石斛屬植物遺傳多樣性的簡單重復(fù)間系列分析

1、石斛屬植物遺傳多樣性的簡樸重復(fù)間系列闡發(fā)【摘要】目的研究我國石斛屬植物間的親緣干系。要領(lǐng)從55個ISSR引物中挑選出14個多態(tài)性好的引物對石斛屬Dendrbiu植物基因組DNA舉行簡樸重復(fù)間序列ISSR闡發(fā)。使用PPGENE32軟件盤算ISSR擴(kuò)增產(chǎn)物的NEis基因多樣性指數(shù)H和Shannn信息指數(shù)I，標(biāo)識表記標(biāo)幟體系的有用等位基因數(shù)(effetivenuberfalleles,NE)。應(yīng)用NTSYS3.0軟件盤算Neis遺傳間隔和遺傳相似系數(shù)。根據(jù)非加權(quán)均勻間隔法(UPGA)構(gòu)建聚類干系圖。效果14條引物共擴(kuò)增出123條帶，多態(tài)性帶112條，約占總數(shù)的91.06%，均勻每個引物擴(kuò)增的DNA帶

2、數(shù)為8.79條。Neis基因多樣性指數(shù)H為0.3519，Shannn信息指數(shù)I為0.5282，有用等位基因數(shù)NE為1.5945，種間的相似系數(shù)介于0.09090.6957，均勻為0.3779。結(jié)論我國石斛品種的遺傳底子比力富厚，ISSR分子標(biāo)識表記標(biāo)幟構(gòu)建的親緣干系樹狀圖與經(jīng)典分類體系根本同等?！娟P(guān)鍵詞】石斛；簡樸重復(fù)間序列；遺傳多樣性Keyrds：Dendrbiu;ISSR;Genetidiversity石斛DendrbiuS.是我國傳統(tǒng)珍貴中藥材，藥用汗青久長，具有滋陰養(yǎng)胃、生津止渴的成果。漫衍于亞洲熱帶、亞熱帶地域和平靜洋島嶼，我國有74個種和2個變種，重要漫衍于秦嶺淮河以南諸省1，已被

3、國度列為瀕危滅盡的植物藥材之一。石斛種質(zhì)資源富厚，泉源和學(xué)名比力雜亂2，同屬植物作石斛入藥的種類龐大，差異泉源的石斛在化學(xué)身分、含量及藥理活性等方面有必然差異3，同時人們對石斛屬種質(zhì)資源種的分類和演化等方面的研究較少，這都攔阻了石斛種質(zhì)資源的公正開掘使用。我們應(yīng)用簡樸重復(fù)間序列inter-siplesequenerepeat,ISSR標(biāo)識表記標(biāo)幟技能對28種石斛舉行闡發(fā)，以確定它們之間的遺傳差異和種間親緣干系，為石斛屬植物體系學(xué)研究、種質(zhì)資源的庇護(hù)和使用提供科學(xué)根據(jù)與參考。1東西與要領(lǐng)1.1質(zhì)料實行所用石斛植物采自我國石斛主產(chǎn)區(qū)：云南、安徽、廣東、貴州等省區(qū)的原始叢林，現(xiàn)被整叢栽種于山東理工大

4、門生命科學(xué)學(xué)院植物構(gòu)造造就實行室，以便實時取材和不雅察見表1，實行樣品經(jīng)著花斷定。1.2儀器與試劑PR儀PT-200,JResearh,In,USA)；電泳儀DYY-8型；北京六一儀器廠；電泳槽DYp-34A型；北京六一儀器廠；HeraeusStrats離心機(jī)；Alpha2200凝膠成像體系。TaqDNA聚合酶、dNTPs和200bpDNAladder北京天根公司，AgarsePrega公司，TABSiga公司，溴化乙錠Fluka公司，Tris-HlUltraPure、EDTA和巰基乙醇上海生工公司。ISSR引物根據(jù)加拿年老倫比亞大學(xué)(UB)宣布的序列，由上海生工生物技能辦事合成。表1實行質(zhì)料

5、泉源及網(wǎng)羅地略1.3要領(lǐng)表2ISSR引物的多態(tài)性略2效果2.1引物挑選和遺傳多樣性闡發(fā)ISSR擴(kuò)增片斷的巨細(xì)在2002000bp之間見圖1。14個ISSR引物共擴(kuò)增出123條帶，此中多態(tài)性帶有112條，多態(tài)性比率PPB為91.06%。各引物檢測到的ISSR位點數(shù)不盡雷同，在416之間，均勻每個引物可檢測出8.79個位點見表2，均勻多態(tài)性位點比率范疇為66.7%100%。每個位點的有用等位基因數(shù)Ne為1.5945，NEis基因多樣性指數(shù)H為0.3519，Shannn信息指數(shù)I為0.5282。質(zhì)料間的遺傳相似系數(shù)GS漫衍在0.09090.6957之間，均勻相似系數(shù)為0.3779，以上數(shù)據(jù)表白，石斛

