羅氏試劑盒說明書 HIV combi- 04877721001-en-t

1、HIV combiHIV-1抗原和總體抗HIV-1和HIV-2抗體04877721001V4HIV combiHIV-1抗原和總體抗HIV-1和HIV-2抗體Elecsys 和 cobas e 分析儀 6/62009-06, V 4中文2009-06, V 4中文 5/6 Elecsys 和 cobas e 分析儀04860446 190 100測試本試劑盒適用的分析儀Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601中文主要用途用免疫學(xué)方法定量測定人血清或血漿中HIV-1 P24抗原和HIV-1抗體（包含O組）和HIV-2抗體含量

2、。電化學(xué)發(fā)光免疫測定試劑，適用于羅氏Elecsys和cobas e免疫測定分析儀。法規(guī)批準(zhǔn)根據(jù)指令98/79/ECElecsys HIV combi檢測已經(jīng)通過CE標(biāo)識認證。依照通用技術(shù)規(guī)格（2002/364/EC）疾病診斷和篩查獻血制品的測試性能已經(jīng)授權(quán)機構(gòu)創(chuàng)建并驗證。臨床應(yīng)用人類免疫缺陷病毒（HIV）是導(dǎo)致獲得性免疫缺陷綜合癥（AIDS）的罪魁禍?zhǔn)?。它屬于逆病毒家族成員之一。HIV可通過被污染的血液和血液制品傳播、性接觸傳播或母嬰垂直傳播。至今為止已發(fā)現(xiàn)兩種類型的HIV病毒，HIV-1和HIV-2。1,2,3,4已知HIV病毒存在多種亞型，每種亞型又存在不同的地域分布。HIV-1型可以被分

3、為3種略有關(guān)系的群組：M群（主群）、N群（非主群和非離群）、O群（離群）。5,6在基因水平上，HIV-1 的主群中至少含九種不同的亞型（A到D、F到H、J、K）。7重組的HIV-1型病毒含有兩組甚至更多不同亞型的基因序列，目前正迅速傳播。HIV蛋白的抗體可以證實HIV病毒的感染，通常在被感染6-12周后可以從血清中檢測到。8，9由于抗原顯性位點序列的不同，特別是在HIV-1主群、離群及HIV-2的包膜蛋白中，因此在免疫檢測中抗原需要避免HIV感染檢測的失敗。9,10由于艾滋病新感染患者的病毒載量較大，通過檢測血液樣本中HIV-1 P24抗原，可以比傳統(tǒng)的抗體檢測方法提前約6天檢測出HIV感染。

4、11,12使用第四代HIV檢測，抗HIV抗體和HIV-1抗原可以同時檢測到。與HIV抗體檢測相比，該方法能夠提高靈敏度，并且縮短診斷窗口期。13,14Elecsys HIV combi檢測可以同時檢測HIV-1 P24抗原和HIV-1及HIV-2的抗體。該試驗使用來源于多聚酶和HIV-1（包括離群）HIV-2包膜區(qū)域的重組抗原來檢測HIV特異抗體。為了檢測HIV-1 P24抗原，使用了特異的單克隆抗體。Elecsys HIV combi檢測并不是獨立的HIV抗原檢測的替代方法。重復(fù)檢出活性結(jié)果的樣本必須經(jīng)推薦的驗證算法確認。確證試驗包括蛋白質(zhì)印記試驗和HIV RNA試驗。檢測原理雙抗體夾心法，

5、總檢測時間：18分鐘第一次孵育：30l標(biāo)本、生物素化的抗p24抗體/HIV特異性重組抗原/HIV特異性肽和釕（Ru）a標(biāo)記的抗p24單克隆抗體/HIV特異性重組抗原/HIV特異性肽一起反應(yīng)生成抗原抗體夾心復(fù)合物。第二次孵育：添加包被鏈霉親和素的磁珠微粒后，該復(fù)合物通過生物素和鏈霉素之間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。將反應(yīng)液吸入測量池中，通過電磁作用將磁珠吸附在電極表面。未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過ProCell被去除。給電極加以一定的電壓，使復(fù)合體化學(xué)發(fā)光，并通過光電倍增器測量發(fā)光強度。由儀器Elecsys軟件自動通過比較樣本的電化學(xué)發(fā)光信號和以前采用HIV combi定標(biāo)獲得的臨界值計算得到檢測結(jié)果。a)T

