熒光蛋白基因的克隆表達(dá)及其蛋白純化

1、基因工程綜合性實(shí)驗(yàn)：熒光蛋白基因的克隆表達(dá)及其蛋白純化已經(jīng)學(xué)會(huì)的技術(shù)第一部分 配制LB培養(yǎng)基第二部分 倒LB固體平板第三部分 接種第四部分 提取質(zhì)粒本節(jié)課實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、觀摩：質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)；二、酶切質(zhì)粒三、瓊脂糖核酸電泳四、質(zhì)粒DNA含量測(cè)定一、觀摩：質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)已經(jīng)提取的質(zhì)粒pMBPRFP取10ul，加50ul大腸桿菌感受態(tài)；在酒精燈下操作以保持無(wú)菌；放入冰中30min；轉(zhuǎn)移到水浴42度熱休克1分半鐘，再放入冰中5分鐘；一、觀摩：質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)加入150ul LB，注意在酒精燈下操作以保持無(wú)菌；送搖床振蕩培養(yǎng)37度30min；涂LB-Amp板；注意在酒精燈下操作以保持無(wú)菌；送37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。

2、一、觀摩：質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)加入150ul LB，注意在酒精燈下操作以保持無(wú)菌；送搖床振蕩培養(yǎng)37度30min；涂LB-Amp板；注意在酒精燈下操作以保持無(wú)菌；送37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。二、瓊脂糖核酸電泳（1）每組稱2克瓊脂糖（Agrose），加TAE緩沖液100ml；微波爐加熱1min左右使之完全融化；冷卻大約到70度左右；加核酸結(jié)合染料1.5ul（戴手套）倒膠；等待凝固。二、瓊脂糖核酸電泳（2）凝固以后放入電泳槽里面；加滿TAE緩沖液；上DNA樣品：每個(gè)組上五個(gè)，一個(gè)為DNA marker，其它三個(gè)為自己提取的樣品（15ul+Loading buffer），一個(gè)是老師提取的樣品；電泳；觀察。二、酶切質(zhì)粒取老師提取的質(zhì)粒pMBPRFP 8ul，加Buffer K 2 ul，加 BamHI 1.5ul，加EcoRI1.5ul后，H2O 7ul,371小時(shí)后走電泳。切2個(gè)樣品.三、瓊脂糖核酸電泳核酸在波長(zhǎng) 260nm 處有強(qiáng)烈的吸收，是由堿基的共軛雙鍵所決定的。這一特性常用作核酸的定性和定量分析。四、質(zhì)粒DNA定量堿基的紫外吸收光譜DNA或RNA的定量A260 = 1.0 相當(dāng)于 50g/ml 雙鏈DNA(dsDNA)40g/ml 單鏈DNA (ssDNA or RNA)20g/ml 寡核苷酸確定樣品中核酸的純度 純 DNA: