革蘭氏陽(yáng)性產(chǎn)芽孢桿菌課件-2

1、第十二章 革蘭氏陽(yáng)性產(chǎn)芽孢桿菌內(nèi)容提要第一節(jié) 芽孢桿菌屬 炭疽芽孢桿菌第二節(jié) 梭菌屬 產(chǎn)氣莢膜梭菌 肉毒梭菌 破傷風(fēng)梭菌1第十二章 革蘭氏陽(yáng)性產(chǎn)芽孢桿菌內(nèi)容提要第一節(jié) 芽孢桿菌屬1第一節(jié) 芽孢桿菌屬（Bacillus)炭疽芽孢桿菌 炭疽芽孢桿菌炭疽的病原體人獸共患病一、形態(tài)及染色特性 革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，無(wú)鞭毛，不運(yùn)動(dòng)。形成芽孢、莢膜。 動(dòng)物組織和血液:單在或呈短鏈，竹節(jié)狀、有豐厚的莢膜人工培養(yǎng)物:形成長(zhǎng)鏈，形成芽胞，一般不形成莢膜2第一節(jié) 芽孢桿菌屬（Bacillus)炭疽芽孢桿菌 二、培養(yǎng)特性 需氧菌，適溫37，營(yíng)養(yǎng)要求不高普通肉湯：37，24h培養(yǎng)，上層液透明，形成白色絮狀沉淀普通瓊脂：大

2、而扁平、灰白色，不透明、表面干燥、 邊緣不整齊 火焰狀菌落。低倍鏡觀(guān)察菌落邊緣呈卷發(fā)狀，不溶血。明膠高層：呈倒置松樹(shù)狀串珠反應(yīng)：0.5單位/ml青霉素的培養(yǎng)基中，細(xì)胞壁合成受抑制， 菌體膨脹相互粘連形成“串珠狀”普通瓊脂上的菌落低倍鏡觀(guān)察菌落串珠反應(yīng)試驗(yàn)3二、培養(yǎng)特性 需氧菌，適溫37，營(yíng)養(yǎng)要求不高普通肉湯三、抵抗力繁殖體的抵抗力不強(qiáng)6030-60min即可殺死常用消毒劑均能將其殺死青霉素等多種抗生素高度敏感芽胞的抵抗力特別強(qiáng)在干燥狀態(tài)下可長(zhǎng)期存活121 滅菌5-10min芽胞對(duì)碘特別敏感 0.04-10 min4三、抵抗力繁殖體的抵抗力不強(qiáng)6030-60min即可殺死常四、抗原結(jié)構(gòu)是芽胞外膜

3、層含有的抗原決定簇，特異性抗原具有免疫原性和血清學(xué)診斷價(jià)值。莢膜半抗原，與毒力有關(guān)，無(wú)保護(hù)作用不穩(wěn)定，反應(yīng)性特異可用于血清學(xué)鑒定細(xì)胞壁及菌體內(nèi)的半抗原（多糖），與毒力無(wú)關(guān)性質(zhì)穩(wěn)定（耐腐敗、熱）Ascoli反應(yīng)胞外蛋白質(zhì)抗原（炭疽毒素），具有免疫原性免疫保護(hù)莢膜抗原：菌體抗原：保護(hù)性抗原：芽孢抗原：5四、抗原結(jié)構(gòu)是芽胞外膜層含有的抗原決定簇，特異性抗原莢膜半五、致病性本菌可引致各種家畜、野獸和人類(lèi)的炭疽易感性最強(qiáng)牛、綿羊、鹿等其次馬、駝、豬、山羊等次之犬、貓、食肉獸等則有相當(dāng)大的抵抗力禽類(lèi)一般不感染感染途徑：消化道、呼吸道、皮膚創(chuàng)傷或通過(guò)吸血昆蟲(chóng)傳播食草動(dòng)物炭疽常表現(xiàn)為急性敗血癥豬炭疽多表現(xiàn)為慢

