齊魯醫(yī)學血清堿性磷酸酶活力測定

1、血清堿性磷酸酶活力測定(磷酸苯二鈉法)2021/9/301酶活力：也稱酶活性，是表示催化某一特定反應的能力?？梢杂迷谝欢l件下所催化的某一特定化學速度表示。 酶催化反應速度越快，酶活力升高，反之活力愈低。 底物減少量或生成物增加量酶促反應速度= 單位時間2021/9/302酶的活力單位國際單位：Katal，1s轉化1mol底物的酶量臨床表示：Kings，如血清谷丙轉氨酶活力單位，每100ml血清在37。pH=7.4的條件下與底物作用60min，生成1mol丙酮酸所需的酶量為1個活力單位酶的比活力：單位質量酶蛋白或單位體積酶制劑所含有酶活力單位數，即酶活力濃度。酶活力的測定方法 1.終止測定法（

2、定時法或終點法） 2.動力學分析法（連續(xù)監(jiān)測法或速率法）2021/9/303實驗目的熟悉酶活性測定方法的一般原理掌握血清ALP測定原理與臨床意義2021/9/304實驗原理堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中作用于磷酸苯二鈉，使之水解生成酚和磷酸。酚在堿性溶液中與4-氨基安替比林作用，經鐵氰化鉀氧化形成紅色醌類化合物，其顏色深淺與ALP活性成正比。磷酸苯二鈉+H2O 苯酚+磷酸氫二鈉苯酚+4-氨基安替比林 紅色醌亞胺衍生物ALPpH=10鐵氰化鉀2021/9/305實驗器材和試劑：（一）器材：5ml移液管，1ml移液管，100或200ul微量可調式移液器，721E分光光度計，1cm比色皿，37 恒溫水?。ǘ?/p>

3、）試劑： 10.1mol/L碳酸鹽緩沖液(pH10.0) 稱取無水碳酸鈉6.36g，碳酸氫鈉3.36g，4-氨基安替比林1.5g，溶于800mL蒸餾水中，定容至1L。置棕色瓶中保存。 220mmol/L磷酸苯二鈉溶液 先將500ml蒸餾水煮沸，迅速加入磷酸苯二鈉2.18g(磷酸苯二鈉如含2分子結晶水，則應稱取2.54g) ，冷卻后加氯仿2ml防腐，在4冰箱保存。（用剩的溶液不應再倒回瓶中） 3鐵氰化鉀的硼酸溶液 稱取鐵氰化鉀2.5g，硼酸17g，各自溶于蒸餾水400ml中，兩液混合后，加蒸餾水至1L，置棕色瓶中避光保存(如出現藍綠色即棄去)。 4酚標準工作液（0. 05mg/ml）：購買合格的

4、二級標準品。2021/9/306實驗操作1.取試管4支，按下表操作測定管標準管空白管對照管血清（ml）0.100酚標準液0.100蒸餾水0.100pH10碳酸鹽緩沖液1.001.001.001.00混勻，37水浴保溫5min，同時將底物預熱底物液1.001.001.001.00混勻，37水浴保護15min鐵氰化鉀溶液3.003.003.003.00血清0.1002.立即混勻。在510nm波長處比色，以蒸餾水調零點，讀取各管吸光度。2021/9/307計算 ALP活性=（A測定A對照）/（A標準A空白）*0.05*100(金氏單位）2021/9/308臨床意義：血清中ALP活力測定在臨床常作為肝

5、膽疾病和骨骼疾病的臨床輔助診斷指標。 1血清ALP活性升高可能原因如下 ：肝膽疾?。鹤枞渣S疸、急性或慢性黃疸性肝炎、肝癌等；骨骼疾?。河捎诠堑膿p傷或疾病使成骨細胞內所含高濃度的ALP釋放進入血液中，引起血清ALP活性增高，如纖維性骨炎、成骨不全癥、佝僂病、骨軟化病、骨轉移癌和骨折修復愈合期等。2血清ALP活性降低比較少見： 主要見于呆小病、重癥慢性腎炎、乳糜瀉、貧血、惡病質等。2021/9/309注意事項目前市售的酚標準液多數為安瓿瓶，開后不能久置底物液中不應含有酚，如空白管顯紅色，說明磷酸苯二鈉已分解，不宜使用。加入鐵氰化鉀后必須迅速混勻，否則對實驗結果會有影響。2021/9/3010標準曲線法制備如下： 取試管6支，分別加酚標準液(1ml=01mg)，0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4ml，各管依次加復合基質液3.1、3.05、3.0、2.9、2.8、2.7ml。混勻后37水浴保溫5分鐘，各管加入1.0ml堿性溶液，再加0.5鐵氰化鉀2.0ml，立即混勻。靜置1