章免疫學(xué)技術(shù)在食品科學(xué)中的應(yīng)用課件

1、章免疫學(xué)技術(shù)在食品科學(xué)中的應(yīng)用章免疫學(xué)技術(shù)在食品科學(xué)中的應(yīng)用章免疫學(xué)技術(shù)在食品科學(xué)中的應(yīng)用一.抗原抗體反應(yīng) 指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)，是免疫球蛋白分子上的抗原結(jié)合位和抗原分子上的抗原決定簇相互吸引以及多種分子間的引力參與下發(fā)生的反應(yīng)?？乖贵w反應(yīng)可發(fā)生于體內(nèi)，也可發(fā)生于體外。2021/4/272章免疫學(xué)技術(shù)在食品科學(xué)中的應(yīng)用章免疫學(xué)技術(shù)在食品科學(xué)中的應(yīng)用一.抗原抗體反應(yīng) 指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)，是免疫球蛋白分子上的抗原結(jié)合位和抗原分子上的抗原決定簇相互吸引以及多種分子間的引力參與下發(fā)生的反應(yīng)?？乖贵w反應(yīng)可發(fā)生于體內(nèi)，也可發(fā)生于體外。2021/4/272一

2、.抗原抗體反應(yīng) 指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)抗原抗體 抗原與抗體之間通過(guò)非共價(jià)鍵結(jié)合，它們之間的結(jié)合力包括電荷引力、范德華力、氫鍵結(jié)合力和疏水作用力。多種非共價(jià)結(jié)合力使抗原抗體緊密結(jié)合在一起?？乖c抗體結(jié)合力2021/4/273抗原抗體 抗原與抗體之間通過(guò)非共價(jià)鍵結(jié)合，它們之間的結(jié)抗原與抗體反應(yīng)特點(diǎn)抗原抗體1、特異性：抗原抗體在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系，兩者結(jié)合具有高度特異性。2、按比性：兩者分子比例合適時(shí)才出現(xiàn)最強(qiáng)的反應(yīng)。3、可逆性：改變pH和離子強(qiáng)度是最常用的促解離方法。2021/4/274抗原與抗體反應(yīng)特點(diǎn)抗原抗體1、特異性：抗原抗體在化學(xué)結(jié)202抗原與抗體反應(yīng)的影響因素1

3、）抗原抗體性質(zhì)：互補(bǔ)程度2）酸堿度：pH 6-8 溫度：37 度電解質(zhì)：0.85%氯化鈉或各種緩沖液2021/4/275抗原與抗體反應(yīng)的影響因素1）抗原抗體性質(zhì)：互補(bǔ)程度2021/二.利用抗原抗體反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)主要用途：用已知的抗體檢測(cè)未知的抗原。用已知的抗原檢測(cè)未知的抗體。 定性或定量檢測(cè)體內(nèi)各種大分子，如：細(xì)胞因子，免疫球蛋白。 2021/4/276二.利用抗原抗體反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)主要用途：2021/4/276二.利用抗原抗體反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)免疫凝集試驗(yàn) 免疫沉淀反應(yīng) 免疫標(biāo)記技術(shù)其他 2021/4/277二.利用抗原抗體反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)免疫凝集試驗(yàn) 2021/4/2771.免疫凝集試驗(yàn) 顆?？乖?例；細(xì)菌、紅

4、細(xì)胞）或可溶性抗原結(jié)合于不容性載體微粒上后與相應(yīng)的抗體在適當(dāng)?shù)臈l件下，經(jīng)一定時(shí)間后凝集成肉眼可見的凝集物。直接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng)免疫凝集反應(yīng)2021/4/2781.免疫凝集試驗(yàn) 顆?？乖?例；細(xì)菌、紅細(xì)胞）或可溶性顆粒抗原相應(yīng)抗體直接凝集反應(yīng) 顆?？乖?例；細(xì)菌、紅細(xì)胞）與相應(yīng)的抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象稱為直接凝集反應(yīng)。直接凝集反應(yīng)肉眼可見的凝集物直接凝集試驗(yàn)試管法玻片法2021/4/279顆?？乖鄳?yīng)抗體直接凝集反應(yīng) 顆粒抗原(例；細(xì)菌、紅細(xì) 將可溶性抗原（或抗體）先吸附于一種與免疫無(wú)關(guān)的、一定大小的顆粒狀載體的表面，然后與相應(yīng)的抗體(或抗原)作用，在有電解質(zhì)存在的適宜條件下，即可發(fā)生