4、性的咽部局限感染犬、貓和食肉獸則多表現(xiàn)為腸炭疽感染表現(xiàn) 人類(lèi)腸炭疽、肺炭疽或皮膚炭疽實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：小鼠、豚鼠、家兔易感6五、致病性本菌可引致各種家畜、野獸和人類(lèi)的炭疽易感性最強(qiáng)牛莢膜多肽：莢膜抗吞噬，抑制抗體的作用，使易于擴(kuò)散，引起 感染乃至敗血癥。動(dòng)物無(wú)保護(hù)作用，可用于細(xì)菌鑒定 毒力因素：炭疽毒素：水腫毒素(edema factor,EF) 致死毒素(lethal factor,LF) 保護(hù)性抗原（PA）三種成分單獨(dú)無(wú)生物學(xué)活性（毒性），三種相結(jié)合時(shí)，表現(xiàn)毒性作用增強(qiáng)微血管的通透性，改變血液循環(huán)，損害腎功能，干擾糖代謝導(dǎo)致動(dòng)物死亡具有免疫原性，有保護(hù)作用7莢膜多肽：莢膜抗吞噬，抑制抗體的作用，使

5、易于擴(kuò)散，引起毒力因六、免疫性患過(guò)炭疽的動(dòng)物，能獲得堅(jiān)強(qiáng)的免疫力。菌苗有第二號(hào)炭疽芽胞苗無(wú)毒炭疽芽胞苗抗炭疽血清保護(hù)性抗原炭疽毒素刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體抗感染作用8六、免疫性患過(guò)炭疽的動(dòng)物，能獲得堅(jiān)強(qiáng)的免疫力。菌苗有第二號(hào)炭七、微生物學(xué)診斷1.細(xì)菌學(xué)檢查采病料：嚴(yán)禁剖檢，局部采料（耳根部、肋間采取脾臟、水腫液或滲出物、腸炭疽可采取糞便等（1）涂片鏡檢：堿性美藍(lán)瑞氏染色姬姆薩染色有莢膜竹節(jié)狀大桿菌組織病料堿性美藍(lán)革蘭氏染色 具有芽胞的鏈桿菌 培養(yǎng)物9七、微生物學(xué)診斷1.細(xì)菌學(xué)檢查采病料：嚴(yán)禁剖檢，局部采料（耳（2）分離培養(yǎng)：普通瓊脂血液瓊脂碳酸氫鈉瓊脂觀(guān)察生長(zhǎng)特性生物學(xué)特性檢測(cè)被檢材料強(qiáng)度株形成莢膜

6、動(dòng)物機(jī)體內(nèi)含碳酸氫鈉或血清培養(yǎng)基（在CO2條件下培養(yǎng)）炭疽桿菌與 噬菌體具有高度的特異性裂解炭疽桿菌形成噬菌斑被檢菌含青霉素培養(yǎng)基形成串珠生長(zhǎng)抑制穿刺接種于明膠培養(yǎng)基18-20 培養(yǎng)4-7d呈倒置松樹(shù)狀* 莢膜檢查：* 噬菌體裂解試驗(yàn)：* 串珠試驗(yàn)：* 明膠穿刺試驗(yàn)：細(xì)菌噬菌斑細(xì)菌噬菌體裂解試驗(yàn)串珠試驗(yàn)串珠細(xì)菌10（2）分離培養(yǎng)：普通瓊脂觀(guān)察生長(zhǎng)特性被檢材料強(qiáng)度株形成莢膜動(dòng)2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：在內(nèi)臟、血液中有大量帶莢膜的竹節(jié)狀菌體剖檢變化：注射部位呈膠樣水腫脾臟腫大3.血清學(xué)檢查： 熱沉淀反應(yīng)（ Ascoli氏沉淀反應(yīng)）間接血凝試驗(yàn)串珠熒光抗體檢查被檢抗原炭疽芽孢串珠試驗(yàn)與熒光抗體法結(jié)合病料(1:5

