微生物學(xué)檢驗(yàn)(第3版)14厭氧菌(自制)課件

1、厭氧菌第十四章學(xué)習(xí)要求掌握厭氧菌的概念及種類。掌握厭氧菌的檢驗(yàn)方法。掌握厭氧性有芽胞桿菌標(biāo)本的采集、 運(yùn)送及檢驗(yàn)方法。了解厭氧性球菌及厭氧無牙胞桿菌的鑒定方法。本章內(nèi)容第一節(jié) 梭狀芽孢桿菌屬第二節(jié) 革蘭陰性無芽孢桿厭氧菌第三節(jié) 革蘭陽(yáng)性無芽孢桿厭氧菌 和放線菌屬概 述厭氧菌是一大群專性厭氧、必須在無氧環(huán)境條件下才能生長(zhǎng)繁殖的細(xì)菌。根據(jù)能否形成芽胞，厭氧菌可分為有芽胞厭氧菌、無芽胞厭氧菌。有芽胞厭氧菌只有1個(gè)菌屬，即梭狀芽胞桿菌屬。梭狀芽胞桿菌能以芽胞形式在自然界中長(zhǎng)期存活。絕大多數(shù)無芽胞厭氧菌存在于人和動(dòng)物體內(nèi)，是構(gòu)成人體正常菌群的主要細(xì)菌。概 述 標(biāo)本采集部位恰當(dāng)正確采集避免污染嚴(yán)格厭氧及時(shí)

2、送檢 標(biāo)本運(yùn)送針筒運(yùn)送法無氧小瓶運(yùn)送法標(biāo)本充盈運(yùn)送法組織塊運(yùn)送法厭氧袋運(yùn)送法下列標(biāo)本無送檢價(jià)值，不宜做厭氧菌培養(yǎng)鼻咽拭子齒齦拭子痰和氣管抽取物胃和腸道內(nèi)容物肛拭接近皮膚和粘膜的分泌物褥瘡潰瘍及粘膜層表面排出的尿或?qū)?陰道或子宮拭子前列腺分泌物兼性厭氧菌 標(biāo)本 增菌 分離培養(yǎng)挑取菌落肉眼觀察涂片鏡檢血標(biāo)本需氧培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)生長(zhǎng)不生長(zhǎng)生長(zhǎng)專性厭氧菌形態(tài)染色 、菌落特征、生化反應(yīng)、藥敏鑒定、氣相色譜梭狀芽胞桿菌屬簡(jiǎn)稱為梭菌屬，是一大群厭氧或微需氧的粗大芽胞桿菌。革蘭氏染色陽(yáng)性，但陳舊培養(yǎng)菌體常為陰性；芽胞為圓形或橢圓形，直徑大于菌體，位于菌體中央、頂端或近端，使菌體膨大呈梭狀。自然界

3、分布廣泛，多數(shù)為腐生菌，少數(shù)致病，能分泌毒素和侵襲性酶類，可使人或動(dòng)物致病。一、破傷風(fēng)梭菌1、形態(tài)染色革蘭染色陽(yáng)性（形成芽胞時(shí)易變?yōu)殛幮裕?，菌體細(xì)長(zhǎng)。無莢膜、有周身鞭毛，能運(yùn)動(dòng)。芽胞正圓形，比菌體粗，位于菌體頂端，使細(xì)菌呈“鼓槌狀” ，為本菌特征。（一）生物學(xué)特性破傷風(fēng)梭菌的芽胞（*）和胞子囊（*）超薄切片，破傷風(fēng)梭菌的芽胞染色2、培養(yǎng)特性：專性厭氧在普通培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，在血平板上呈薄膜狀生長(zhǎng)，菌落半透明、灰白色、邊緣疏松似羽毛，伴溶血在皰肉培養(yǎng)基中，肉渣變黑，有腐敗性惡臭血平板菌落特征3、生化反應(yīng)：不發(fā)酵糖類能明膠液化產(chǎn)硫化氫多數(shù)菌株吲哚陽(yáng)性不還原硝酸鹽(二) 微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本：濃汁、組織液