5、凝集，稱為間接凝集反應(yīng)。載體：人或動(dòng)物的紅細(xì)胞、活性碳顆粒、聚苯乙烯膠乳等。載體增大抗原（或抗體）反應(yīng)面積。間接凝集反應(yīng)2021/4/2710 將可溶性抗原（或抗體）先吸附于一種與免疫無(wú)關(guān)間接凝集可溶性抗原不容性載體相應(yīng)抗體正向間接凝集反應(yīng)可溶性抗體不容性載體可溶性相應(yīng)抗原反向間接凝集反應(yīng)2021/4/2711可溶性抗原不容性載體相應(yīng)抗體正向間接凝集反應(yīng)可溶性抗體不容性2.免疫沉淀反應(yīng) 免疫沉淀反應(yīng)（precipitation）是指可溶性抗原（細(xì)菌培養(yǎng)液、細(xì)胞或組織浸出液、血清蛋白等）與相應(yīng)抗體特異結(jié)合后，在電解質(zhì)參與下出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象。該反應(yīng)多用于半固體瓊脂作為介質(zhì)，抗原抗體在凝膠中擴(kuò)散，在比

6、例合適處形成白色沉淀。2021/4/27122.免疫沉淀反應(yīng) 免疫沉淀反應(yīng)（precipitati單向免疫擴(kuò)散 單向免疫擴(kuò)散（single immunodiffusion)將一定量的已知抗體均勻混于瓊脂凝膠中制成瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔后加入抗原?？變?nèi)抗原向四周呈環(huán)狀形成濃度梯度，在抗原與抗體的量達(dá)到一定比例時(shí)即可形成肉眼可見的沉淀環(huán)。2021/4/2713單向免疫擴(kuò)散 單向免疫擴(kuò)散（single immunod抗原抗體雙向免疫擴(kuò)散 雙向瓊脂擴(kuò)散（double immunodiffuse test)可溶性抗原和抗體在含有電解質(zhì)的同一個(gè)瓊脂凝膠板的對(duì)應(yīng)孔中，各自向四周凝膠中擴(kuò)散，如果兩者相對(duì)應(yīng)，則

7、發(fā)生特異性反應(yīng)，在濃度比例合適處形成肉眼可見的白色沉淀線。本法常用于抗原或抗體的定性檢測(cè)、組成和兩種抗原的相關(guān)性分析。2021/4/2714抗原抗體雙向免疫擴(kuò)散 雙向瓊脂擴(kuò)散（double i 常用于食品安全檢測(cè)，對(duì)食品中污染病源菌的定性和監(jiān)別，以及食品中的某些成分。如：?jiǎn)蜗蛎庖邤U(kuò)散法檢測(cè)牛乳中免疫球蛋白含量。免疫沉淀試驗(yàn)應(yīng)用2021/4/2715 常用于食品安全檢測(cè)，對(duì)食品中污染免疫沉淀試驗(yàn)應(yīng)用2023.免疫標(biāo)記技術(shù) 免疫標(biāo)記技術(shù)immunolabelling technique 指用熒光素，放射性核素，酶、化學(xué)發(fā)光劑等作為追蹤物，標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。具有靈敏度和特異性高，快速

8、，可定性、定量等檢測(cè)。2021/4/27163.免疫標(biāo)記技術(shù) 免疫標(biāo)記技術(shù)immunolab免疫標(biāo)記技術(shù)分類酶標(biāo)記免疫學(xué)分析EIA放射線標(biāo)記免疫學(xué)分析RIA免疫熒光法IF2021/4/2717免疫標(biāo)記技術(shù)分類酶標(biāo)記免疫學(xué)分析EIA2021/4/2717酶標(biāo)記免疫學(xué)技術(shù) 將酶催化作用的高效性與抗原抗體的特異性相結(jié)合的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗原或抗體后形成的酶標(biāo)記物，既保留抗原或抗體的免疫活性，又保留了酶的催化活性。當(dāng)酶標(biāo)記物與待測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原或抗體相互作用時(shí)，可形成酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物。利用復(fù)合物上標(biāo)記的酶催化底物顯色，其顏色的深淺與待測(cè)標(biāo)本中抗原或抗體的量相關(guān)。 靈敏度：ng-pg, 常