7、乳懸液)或培養(yǎng)物皮下接種：小鼠0.1 ml 兔0.2-0.3 ml敗血癥而死亡112.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：在內(nèi)臟、血液中有大量帶莢膜的竹節(jié)狀菌體剖檢變化第二節(jié) 梭菌屬 (Clostridium)一、屬的特征* 菌體桿狀，兩端鈍圓或尖銳，常單在，革蘭氏染色陽(yáng)性* 形成卵圓形或圓形的芽孢，常使菌體膨大，呈梭狀二、梭菌分布* 梭菌在自然界分布廣泛土壤、污水、腐爛植物、動(dòng)物腸道* 人與動(dòng)物的傷口及軟組織感染灶三、病原梭菌及梭菌病的診斷原則* 本屬有80多種，多為非病原菌，常見(jiàn)的致病菌約11種* 多為人獸共患病病原* 病原梭菌通常均能產(chǎn)生外毒素，其毒力強(qiáng)12第二節(jié) 梭菌屬 (Clostridium)一、屬的特征*

8、 菌產(chǎn)氣莢膜梭菌 (Cl. Perfringens)* 本菌又稱(chēng)魏氏梭菌或產(chǎn)氣莢膜桿菌* 在自然界分布極廣土壤、飼料、污水、乳汁、消化道糞便等* 在一定條件下，可引起多種嚴(yán)重疾病一、形態(tài)及染色特性菌體直桿狀，兩端鈍圓，革蘭氏陽(yáng)性，形成芽胞（中央或近端）多數(shù)菌株在動(dòng)物體內(nèi)可形成莢膜13產(chǎn)氣莢膜梭菌 (Cl. Perfringens)* 本菌又稱(chēng)二、培養(yǎng)及生化特性 本菌對(duì)厭氧條件要求不太嚴(yán)格加入葡萄糖、血液則生長(zhǎng)更好，適溫37 肝片肉湯；生長(zhǎng)迅速，5-6h 出現(xiàn)混濁，產(chǎn)生大量氣體葡萄糖瓊脂； 37 ，24h形成 ，勛章樣菌落血液瓊脂；灰白色，圓形，邊緣呈鋸齒狀的大菌落， 周?chē)凶鼐G色溶血區(qū)，出現(xiàn)雙

9、層溶血環(huán) 為溶血（內(nèi)環(huán)透明，外環(huán)淡綠色）。牛乳培養(yǎng)基：洶涌發(fā)酵或暴烈發(fā)酵分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，酪蛋白凝固，變成海綿狀14二、培養(yǎng)及生化特性 本菌對(duì)厭氧條件要求不太1515三、致病性 菌型：根據(jù)產(chǎn)生毒素種類(lèi)，細(xì)菌分為A、B、C、D、E 等5個(gè)型* 致病作用主要在于所產(chǎn)生的毒素蛋白質(zhì)* 毒素有12種，小寫(xiě)希臘字母表示、.； 其中、 、 和是主要壞死、致死性、溶血性毒素 有些菌株還產(chǎn)生腸毒素細(xì)菌菌型所致疾病產(chǎn)氣莢膜梭菌A型人氣性壞疽和食物中毒, 壞死性腸炎(牛,仔豬), 兔腹瀉等產(chǎn)氣莢膜梭菌B型羔羊痢疾,犢牛、羔羊、綿羊和山羊的腸毒血癥或壞死性腸炎產(chǎn)氣莢膜梭菌C型綿羊猝狙, 羔羊、犢牛、仔豬、綿羊的腸毒

10、血癥和壞死性腸炎以及人的壞死性腸炎,仔豬紅痢, 產(chǎn)氣莢膜梭菌D型羔羊、綿羊、山羊、牛的腸毒血癥, 人腸毒血癥產(chǎn)氣莢膜梭菌E型犢牛、羔羊腸毒血癥, 兔腹瀉.表: 產(chǎn)氣莢膜梭菌菌型及所致疾病16三、致病性 菌型：根據(jù)產(chǎn)生毒素種類(lèi)，細(xì)菌分為A、B、C、D四、微生物學(xué)診斷* A型所致氣性壞疽及人食物中毒依靠細(xì)菌分離鑒定* 其余各型所致的各種疾病腸道內(nèi)產(chǎn)生毒素所致，靠毒素檢測(cè)1.細(xì)菌學(xué)檢查腸內(nèi)容物肝片肉湯 熱處理80 ，15min37 培養(yǎng)觀(guān)察觀(guān)察要點(diǎn)：形態(tài)及染色特點(diǎn)：革蘭氏陽(yáng)性粗大桿菌培養(yǎng)特性：厭氧，生長(zhǎng)快，不運(yùn)動(dòng)，菌落形狀，雙層溶血環(huán)生化特性：暴烈發(fā)酵細(xì)菌分離培養(yǎng)17四、微生物學(xué)診斷* A型所致氣性

