醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告課件

1、 醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)設(shè)計 性實驗報告 醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告1醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告1實驗項目一：動物細(xì)胞融合實驗原理 兩個或兩個以上的細(xì)胞在自發(fā)或誘導(dǎo)條件下合并成為一個雙核或多核細(xì)胞的過程成為 。在通常情況下，兩個細(xì)胞接觸并不會發(fā)生融合現(xiàn)象。因為各自存在完整的細(xì)胞膜，在特殊融合誘導(dǎo)物的作用下，兩個細(xì)胞膜發(fā)生一定變化，就可以促進(jìn)兩個或多個細(xì)胞聚集，相接觸的細(xì)胞膜之間融合，繼而細(xì)胞質(zhì)融合，形成一個大的融合細(xì)胞，在自然界的 就是細(xì)胞融合的過程。 細(xì)胞融合受精醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告2細(xì)胞融合受精醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告2 目前，細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多，常用的主要有滅活的仙臺病毒，聚乙二醇（PEG）和電脈

2、沖。目前應(yīng)用最廣泛的是聚乙二醇，因為它易得，簡單，且融合效果穩(wěn)定。醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告3 目前，細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多，常用的主要有滅活醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告4醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告4醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告5醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告5實驗用品 （1).材料：雞血 。 （2).試劑：Hanks液,PEG溶液(MV=400)，1640液（含10%滅活小牛血清和不含血清的兩種），0.85%生理鹽水，0.2%次甲基藍(lán)染 (3).儀器設(shè)備：顯微鏡(800r/min)，離心機(jī)，水浴箱，酒精燈，吸管，載玻片、蓋玻片，濾紙。醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告6實驗用品 （1).材料：雞血 。 （2).試混合液離心(80

3、0r/min離心)8ml hanks液混勻?qū)嶒灢襟E8min靜置1min后 37水浴PEG溶液熱的1640液混勻 37水浴保溫懸浮 離心洗滌 流盡剩余液體雞血10%懸液 生理鹽水融化 冷卻至5090S內(nèi)醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告7混合液離心(800r/min離心)8ml hanks液加入Hanks液含小牛血清的1640液0.2%次甲基藍(lán)染染液染色鏡檢37水浴 5min離心棄上清10min吸紙吸干37水浴孵育30min醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告8加入Hanks液含小牛血清的1640液0.2%次甲基藍(lán)染染液 注意事項 1.制備50%PEG一定要保溫在37水浴中，不然冷卻后會有結(jié)晶析出。 2.在離心管中加PE

4、G之前，一定要將離心管倒置在濾紙上，流盡液體，否則殘留液會改變PEG的濃度。 3.融合過程觀察：分別于溫育5min、10min、20min、30min取細(xì)胞懸液一滴制成臨時裝片。 兩個細(xì)胞核發(fā)生 ，形成一個含有兩個或多個核的圓形細(xì)胞。 預(yù)期結(jié)果融合醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告9預(yù)期結(jié)果融合醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告9醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告10醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告10細(xì)胞融合過程醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告11細(xì)胞融合過程醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告11實驗原理：實驗項目二：細(xì)胞核的分離與鑒定 細(xì)胞核。 細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)的比重和大小都不相同，在同一離心場內(nèi)的沉降速度也不同，用不同的轉(zhuǎn)速和不同的介質(zhì)離心，就可以將細(xì)胞內(nèi)

5、各組分分級分離出來。 細(xì)胞核的分離就是利用了細(xì)胞核的比重大小與細(xì)胞內(nèi)其他組分不同，先將組織制成勻漿，再在懸浮的均勻介質(zhì)中進(jìn)行離心，分離，甲苯胺藍(lán)又可以將細(xì)胞核染成藍(lán)紫色，這樣，就可以鑒別分離出來的細(xì)胞核。醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告12實驗原理：實驗項目二：細(xì)胞核的分離與鑒定細(xì)胞核。 實驗用品：材料：小白鼠試劑：生理鹽水,0.25mol/L蔗糖，0.003mol/L氯化鈣溶液，1%甲苯胺藍(lán)染液儀器設(shè)備：顯微鏡，普通離心機(jī)，天平，離心管，滴管，玻璃漏斗，量筒，25ml燒杯，解剖剪，鑷子，沖洗瓶，紗布，伯樂均漿器，載玻片，蓋玻片，染色盤架醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告13實驗用品：材料：小白鼠醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗

6、報告13實驗步驟： 斷頭處死小白鼠迅速開腹取肝加8ml預(yù)冷的0.25mol/L蔗糖0.003mol/L綠化高永液于燒杯中，將剪碎的肝組織倒入玻璃勻漿器，是勻漿器下端侵入盛有冰塊的器皿。盡量剪碎肝組織，取1克放入燒杯中 反復(fù)洗滌手提尾部使其血液盡量流出醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告14實驗步驟： 斷頭處死小白鼠迅速開腹取肝加8ml預(yù)冷的0.2左手握持勻漿器右手將勻漿搗桿垂直插入管中勻漿，直至看不到明顯的組織塊過濾勻漿液于離心管中 2500r/min 離心15min離心 5到7分鐘后取上清液制一張涂片1將原離心管中剩余上清液吹打成沉淀成懸液另制涂片2滴染甲苯胺藍(lán)染液 用8層紗布滴染甲苯胺藍(lán)染液 5到7分鐘 洗滌，晾干洗滌，晾干鏡檢醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告15左手握持勻漿器右手將勻漿搗桿垂直插入管中勻漿，直至看不到明顯注意事項：1.操作規(guī)范，防止試劑污染。2.細(xì)胞懸液的涂片制作要輕柔。3.使用離心機(jī)要注意平衡，轉(zhuǎn)速從低到高。預(yù)期結(jié)果：低倍鏡下找到標(biāo)本，再換高倍鏡，可見肝細(xì)胞核已游離出來，被染成藍(lán)紫色，圓形，中央有2到4個甚至更多個深藍(lán)色的核仁。醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告16注意事項：1.操作規(guī)范，防止試劑污染。預(yù)期結(jié)果：低倍鏡下找到設(shè)計組名單姓名 學(xué)號王正旭 1120150135羅秀 1120150136徐鷺