4、、壞死組織鑒定：直接涂片：菌體形態(tài)、芽孢特征厭氧培養(yǎng)：菌落特征毒力試驗(yàn)毒力試驗(yàn)：毒素注射小鼠小鼠出現(xiàn)癥狀保護(hù)試驗(yàn)：毒素抗毒素注射小鼠無癥狀動(dòng)物實(shí)驗(yàn): 0.10.25ml培養(yǎng)濾液，肌肉或尾根部注射，陽(yáng)性者于注射12-24小時(shí)后出現(xiàn)尾部僵直豎起(旗桿尾)，后腿強(qiáng)直全身肌肉痙攣等特征，甚至死亡。毒力試驗(yàn)（三）臨床意義芽孢繁殖毒素污染臍帶斷端創(chuàng)口發(fā)芽破傷風(fēng)新生兒破傷風(fēng)(臍風(fēng))痙攣致病物質(zhì): (外毒素)破傷風(fēng)痙攣毒素:破傷風(fēng)溶血溶血素致病條件:窄而深的傷口或盲端；局部組織缺血，供氧不足；同時(shí)存在需氧菌或兼性厭氧菌的混合感染。致病特點(diǎn):破傷風(fēng)為創(chuàng)傷性感染；致病需特定條件；破傷風(fēng)梭菌僅在感染局部繁殖，產(chǎn)生毒

5、素，毒素體內(nèi)擴(kuò)散而作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)；以骨骼肌肉強(qiáng)直性收縮為突出臨床表現(xiàn)。早期典型表現(xiàn) 牙關(guān)緊閉苦笑面容后期典型表現(xiàn) 角弓反張二、產(chǎn)氣莢膜梭菌1. 形態(tài)與染色G+粗大桿菌，芽胞呈橢圓形，直徑小于菌體，位于次極端。2. 生化反應(yīng)發(fā)酵葡萄糖、乳糖等，產(chǎn)酸產(chǎn)氣。明膠液化試驗(yàn)陽(yáng)性，H2S產(chǎn)生試驗(yàn)陽(yáng)性，（一）生物學(xué)特性3、培養(yǎng)特性在血液瓊脂平板上菌落較大、灰白色、不透明，邊緣呈鋸齒狀，多數(shù)菌株有雙層溶血環(huán)，內(nèi)環(huán)是毒素的作用，而外環(huán)不完全溶血是毒素所致。 內(nèi)層 外層 (毒素) (毒素)雙層溶血環(huán)3、培養(yǎng)特性Nagler 反應(yīng) 卵黃瓊脂平板上， 毒素能分解卵黃中的卵磷脂，導(dǎo)致菌落周圍出現(xiàn)乳白色混濁圈。若在培

6、養(yǎng)基中加入毒素的抗血清，則不出現(xiàn)混濁菌落 (毒素)Nagler反應(yīng)渾濁圈抗毒素蛋黃瓊脂培養(yǎng)基3、培養(yǎng)特性在皰肉培養(yǎng)基中，產(chǎn)生大量氣體，肉渣不被消化，但變?yōu)榉奂t色。在牛乳培養(yǎng)基中能分解乳糖產(chǎn)酸，使酪蛋白凝固，同時(shí)生成大量氣體，將凝固的酪蛋白沖成海棉狀碎塊。管內(nèi)氣體常將覆蓋在液體上的凡士林層向上推擠，這種現(xiàn)象稱為“洶涌發(fā)酵”，是本菌的特點(diǎn)之一。（二）微生物學(xué)檢查法1.直接涂片鏡檢深部創(chuàng)口取材涂片革蘭陽(yáng)性大桿菌白細(xì)胞少且不典型伴有其他雜菌早期診斷可避免病人最終截肢或死亡（二）微生物學(xué)檢查法2.厭氧培養(yǎng)血瓊脂平板：雙層溶血卵黃瓊脂平板：Nagler 反應(yīng)陽(yáng)性牛乳培養(yǎng)基：洶涌發(fā)酵（三）臨床意義致病物質(zhì)：

