土壤酶活性測(cè)定方法

1、土壤酶活性測(cè)定方法土壤酶活性測(cè)定方法一、蔗糖酶: 3，5-二硝基水楊酸比色法1. 試劑配制2N氫氧化鈉200mL：稱取16g氫氧化鈉，用蒸餾水溶解， 定溶于200mL容量瓶中。 3, 5-二硝基水楊酸溶液1000mL:稱5g二硝基水楊酸, 溶于 200mL2N 氫氧化鈉和500mL蒸餾水中，再加300g酒石酸鉀鈉，用蒸餾水稀釋至 1000mL (不超過(guò) 7 天)。1/15M 磷酸氫二鈉 1000mL： 23.867g Na2*2O 溶于 1000mL 蒸餾水中。1/15M 磷酸二氫鉀 1000mL：9.078g KH2PO4溶于 1000mL 蒸餾水中。pH5.5磷酸緩沖液100mL： 5 m

2、L磷酸氫二鈉(1/15M)加 95mL磷酸二氫鉀(1/15M)8%蔗糖1000mL：稱取80g蔗糖，用水溶解,稀釋至1000mL。 ( 7) 甲苯。(8) 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液( 1mg/mL) 1000mL： 取少量葡萄糖在 真空干燥箱中，于55C。條件下真空干燥至恒重。然后取 1.00g 葡萄糖溶于 100ml 蒸餾水 中成標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖母液(10mg還原糖/ml)。取此母液10ml,用蒸餾水定容至 100mL 即成標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液(1mg/ml)；2. 操作步驟（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：分別取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液 0.4mL，0.8 mL，1.2mL, 1.6mL, 2.0mL,2.8mL,3.2mL于50 mL比

3、色管中，另取一管做空白對(duì)照。用蒸餾水補(bǔ)足 至10mL。加入3.0mL 3, 5-二硝基水楊酸，沸水浴5min,隨即在自 來(lái)水流下冷卻。最后用蒸餾水稀釋至50mL，并在分光光度計(jì)上于波 長(zhǎng) 508nm 處進(jìn)行比色。比色后，以光密度值為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)繪制成標(biāo)準(zhǔn) 曲線。（2）土壤蔗糖酶活性測(cè)定：稱 5.00g 土樣，置于 50mL 三角瓶 中,注入15.0mL 8%蔗糖溶液，5.0mL pH5.5磷酸緩沖液和5滴甲苯。 搖勻混合物后，放入恒溫箱，在37C。下培養(yǎng)24h。到時(shí)取出，6000rpm 離心10min。取1.0mL上清液（新鮮土樣所吸取的上清液體積為I.OmL； 風(fēng)干土及保存1個(gè)

4、月的土樣所吸取的上清液體積為0.5mL）于50mL 比色管中，然后按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線顯色方法進(jìn)行比色測(cè)定。為消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的誤差。每一土樣需做無(wú) 基質(zhì)對(duì)照。整個(gè)實(shí)驗(yàn)需作無(wú)土壤對(duì)照。3結(jié)果計(jì)算蔗糖酶活性以24h后1g 土壤葡萄糖的毫克數(shù)表示。葡萄糖（mg）=（a-b）xc式中 a-從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的樣品（加了基質(zhì)）對(duì)應(yīng)的葡萄糖濃 度， mg/mL；b-從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的樣品對(duì)照組的葡萄糖濃度， mg/mL；c-換算成 1g 土的系數(shù)。二、脲酶: 靛酚比色法1. 試劑配制（1） pH6.7檸檬酸鹽緩沖液1L：取184g檸檬酸溶于300mL蒸 餾水中，另取 147.5gKOH溶于水，再將兩種溶液合并，用1N NaOH將pH調(diào)至6.7，并用水稀至 1L。（2） 苯酚鈉溶液：稱取 62.5g 苯酚溶于少量乙醇中，加 2mL 甲 醇和 18.5mL 丙酮，然后用乙醇稀釋至100mL（A液），保存在冰箱中。稱取27g NaOH 溶于 100mL水中（B液），保存在冰箱中。使用前，取A、B兩液各20mL混 合，并用蒸餾水稀釋至 100mL 備用。（3）次氯酸鈉溶液100mL：取10%的次氯酸鈉溶液9mL，用水 稀釋定容