán)絲氨酸瓊脂 ）生化鑒定動(dòng)力硝酸鹽、牛奶發(fā)酵、卵磷脂分解牛奶發(fā)酵乳糖明膠、緩沖動(dòng)力硝酸鹽培養(yǎng)基（）、牛奶發(fā)酵55 產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的變更 步驟標(biāo)準(zhǔn)新的檢驗(yàn)方法（亞硫、生物學(xué)特性)形態(tài)與染色 無鞭毛可形成莢膜和芽胞的大桿菌大小：為() () 。芽孢：卵圓形位于菌體中央或近端，直徑大于菌體的 直徑，有的菌株難形成芽胞。莢膜：在人和動(dòng)物活體組織內(nèi)，或在含血清的培養(yǎng)基 內(nèi)生長(zhǎng)時(shí)可形成莢膜。56、生物學(xué)特性56)培養(yǎng)特性*不嚴(yán)格的厭氧*普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上可生長(zhǎng)，若加入葡萄糖、血液則生長(zhǎng)更好。 *適宜生長(zhǎng)溫度為。*生長(zhǎng)和繁殖速度極快，在適宜條件下代

22、。*在高溫下可進(jìn)行快速分離純培養(yǎng)，每培養(yǎng) 傳種次，較易分離純化。 57)培養(yǎng)特性*不嚴(yán)格的厭氧57 鮮血瓊脂平板生長(zhǎng)： 菌落周圍出現(xiàn)雙層溶血環(huán)，內(nèi)層溶血完全，外 層溶血不完全，好似靶狀，菌落本身略帶灰黃 色至淺灰褐色，與空氣接觸后，有時(shí)可能 逐漸變?yōu)榛揖G色、甚至鮮綠色，這是本菌的特 征之一。 58 鮮血瓊脂平板生長(zhǎng)：58) 生化特性 *發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、乳糖與蔗糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣， *液化明膠*還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。 * 暴烈式發(fā)酵”，是本菌的重要生化特征之一，也是鑒別的主要指標(biāo)。*能將亞硫酸鹽還原為硫化物， 在含亞硫酸鹽與鐵鹽 的瓊脂中形成黑色菌落59) 生化特性59()卵磷脂酶檢查試驗(yàn)：用接種

23、環(huán)取培養(yǎng)液點(diǎn)種于卵黃 瓊脂平板(每塊平板 至少可接種點(diǎn))，于厭氧 培養(yǎng)，觀察接種點(diǎn)的變化。產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生卵 磷脂酶，分解卵黃中的卵磷脂，接種點(diǎn)的底部與 周圍乳白色的混濁帶。60()卵磷脂酶檢查試驗(yàn)：用接種環(huán)取培養(yǎng)液點(diǎn)種于卵黃60、毒素與分型 毒素：產(chǎn)氣莢膜梭菌能產(chǎn)生外毒素和腸毒素。 外毒素：致死毒素、壞死毒素和溶血毒素， 毒性不強(qiáng)不耐熱。還有透明質(zhì)酸酶 等酶類。 腸毒素：不耐熱，經(jīng)即可破壞不 耐酸，對(duì)堿有抵抗性，對(duì)胰蛋白酶 等蛋白分解酶比較穩(wěn)定。 61、毒素與分型61分型： 根據(jù)毒素和抗血清中和試驗(yàn)將此菌分成， ， 和六個(gè)型。 型：最常見，引起氣性壞疽和食物中 毒； 型最早由 ()分離， 所以叫衛(wèi)氏魏氏梭菌 型：可引起腸炎。 *對(duì)人致病的主要是、和型 *引起食物中毒的主要是型 62分型：62 檢驗(yàn)程序 63 檢驗(yàn)程序 63 爆發(fā)酵檢驗(yàn)程序續(xù)64檢驗(yàn)程序續(xù)64、培養(yǎng)基和試劑 胰胨亞硫酸鹽環(huán)絲氨酸（