免疫實(shí)驗(yàn)的技術(shù)

1、關(guān)于免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)第1頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四利用免疫學(xué)原理來(lái)檢測(cè)抗原、多種免疫分子(抗體、補(bǔ)體、細(xì)胞因子和粘附分子等)及免疫細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)過(guò)程。有助于疾病的輔助診斷、治療及預(yù)后判斷 。第2頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四 一、 凝集反應(yīng) 顆粒性抗原（細(xì)胞、細(xì)菌等）或吸附于免疫無(wú)關(guān)載體上的可溶性抗原與相應(yīng)抗體，在適量電解質(zhì)的存在下，形成肉眼可見(jiàn)的凝集團(tuán)塊。 1、直接凝集反應(yīng) （1）玻片凝集試驗(yàn) ABO血型鑒定 （2）試管凝集試驗(yàn) 肥達(dá)試驗(yàn)效價(jià)（滴度）：以出現(xiàn)明顯抗原抗體反應(yīng)現(xiàn)象的最高稀釋度作為待檢抗原（或抗體）的含量。 第3頁(yè)，共24頁(yè)，202

2、2年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四凝集反應(yīng)（agglutination)顆粒型抗原細(xì)菌、細(xì)胞抗體（凝集素）電解質(zhì)（生理鹽水）3750數(shù)小時(shí)凝集反應(yīng)（凝集成團(tuán)）第4頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四1. 直接凝集試驗(yàn)玻片法試管法含有已知抗體的診斷血清待檢菌液生理鹽水特點(diǎn)簡(jiǎn)便、快速不能定量UUUU待檢血清鹽水簡(jiǎn)便、快速能定量肥達(dá)氏試驗(yàn)（widal test)傷寒、副傷寒已知抗原第5頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四ABO血型鑒定紅細(xì)胞表面抗原 抗A抗體 抗B抗體 血型 A + - A B - + B H - - O A,B + + AB第6頁(yè)，共24頁(yè)

3、，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四 2、間接凝集反應(yīng) 指可溶性抗原(或抗體)吸附在乳膠顆?；蚣t細(xì)胞等載體表面與相應(yīng)抗體(或抗原)結(jié)合反應(yīng)，在適宜的條件下，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。 正向間接凝集反應(yīng) 用可溶性抗原包被載體以檢測(cè)抗體。 反向間接凝集反應(yīng) 用抗體包被載體以檢測(cè)抗原。第7頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四第8頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四 二、沉淀反應(yīng) 可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，當(dāng)兩者比例合適，并有適量電解質(zhì)存在時(shí)，形成肉眼可見(jiàn)的沉淀物或沉淀線。 第9頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四沉淀試驗(yàn)（precipitati

4、on test）可溶性抗原細(xì)胞裂解液抗體（沉淀素）電解質(zhì)（生理鹽水）3750數(shù)小時(shí)沉淀反應(yīng)（清澄液中出現(xiàn)混濁沉淀）第10頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四沉淀反應(yīng)分類（1）瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) a.單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) b.雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（2）免疫電泳試驗(yàn) 對(duì)流免疫電泳：原理：在陰極孔內(nèi)加抗原，陽(yáng)極孔內(nèi)加抗體。通電后，抗原帶負(fù)電荷較多，分子較小，向陽(yáng)極泳動(dòng)；抗體分子帶負(fù)電荷較少，加上分子量大，在瓊脂的電滲作用下向陰極泳動(dòng)。 （3）環(huán)狀沉淀試驗(yàn) 第11頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四（1）單向擴(kuò)散試驗(yàn)（Single redial diffusion test）

5、預(yù)先混有抗體第12頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四（2）雙向擴(kuò)散試驗(yàn)（Double diffusion test）第13頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四（3）對(duì)流免疫電泳作用及特點(diǎn)：抗體球蛋白移向陰極，抗原分子移向陽(yáng)極，當(dāng)兩者在適當(dāng)比例處相遇，即形成灰白色沉淀線。檢查乙型肝炎抗原及甲胎蛋白，敏感度比雙向擴(kuò)散法高約10倍，只需12小時(shí)即可獲得檢驗(yàn)結(jié)果。不能定量測(cè)定。AgAb_+第14頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四三、 免疫標(biāo)記技術(shù) 原理： 利用酶、熒光素、膠體金、發(fā)光物質(zhì)以及放射性核素等標(biāo)記物來(lái)標(biāo)記抗原或抗體，再與標(biāo)本中的

6、抗體或抗原反應(yīng)，最后測(cè)定復(fù)合物中的標(biāo)記物。 優(yōu)點(diǎn)：特異、敏感、快速，可作定性、定量或定位測(cè)定。 第15頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四依據(jù)檢測(cè)物分兩類： 1.免疫組化技術(shù)(immunohistochemical technique)，用于組織/細(xì)胞中抗原或抗體的定位； 2.免疫測(cè)定(immunoassay)，用于液體標(biāo)本中抗原或抗體的檢測(cè)。 依據(jù)標(biāo)記物的不同，可分為： 酶免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù)、金免疫技術(shù)、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)和放射免疫技術(shù)。 1、酶免疫技術(shù) 酶免疫技術(shù)是以酶標(biāo)記的抗體或抗原進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)。第16頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四酶聯(lián)

7、免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA) 屬固相酶免疫測(cè)定 ELISA原理： 把待測(cè)標(biāo)本(含有未知抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的順序與固相抗原或抗體起反應(yīng)，再洗滌固相載體，隨后加入酶的底物，底物受酶催化轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩a(chǎn)物。根據(jù)顏色的深淺對(duì)待測(cè)物質(zhì)定性或定量。第17頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四三種試劑：固相抗原或抗體 即把抗原或抗體用合適的方法連接到固相載體表面，同時(shí)保留它們的免疫活性；酶標(biāo)抗原或抗體 即把某些酶用合適的方法連接到抗原或抗體表面，同時(shí)保留它們的免疫活性以及酶的催化活性。常用的酶是辣根過(guò)氧化物酶(H

8、RP)和堿性磷酸酶(AP)；酶作用的底物 常用的底物是鄰苯二胺第18頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四ELISA的類型： (1)雙抗體夾心法 測(cè)抗原 1）已知抗體包被 2）洗板 3）加待檢抗原標(biāo)本 4）洗板 5）加酶標(biāo)記抗體 6）洗板 7）加底物顯色，測(cè)定 第19頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四（2）間接法 測(cè)抗體 1）己知抗原包被 2）洗板 3）加待檢病人血清 4）洗板 5）加酶標(biāo)記抗人IgG 6）洗板 7）加底物顯色，測(cè)定（3）競(jìng)爭(zhēng)法 測(cè)抗原或抗體 測(cè)定抗原：在待測(cè)管中加入受檢抗原和酶標(biāo)抗原，使它們同固相抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。 第20頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）間接法Ag待檢血清酶標(biāo)抗抗體檢測(cè)抗體雙抗體法Ag檢測(cè)抗原待檢抗原抗原競(jìng)爭(zhēng)法Ag待檢抗原酶標(biāo)抗原Ag檢測(cè)抗原第21頁(yè)，共24頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)47分，星期四 2、膠體金免疫技術(shù) 以膠體金為標(biāo)記物的抗原抗體反應(yīng)。常與膜載體技術(shù)結(jié)合，包括斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)和斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)等。斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)(dot gold immunochromatographic