11、壞疽及人食物中毒依靠細(xì)菌分2.腸內(nèi)容物毒素檢查方法及程序：腸內(nèi)容物（回腸） 離心(3000rmp,30min)取上清夜 一份加熱（破壞）（60 ，30min）一份不加熱動(dòng)物靜注小鼠；0.1-0.3ml兔；1-3ml 觀(guān)察結(jié)果不加熱組常于數(shù)分鐘至十小時(shí)內(nèi)死亡加熱組不死亡3.細(xì)菌菌型測(cè)定：被檢毒素+各型抗毒素血清中和毒素37.40min小鼠靜注觀(guān)察24h定型182.腸內(nèi)容物毒素檢查方法及程序：腸內(nèi)容物 離心取上清夜肉毒梭菌 (Cl. botulinum)* 廣泛分布于土壤，動(dòng)物腸道，飼料以及食品中* 當(dāng)有適宜營(yíng)養(yǎng)和厭氧環(huán)境時(shí)，生長(zhǎng)繁殖產(chǎn)生肉毒毒素1.形態(tài)及染色特性 菌體多呈直桿狀，單在或成雙，革蘭

12、氏陽(yáng)性。著生周鞭毛形成芽胞位于菌體近端，大于菌體直徑，使細(xì)胞膨大19肉毒梭菌 (Cl. botulinum)* 廣泛分布于土壤，2.培養(yǎng)特性 專(zhuān)性厭氧，適溫37（產(chǎn)毒素最適溫25-30）， 6.5% NaCl,20% 膽汁，pH8.5抑制生長(zhǎng)，營(yíng)養(yǎng)要求不高血液瓊脂平板：成圓形到扇狀（1-6mm），不規(guī)則菌落， 溶血202.培養(yǎng)特性 專(zhuān)性厭氧，適溫37（產(chǎn)毒3.抵抗力本菌繁殖體抵抗力弱：加熱80 30min或100 10min殺死芽孢抵抗力極強(qiáng)：濕熱1005-7h高壓105100min120 5-20min干熱18015min肉毒毒素抵抗力較強(qiáng)耐酸（耐受 pH 3-6），對(duì)堿敏感（pH8.5以上

13、即破壞）0.1高錳酸鉀加熱80 30min或100 10min，破壞213.抵抗力本菌繁殖體抵抗力弱：加熱80 30min或1004.抗原性及分型* 根據(jù)毒素抗原性分為A、B、C、D、E、F、G等7個(gè)型* 具有良好免疫原性抗毒素，有型特異性，無(wú)交叉反應(yīng)5.肉毒毒素* 蛋白質(zhì)外毒素，性質(zhì)穩(wěn)定，毒性最強(qiáng)的神經(jīng)麻痹毒素之一如A型毒素毒素 lmg殺死2億只小鼠，人致死量約0.1ug * A-G型毒素合成時(shí)為無(wú)毒性的毒素前體，被水解后表現(xiàn)毒性* G型毒素須胰酶激活后才有毒性224.抗原性及分型* 根據(jù)毒素抗原性分為A、B、C、D、E神經(jīng)毒亞單位非毒性亞單位肉毒毒素前體小腸吸收亞單位分解抗胃蛋白酶水解淋巴

14、、血流作用于靶器官細(xì)胞阻斷乙酰膽堿的釋放導(dǎo)致肌肉弛緩型麻痹6. 致病性* 所有溫血?jiǎng)游锖屠溲獎(jiǎng)游飳?duì)肉毒毒素均有感受性* A、B、E及F型毒素引起人的食物中毒23神經(jīng)毒亞單位非毒性亞單位肉毒毒素前體小腸吸收抗胃蛋白酶水解淋7. 微生物學(xué)診斷主要方法被檢材料中檢查肉毒毒素（1）肉毒毒素檢測(cè)A.材料處理：被檢材料離心取上清液胰酶液37， 60min不處理B.檢出試驗(yàn)：分別小鼠腹腔注射（0.5mL/只）觀(guān)察4d24h內(nèi)發(fā)病、死亡最終死于呼吸麻痹主要表現(xiàn)豎毛、四肢癱軟、呼吸困難可能有肉毒毒素存在247. 微生物學(xué)診斷主要方法被檢材料中檢查肉毒毒素（1）肉毒C.證實(shí)試驗(yàn)：第一組（毒素中和組）+ 肉毒抗毒素