6、植物具有較富厚的遺傳多樣性。圖1引物UB807的ISSR擴(kuò)增譜帶略2.2聚類闡發(fā)根據(jù)ISSR標(biāo)識表記標(biāo)幟盤算的Neis遺傳間隔矩陣，按UPGA法構(gòu)建了28種石斛植物間的遺傳干系聚類圖見圖2。由圖2可見，試驗質(zhì)料分為5個類群，第1類包羅石斛組的鐵皮石斛、金釵石斛、晶帽石斛、櫻石斛、細(xì)莖石斛、線葉石斛、滇桂石斛、流蘇石斛和大苞鞘石斛，以及黑毛組的黑毛石斛和翅梗石斛，而?中國植物志?并未對喉紅石斛舉行分別，本實行支持喉紅石斛分別在石斛組；石斛組的霍山石斛、尖刀唇石斛、束花石斛、曲莖石斛、疏花石斛和距囊組的紅花石斛分別為第2類；石斛組兜唇石斛、腫節(jié)石斛、報春石斛、獨角石斛、細(xì)葉石斛、玫瑰石斛和禾葉組的

7、竹枝石斛分別為第3類；頂葉組的密花石斛和鼓槌石斛為第4類；第5類是圓柱葉組的海南石斛。聚類效果表現(xiàn)ISSR分子標(biāo)識表記標(biāo)幟構(gòu)建的親緣干系樹狀圖與經(jīng)典分類體系較同等，在分子程度上表現(xiàn)了我國部門石斛屬植物間的親緣干系。3討論3.1中國石斛植物資源的遺傳多樣性石斛經(jīng)恒久的異花授粉和天然選擇，其遺傳配景非常龐大，某些種之間的形態(tài)特性相差甚遠(yuǎn)。中藥石斛類藥材基源龐大，雜亂征象嚴(yán)峻，因此研究石斛植物的遺傳多樣性黑白常需要的。SSR序列的進(jìn)化率比大多數(shù)其他范例的DNA都高，輕易出現(xiàn)高度變異，因此ISSR標(biāo)識表記標(biāo)幟可檢測出基因組很多位點的差異而表示出較高的多態(tài)性8。我們用ISSR標(biāo)識表記標(biāo)幟技能對28種石斛

8、植物舉行了基因組DNA多態(tài)性闡發(fā)，效果表現(xiàn)ISSR分子標(biāo)識表記標(biāo)幟能建立它們之間的親緣干系，表白我國石斛植物資源非常富厚，存在著很高的遺傳多樣性。圖2基于ISSR數(shù)據(jù)的石斛屬植物遺傳分化聚類圖略3.2ISSR技能在石斛屬植物研究中的應(yīng)用在石斛植物形態(tài)分類方面吉占和曾把我國石斛屬的57個種分別為9個組1，別離為劍葉組、圓柱葉組、禾葉組、心葉組、基腫石斛組、草葉組、黑毛組、頂葉組、大花石斛組。?中國植物志?把我國石斛屬的74個種分別為12個組，別離為禾葉組、頂葉組、石斛組、心葉組、瘦軸組、叉唇組、距囊組、黑毛組、草葉組、基腫組、劍葉組、圓柱葉組。本研究在分子程度上的ISSR聚類效果與經(jīng)典的形態(tài)分類

9、學(xué)效果根本同等，在分子程度上表現(xiàn)了我國部門石斛屬植物間的親緣干系，ISSR檢測到的僅是石斛基因組的部門位點，需積聚更多的ISSR檢測位點并結(jié)合別的DNA闡發(fā)技能對其體系分類與親緣干系做出更科學(xué)的評價，也存在與經(jīng)典分類學(xué)結(jié)論不完全符合的地方，在閾值0.42處，黑毛組的黑毛石斛和翅梗石斛、距囊組的紅花石斛和禾葉組的竹枝石斛別離與石斛組聚為三類，還必要進(jìn)一步探究。【參考文獻(xiàn)】1吉占和.中國石斛屬的開端研究J.植物分類學(xué)報,1980,184:427.2王德群,彭華勝.霍山石斛的名實雜亂與原植物J.中國中藥雜志,2022,2912:1198.3白音,王文全,包英華,等.差異產(chǎn)地美花石斛形態(tài)及多糖含量比力

10、研究J.中藥材,2022,30(2):130.4彭銳,宋洪元,李泉森,等.石斛總DNA的提取及斷定J.中國中藥雜志,2022,2812:1129.5Nei.AnalysisfgenediversityinsubdividedppulatinsJ.PrNatlAadSiUSA,1973,70:3321.6LentinR.ApprtinentfhuandiversityJ.JEvlBil,1972,6:381.7Nei,LiH.atheatialdelsfrstudyinggenetidistaneintersfrestritinendnuleasesJ.PreedingftheNatinalAadeyfSienes,1979,