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文檔簡介

1、TUNEL法檢測細胞凋亡實驗原理和方法tunel完成第一頁，共10頁。TUNELTUNEL的原理TUNEL的操作步驟結(jié)果及注意事項第二頁，共10頁。主要試劑1. 緩沖液(Labeling Buffer)： 用于維持一定的反應條件，含有以下成分：500mmol/L二甲胂酸鉀、 pH7.2 10mmol/L CoCl2 (氯化鈷)、1mmol/L DTT(二硫蘇糖醇)。2.末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT) ： 催化3-OH末端 dUTP反應的關(guān)鍵酶3.熒光素-dUTP ： TdT的底物和本實驗的標記物4.蛋白酶K： 消化組織，增加細胞通透性 第三頁，共10頁。TUNEL的原理凋亡細胞的特征是:內(nèi)源

2、性核酸內(nèi)切酶被激活，細胞自身的染色質(zhì)DNA被切割，出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口，并產(chǎn)生與DNA斷點數(shù)目相同的 3-OH末端 。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase TdT)能將脫氧核糖核苷酸連接到DNA的3-末端。TUNEL的原理是：用熒光素（fluorescein）標記的脫氧核糖核苷酸，在TdT 的作用下連接到凋亡細胞中斷裂DNA的3-OH末端，用熒光顯微鏡即可觀察結(jié)果。在此基礎上連接辣根過氧化酶標記的熒光素抗體，可進一步放大檢測信號，并且普通顯微鏡觀察實驗結(jié)果。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3-OH形成，很少能夠被染色。 第四頁，共10頁。TUNEL原理第五頁，共10頁。標本處理第六頁，共10頁。實驗步驟第七頁，共10頁。實驗流程第八頁，共

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