7、外毒素、侵襲性酶、莢膜等。所致疾病氣性壞疽食物中毒壞死性結(jié)腸炎三、肉毒梭菌1、形態(tài)與染色革蘭陽(yáng)性粗短桿菌、兩端鈍圓無莢膜，周身鞭毛芽胞呈卵圓形，位于菌體次極端，寬于菌體，使菌體呈“網(wǎng)球拍狀”或“湯匙狀”。（一）生物學(xué)特性2、培養(yǎng)特性嚴(yán)格厭氧普通瓊脂平板：形成直徑3-5的不規(guī)則菌落，能產(chǎn)生脂酶血平板：有溶血卵黃瓊脂平板：菌落周圍出現(xiàn)混濁圈能消化肉渣，使之變黑，有腐敗惡臭氣味。（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1、標(biāo)本2、直接涂片革蘭陽(yáng)性，近極端芽胞，呈湯匙狀或網(wǎng)拍狀3、厭氧培養(yǎng)：（三）臨床意義致病物質(zhì)肉毒毒素（不耐熱）是一種強(qiáng)烈的神經(jīng)外毒素，是目前已知毒素中毒力最強(qiáng)者，對(duì)人的致死劑量是0.1g作用于外周膽堿能神

8、經(jīng)，抑制神經(jīng)肌肉接頭處神經(jīng)介質(zhì)乙酰膽堿的釋放，導(dǎo)致肌肉弛緩性麻痹，嚴(yán)重者可因呼吸肌和心肌麻痹而死亡所致疾病食物中毒：罐頭、香腸、臘腸、發(fā)酵豆制品嬰兒肉毒病中毒食物，被肉毒梭菌芽胞污染的蜂蜜等食品。好發(fā)年齡，1歲以下，特別6個(gè)月以內(nèi)的嬰兒，因其腸道中缺乏拮抗肉毒梭菌的正常菌群?；疾雰鹤钕纫俗⒁獍Y狀是便閉、拒乳、啼哭無力死亡率不高（1%2%）。臨床表現(xiàn)無胃腸道癥狀，為神經(jīng)末梢麻痹癥狀、乏力、頭痛眼肌：復(fù)視、斜視、眼瞼下垂喉肌：吞咽困難、咀嚼不靈、語言障礙膈?。汉粑щy、死亡率高20-70%四、艱難梭菌形態(tài)染色G粗大桿菌，芽胞呈卵圓形位于菌體近極端；部分菌株有周鞭毛，培養(yǎng)2天后有轉(zhuǎn)為陰性趨向（一

9、）生物學(xué)特性1.形態(tài)染色G粗大桿菌，芽胞呈卵圓形位于菌體近極端；部分菌株有周鞭毛，培養(yǎng)2天后有轉(zhuǎn)為陰性趨向。 四、艱難梭菌形態(tài)2.培養(yǎng)特性嚴(yán)格專性厭氧菌，常規(guī)的厭氧培養(yǎng)法不易生長(zhǎng)。在血液瓊脂、牛心腦浸液瓊脂及CCFA(環(huán)絲氨酸-頭孢甲氧霉素-果糖瓊脂)等平板，48h后，血平板上菌落直徑35mm，圓形、略高起、白色或淡黃、不透明、邊緣不整齊、表面粗糙。CCFA平板上的菌落，在紫外線照射下，可見黃綠色熒光。菌落特征艱難梭菌CCFA瓊脂，菌落帶“金屬光澤”的外形。菌落在紫外光的照射下可發(fā)黃綠色熒光（二）微生物學(xué)檢查1、直接涂片2、分離培養(yǎng)3、毒力試驗(yàn)4、鑒定毒力檢測(cè)，組織培養(yǎng)：毒素通過隔夜孵育后對(duì)維