6、ris(2,2-bipyridyl) ruthenium(II) -complex (Ru(bpy)三聯(lián)吡啶釕試劑工作溶液M包被鏈霉親和素的磁珠微粒（透明瓶蓋），1瓶，6.5ml；包被鏈霉親和素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐劑。R1 生物素化抗p24、HIV-1/2特異性重組抗原（大腸桿菌）、HIV-1/2特異性肽（灰蓋），1瓶，8mL：生物素化抗p24單克隆抗體（小鼠）、生物素化HIV-1/2特異性重組抗原（大腸桿菌）、生物素化HIV-1/2特異性肽1.3mg/L；TRIS緩沖液50mmol/L，pH值7.5；防腐劑。R2 Ru(bpy)32+標(biāo)記的抗抗p24、HIV-1/2特異性重組

7、抗原（大腸桿菌）、HIV-1/2特異性肽（黑蓋），1瓶，8mL；釕標(biāo)記的抗p24抗體（小鼠）、HIV-1/2特異性重組抗原、HIV-1/2特異性肽1.5mg/L；TRIS緩沖液50mmol/L，pH值7.5；防腐劑。Cal1 陰性定標(biāo)液（白蓋），2瓶（低壓凍干），每瓶1.0mL：抗HIV-1和抗HIV-2非活性人血清。Cal2 陽性定標(biāo)液（黑蓋），2瓶（低壓凍干），每瓶1.0mL：抗HIV-1和抗HIV-2陰性的人血清中抗HIV-1陽性人血清（滅活）。警告和注意事項僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時必需遵循所有試驗室試劑操作的注意事項。所有廢棄物必需按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)進行處置。專業(yè)人員可要求獲得安全數(shù)

8、據(jù)報告。所有人源性材料應(yīng)被視為具有潛在感染性。陰性定標(biāo)液（Cal1）：采用獻血者血液制備，所有個體都經(jīng)過測試并且HbsAg、抗HIV和抗HCV為陰性。所用的測試方法均通過FDA的審核，或經(jīng)歐洲指令98/79/EC Annex ，列表A的批準(zhǔn)。含有抗HIV-1（Cal2）采用-丙內(nèi)酯和紫外線照射滅活。但是，任何檢測方法都不能絕對確認排除潛在的感染危險，因此應(yīng)該按照檢測病人標(biāo)本的處理要求一樣使用本產(chǎn)品。一旦發(fā)生暴露，應(yīng)遵循負責(zé)醫(yī)療機構(gòu)的指示。15、16不可使用過期試劑。避免試劑和樣本（樣本、定標(biāo)液和質(zhì)控品）產(chǎn)生氣泡。試劑處理試劑盒為瓶裝即用型（除了Cal1和Cal2），適用于該系統(tǒng)。Elescys

9、 HIV combi Cal1和Cal2：使用1.0mL蒸餾水將內(nèi)容物溶解在試劑瓶中并封閉直立存放15分鐘復(fù)溶。小心混勻，避免起泡。將分裝的復(fù)溶定標(biāo)液轉(zhuǎn)移至提供的帶標(biāo)簽的有蓋小空瓶中。Elecsys 2010和cobas e 411分析儀：復(fù)溶的定標(biāo)液Cal1和Cal2只能在2025在定標(biāo)期間放置在儀器上。使用后，盡可能快的關(guān)閉試劑瓶并儲存在28條件下。請確保開啟的MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀：除非需要在分析儀上使用總量定標(biāo)液定標(biāo)，將分裝即用型定標(biāo)液轉(zhuǎn)移至帶拉環(huán)蓋的空試劑瓶（定標(biāo)液組小瓶）中。將供應(yīng)信息標(biāo)簽粘貼在這些額外的試劑瓶上。將這些分裝定標(biāo)液

10、儲存在28每份分裝定標(biāo)液僅執(zhí)行一個定標(biāo)步驟?？赏ㄟ^各試劑條形碼讀入正確操作所需的全部信息。儲存及穩(wěn)定性存放于28請垂直擺放Elecsys HIV combi試劑盒（M、R1、R2），確保使用前儀器通過自動攪拌能夠完全混勻磁珠微粒。穩(wěn)定性：未開封試劑，28有效期內(nèi)均可使用M、R1、R2開封試劑，28如果交替在冰箱和分析儀上可儲存4周（在2025長達72小時放置分析儀MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601上2周放置分析儀Elecsys 2010 和 cobas e 411上，20252周低壓凍干定標(biāo)液有效期內(nèi)均可使用復(fù)溶定標(biāo)液，285周以下在MODULAR ANALY