15、第二組（毒素滅活組）+ 煮沸10min第三組（毒素對(duì)照組）+ 緩沖液小鼠腹腔注射保護(hù)存活發(fā)病死亡肉毒毒素陽(yáng)性被檢材料小鼠腹腔注射保護(hù)存活小鼠腹腔注射原理：* 肉毒毒素 +抗毒素能中和毒素 * 肉毒毒素煮沸10min 破壞毒素D.定型試驗(yàn)：原理：* 肉毒毒素 +抗毒素能中和毒素 * 抗毒素能中和相應(yīng)的毒素 有型特異性25C.證實(shí)試驗(yàn)：第一組（毒素中和組）+ 肉毒抗毒素第二組（毒素（2）細(xì)菌分離與鑒定A.被檢材料熱處理：檢驗(yàn)材料庖肉培養(yǎng)基80 加熱30min處理（利用芽胞耐熱特點(diǎn)）增菌液B.細(xì)菌分離及鑒定：檢驗(yàn)材料增菌液血液瓊脂乳糖牛奶卵黃瓊脂平板37 厭氧培養(yǎng)48h挑取可疑菌落形態(tài)學(xué)觀(guān)察生化特性

16、檢查C.產(chǎn)毒素檢查：分離菌株庖肉培養(yǎng)基，置30培養(yǎng)5d毒素檢測(cè)毒素定型定菌型26（2）細(xì)菌分離與鑒定A.被檢材料熱處理：檢驗(yàn)材料庖肉培養(yǎng)基8破傷風(fēng)梭菌（Cl.tetani)本菌又名破傷風(fēng)桿菌，引起人畜破傷風(fēng)的病原一.生物學(xué)特性形態(tài)特征：菌體兩端鈍圓、細(xì)長(zhǎng)、正直桿菌，單在革蘭氏陽(yáng)性菌體內(nèi)外均能形成圓形芽胞，位于頂端鼓槌狀無(wú)莢膜，多具周鞭毛而能運(yùn)動(dòng)27破傷風(fēng)梭菌（Cl.tetani)本菌又名破傷風(fēng)桿菌，引起人畜 培養(yǎng)特征：嚴(yán)格厭氧，含有血液、肝湯、庖肉培養(yǎng)基中易生長(zhǎng)肉肝湯和庖肉培養(yǎng)基：輕微渾濁，有顆粒狀或粘稠狀沉淀，產(chǎn)生 特殊臭味血液瓊脂培養(yǎng)基：形成直徑46mm菌落，伴有狹窄溶血環(huán)。28 培養(yǎng)特征：嚴(yán)格厭氧，含有血液、肝湯、庖肉培養(yǎng)基中易生長(zhǎng)肉肝二、致病性病原體皮膚黏膜創(chuàng)傷感染產(chǎn)生強(qiáng)烈毒素局部生長(zhǎng)骨骼肌痙攣1.易感動(dòng)物：馬屬動(dòng)物的易感性最高其次是牛、羊、豬，犬、貓等禽類(lèi)和冷血?jiǎng)游锊幻舾袑?shí)驗(yàn)動(dòng)物家兔、小鼠、大鼠、豚鼠對(duì)毒素易感人易感2.毒素：破傷風(fēng)痙攣毒素破傷風(fēng)溶血素毒力非常強(qiáng)，外毒素，良好抗原性不耐熱，對(duì)氧敏感，與致病性無(wú)關(guān)29二、致病性病原體皮膚黏膜產(chǎn)生強(qiáng)烈毒素局部生長(zhǎng)骨骼肌痙攣1.易 破傷風(fēng)的臨床癥狀特征比較典型，故根據(jù)流行病學(xué)和臨床癥狀，可以基本確診。一般不需微生物學(xué)診斷。 必要時(shí)