10、羅細(xì)胞的作用而證實(shí)（右），細(xì)胞腫脹變性，部分壞死。左側(cè)未接種作為對(duì)照。（三）臨床意義本菌在幼兒的糞便中最常見，為腸道的正常菌群中組成之一。已經(jīng)證明具有產(chǎn)毒能力的艱難梭菌為假膜性腸炎的主要病原菌之一臨床表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、伴有全身中毒癥狀，常較嚴(yán)重，有時(shí)可致死。 菌類分類形態(tài)及培養(yǎng)條件鞭毛莢膜典型生化特性致病物質(zhì)作用機(jī)制典型癥狀破傷風(fēng)梭菌致病菌G細(xì)桿，鼓槌狀，37 周生無不發(fā)酵糖類、分解蛋白質(zhì)破傷風(fēng)痙攣毒素、溶血素封閉抑制性神經(jīng)介質(zhì)釋放（痙攣）苦笑面容、角弓反張產(chǎn)氣莢膜梭菌致病菌G ，粗桿狀，45 無有雙溶血環(huán)、產(chǎn)酸產(chǎn)氣（洶涌發(fā)酵）毒素、腸毒素產(chǎn)生酶類，侵入組織，發(fā)酵糖類，產(chǎn)酸產(chǎn)氣氣性壞疽、食物中

11、毒、壞死性腸炎肉毒梭菌致病菌G ，粗桿狀有無產(chǎn)生酯酶、肉毒毒素阻礙乙酰膽堿的釋放，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)末梢功能失調(diào)肌肉麻痹艱難梭菌正常菌群G ，粗桿狀有毒素A（腸毒素）毒素B（細(xì)胞毒素）腸壁出血性壞死、細(xì)胞壞死抗生素相關(guān)性腹瀉、假膜性結(jié)腸炎1.下列屬于專性厭氧菌的是 A.炭疽芽胞桿菌 B.枯草桿菌 C.白喉棒狀桿菌 D.肺炎鏈球菌 E.脆弱類桿菌E2. 梭菌屬屬于 A.革蘭陰性球菌 B.革蘭陽(yáng)性球菌 C.革蘭陽(yáng)性無芽胞桿菌 D.革蘭陽(yáng)性芽胞梭菌 E.革蘭陰性無芽胞梭菌3在人體正常菌群中數(shù)量最多的優(yōu)勢(shì)菌是 A.需氧菌 B.兼性厭氧菌 C.厭氧芽孢菌 D.無芽孢厭氧菌 E.大腸埃希菌4. 在無芽胞厭氧菌感染中

12、最常見的厭氧菌是 A.雙歧桿菌 B.梭狀桿菌 C.丙酸桿菌 D.消化鏈球菌 E.脆弱類桿菌DDE5.長(zhǎng)期使用抗生素易引起A.無芽胞厭氧菌感染 B.厭氧芽胞桿菌感染C.病毒感染 D.缺陷病毒感染E.梅毒螺旋體感染6.血平板上形成雙層溶血環(huán)的細(xì)菌是A.葡萄球菌 B.肺炎球菌C.破傷風(fēng)桿菌 D.產(chǎn)氣莢膜桿菌E.白喉?xiàng)U菌7. 高倍鏡下形成湯勺狀的細(xì)菌是A.白喉?xiàng)U菌 B.枯草桿菌C.炭疽桿菌 D.產(chǎn)氣莢膜桿菌E.肉毒梭菌8.破傷風(fēng)抗毒素治療破傷風(fēng)的機(jī)制是A.中和游離的外毒素 B.中和與神經(jīng)細(xì)胞結(jié)合的外毒素C.抑制破傷風(fēng)桿菌生長(zhǎng) D.在補(bǔ)體參與下溶解破壞破傷風(fēng)桿菌E.減輕臨床癥狀 9.引起氣性壞疽的細(xì)菌是A.乙型溶血性鏈球菌 B.肉毒桿菌C.炭疽桿菌 D.分枝桿菌 E. 產(chǎn)氣莢膜梭菌10、肉毒毒素的特點(diǎn)是A.可被腸道蛋白酶水解； B.引起肌肉強(qiáng)直性收縮; C.引起肌肉大塊壞死;D.主要經(jīng)過消化道吸收; E.細(xì)菌生活狀態(tài)下釋放11、肉毒梭菌的芽胞特點(diǎn)是A.橢圓形 ,位于菌體頂端; B.橢圓形 ,位于菌體次極端; C.正圓形 ,位于菌體頂端; D.