9、用酶:辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶2021/4/2718酶標(biāo)記免疫學(xué)技術(shù) 將酶催化作用的高效性與抗原抗體的酶標(biāo)記免疫學(xué)技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)免疫印跡技術(shù)(Immuno-blotting)酶免疫組化技術(shù)（enzyme immunohistochemistry technique)其它2021/4/2719酶標(biāo)記免疫學(xué)技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linkedELISA :enzyme linked immunosorbent assay 將已知抗體（抗原）包被于載體上，再加上抗原-抗體反應(yīng)使酶標(biāo)記抗體（抗原）結(jié)

10、合在載體上，經(jīng)洗滌去除游離的酶標(biāo)記抗體（抗原）后加入底物顯色，定性或定量分析有色產(chǎn)物確定待測(cè)物的存在與含量的檢測(cè)技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)2021/4/2720ELISA :酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)2021/4/2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)間接法雙抗體夾心法競(jìng)爭(zhēng)法2021/4/2721酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)間接法2021/4/2721酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)間接法抗原抗體一抗二抗底物產(chǎn)物2021/4/2722酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)間接法抗原抗體一抗二抗底物產(chǎn)物酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)雙抗體夾心法（三明治)抗原抗體酶標(biāo)抗體底物產(chǎn)物2021/4/27

11、23酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)雙抗體夾心法（三明治)抗原抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)競(jìng)爭(zhēng)法EEEEEEEEEEEE測(cè)定對(duì)照抗原底物產(chǎn)物抗體E酶標(biāo)抗原2021/4/2724酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)競(jìng)爭(zhēng)法EEEEEEEEEEEEELISA廣泛應(yīng)用于食品科學(xué)領(lǐng)域。食品中農(nóng)藥殘留檢測(cè)食品中抗生素殘留檢測(cè)食源性病原菌檢測(cè)食品安全檢測(cè)食品成分提取功能性食品研究2021/4/2725ELISA廣泛應(yīng)用于食品科學(xué)領(lǐng)域。食品中農(nóng)藥殘留檢測(cè)食品安全免疫印跡技術(shù)(Immuno-blotting) 將凝膠電泳的高分辨力同固相免疫測(cè)定結(jié)合起來(lái)的一種方法。先將復(fù)合物在分離膠中分離，然后將這些分子轉(zhuǎn)移至膜上

12、，再用特異性的抗體來(lái)鑒定這些單個(gè)的抗原成分。2021/4/2726免疫印跡技術(shù)(Immuno-blotting) 將凝免疫印跡技術(shù)(Immuno-blotting) SDS 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印 酶免疫測(cè)定可應(yīng)用于蛋白質(zhì)提取及分析等許多方面。三項(xiàng)技術(shù)結(jié)合而成。2021/4/2727免疫印跡技術(shù)(Immuno-blotting) SD免疫印跡技術(shù)(Immuno-blotting)CBBImmunoblotting LWPCLWPC2021/4/2728免疫印跡技術(shù)(Immuno-blotting)CBBImmu酶免疫組化技術(shù) 以酶標(biāo)抗體與組織或細(xì)胞的抗原進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)合形態(tài)學(xué)檢查，對(duì)抗原進(jìn)行定性、定量或定位

13、檢測(cè)的技術(shù)。用于測(cè)定組織或細(xì)胞表面的抗原。2021/4/2729酶免疫組化技術(shù) 以酶標(biāo)抗體與組織或細(xì)胞的抗原進(jìn)行反203.免疫標(biāo)記技術(shù)酶標(biāo)記免疫學(xué)分析EIA放射線標(biāo)記免疫學(xué)分析RIA免疫熒光法IF2021/4/27303.免疫標(biāo)記技術(shù)酶標(biāo)記免疫學(xué)分析EIA2021/4/2730放射線標(biāo)記免疫學(xué)分析RIA 用放射性同位素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)的免疫標(biāo)記技術(shù)。該法靈敏度高達(dá)pg。常用的放射性同位素有125I 和 131I。 應(yīng)用于食品安全檢測(cè)，食品中農(nóng)藥殘留、激素等檢測(cè)。2021/4/2731放射線標(biāo)記免疫學(xué)分析RIA 用放射性同位素標(biāo)記抗原或免疫熒光法IF直接法熒光素直接標(biāo)記抗體，對(duì)標(biāo)本進(jìn)

14、行檢測(cè)。特異性強(qiáng)，但任一抗原均需制備熒光素抗體間接法用第一抗體與標(biāo)本中抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的二抗進(jìn)行檢測(cè)。靈敏度高、熒光素標(biāo)記的二抗可用于多種抗原的檢測(cè)，但非特異性熒光增多。2021/4/2732免疫熒光法IF直接法熒光素直接標(biāo)記抗體，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。特 第二節(jié) 淋巴細(xì)胞的測(cè)定 測(cè)定淋巴細(xì)胞的功能，可以判斷機(jī)體的細(xì)胞免疫或體液免疫水平。 測(cè)定淋巴細(xì)胞功能試驗(yàn)應(yīng)用于功能性食品等研究中。2021/4/2733 第二節(jié) 測(cè)定淋巴細(xì)胞的功能，可T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)T細(xì)胞功能測(cè)定細(xì)胞毒試驗(yàn)2021/4/2734T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)T細(xì)胞功能測(cè)定細(xì)胞毒試驗(yàn)2021/4/27T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn) T淋巴細(xì)胞在

15、有絲分裂原或抗原刺激下可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，產(chǎn)生一系列形態(tài)變化。細(xì)胞變大、細(xì)胞漿增多、出現(xiàn)空泡、核仁明顯、核染色質(zhì)疏松等。2021/4/2735T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn) T淋巴細(xì)胞在有絲分裂原或抗原T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)形態(tài)學(xué)方法-鏡檢淋巴母細(xì)胞3H-TdR摻入法氚標(biāo)記胸腺嘧啶核苷（Thymidine ribosode)滲入法。測(cè)定DNA增殖的量(也可用于測(cè)NK細(xì)胞活性)MTT比色法細(xì)胞活化增殖水平（可溶性噻唑鹽，代謝后產(chǎn)生蘭紫色物）T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)2021/4/2736T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)形態(tài)學(xué)方法-鏡檢淋巴母細(xì)胞T淋巴細(xì)胞增殖 根據(jù)形態(tài)結(jié)構(gòu)，計(jì)算淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，即淋巴母細(xì)胞的含量形態(tài)

16、學(xué)方法2021/4/2737 根據(jù)形態(tài)結(jié)構(gòu)，計(jì)算淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)形態(tài)學(xué)方法2021/4/2 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程中，細(xì)胞DNA合成大量增多。在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷（ 3H-TdR ），使3H-TdR滲入到DNA中，根據(jù)細(xì)胞內(nèi)核素的量可判斷淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化程度。3H-TdR摻入法2021/4/2738 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程中，細(xì)胞DNA合成大3H-TdR摻入MTT比色法 MTT是一種黃色可溶性噻唑鹽，摻入細(xì)胞后，在細(xì)胞活化增殖時(shí)通過(guò)線粒體能量代謝過(guò)程，MTT代謝形成藍(lán)紫色甲瓚沉積于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞周圍，形成的甲瓚的量與細(xì)胞活化增殖的程度成正相關(guān)。2021/4/2739MTT比色法 MTT是一種黃色可溶

17、性噻唑鹽，摻入細(xì)20細(xì)胞毒試驗(yàn)細(xì)胞毒試驗(yàn)乳酸脫氫酶法細(xì)胞凋亡檢查法2021/4/2740細(xì)胞毒試驗(yàn)細(xì)胞毒試驗(yàn)乳酸脫氫酶法細(xì)胞凋亡檢查法2021/4/ 乳酸脫氫酶法LDH在胞漿內(nèi)含量豐富，正常時(shí)不能通過(guò)細(xì)胞膜，當(dāng)細(xì)胞受損傷或死亡時(shí)可釋放到細(xì)胞外，此時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活性與細(xì)胞死亡的數(shù)目成正比，用比色法測(cè)定。乳酸脫氫酶法2021/4/2741 乳酸脫氫酶法LDH在胞漿內(nèi)含量豐乳酸脫氫酶法2 細(xì)胞凋亡檢查法靶細(xì)胞被CTL殺傷后，可發(fā)生細(xì)胞凋亡。方法有形態(tài)學(xué)法、瓊脂糖凝膠電泳、流式細(xì)胞儀等。細(xì)胞凋亡檢查法2021/4/2742 細(xì)胞凋亡檢查法靶細(xì)胞被CTL細(xì)胞凋亡檢查法202B細(xì)胞功能測(cè)定 B細(xì)胞的數(shù)目和功能測(cè)定是反應(yīng)機(jī)體體液免疫水平的重要指標(biāo)。2021/4/2743B細(xì)胞功能測(cè)定 B細(xì)胞的數(shù)目和功能測(cè)定是反應(yīng)機(jī)體體液2抗體形成細(xì)胞試驗(yàn) 用