11、TICS E170和cobas e 601上一次性使用請垂直擺放定標(biāo)液！請確保開啟的帶拉環(huán)蓋上沒有定標(biāo)液。樣本的采集和準(zhǔn)備僅以下羅列的足量樣本通過檢測要求。血清樣本須用標(biāo)準(zhǔn)試管或有分離膠的真空管收集。肝素鋰、K3-EDTA和枸櫞酸抗凝的血漿都適用。標(biāo)準(zhǔn)：正確分配的陰性和陽性樣本。穩(wěn)定性：2-8保存10天，25保存3天，-20樣本可冰凍6次。選擇合適的試管進行不同類型樣本的采集，不是所有的試管均可用于檢測。不同廠商的樣本采集系統(tǒng)可能含有不同的物質(zhì)，某些情況下會影響檢測結(jié)果。如果使用原始管進行檢測（樣本前處理系統(tǒng)）時，應(yīng)遵循生產(chǎn)商所提供的指導(dǎo)。有沉淀的樣本和冰凍樣本檢測前必須先作離心處理。避免使用

12、熱滅活的樣本。避免使用添加疊氮化合物的樣本和質(zhì)控品。檢測前，樣本、定標(biāo)液及質(zhì)控品須室溫平衡(20-25由于蒸發(fā)因素的影響，樣本、定標(biāo)液及質(zhì)控品在分析儀上的檢測必須2小時內(nèi)完成。提供的物品參閱“試劑工作溶液”章節(jié)。26個小瓶標(biāo)簽4個帶標(biāo)簽的有蓋小空瓶需要的物品（未提供）貨號03599612190，PreciControl HIV combi，PreciControl HIV combi 1、2和3分別為51.3mL或貨號05162645190，PreciControl HIV，PreciControl HIV combi 1、2和3分別為22mL貨號1176576322，定標(biāo)液小瓶，256有蓋小

13、空瓶實驗室基礎(chǔ)設(shè)備Elecsys 2010、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析儀蒸餾水或去離子水Elecsys 2010和cobas e 411分析儀所需材料：貨號11662988122，ProCell，6380 mL，系統(tǒng)緩沖液貨號11662970122，CleanCell，6380mL，測量池洗液 貨號11930346122，Elecsys SysWash，1500mL，附加洗液貨號11933159001，SysClean適配器貨號11706802001，Elecsys 2010分析杯，6060反應(yīng)管貨號11706799001，Elecsys 2010分析吸頭

14、，30120移液管吸頭MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀所需材料：貨號04880340190，ProCell M，22L貨號04880293190，CleanCell M，22L貨號03023141001，PC/CC杯，12個用于在檢測前預(yù)熱Procell M及Cleancell M貨號03005712190，ProbeWash M，1270mL 清洗液，用于在檢測完畢后或更換試劑時清洗試劑針貨號03004899190，PreClean M，5600mL檢測清洗液貨號12102137001，反應(yīng)杯/吸頭組合裝84反應(yīng)杯/吸頭組合裝48盒，廢物袋 貨號03

15、023150001，WasteLiner，廢物袋 貨號03027651001，系統(tǒng)清潔適配器M所有分析儀需要：貨號11298500316，Elecsys SysClean，5100mL系統(tǒng)清洗液檢測要優(yōu)化檢測性能，請遵照本說明書中有關(guān)分析儀的相關(guān)指導(dǎo)，并參照分析儀操作手冊。試劑使用前分析儀自動攪拌磁珠微粒，使其處于懸浮狀態(tài)。試劑相關(guān)信息可通過條形碼自動讀取，在特殊情況下，分析儀無法自動讀取條碼信息時，請輸入條碼標(biāo)簽上的15位數(shù)字序列。MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀：必需PreClean M溶液。MODULAR ANALYTICS E170、Elecs

16、ys2010和cobas e分析儀：將冷藏試劑室溫平衡至20C左右，放置分析儀的試劑盤（20C）內(nèi)。避免泡沫產(chǎn)生。分析儀能自動調(diào)節(jié)試劑溫度和開、關(guān)各試劑盒瓶蓋。將定標(biāo)液Cal1和Cal2放在分析儀的樣本區(qū)。只在定標(biāo)期間開啟。有關(guān)定標(biāo)的所有必要信息都編碼在試劑瓶條形碼標(biāo)簽上并被自動讀入。定標(biāo)后，將Cal1和Cal2儲存在28下或丟棄（MODULAR ANALYTICS E170和cobas e定標(biāo)溯源性：還沒有國際認可標(biāo)準(zhǔn)對抗HIV-1和抗HIV-2進行標(biāo)準(zhǔn)化。本方法采用1型人免疫缺陷病毒（HIV-1 p24抗原）第一國際參考試劑1992，代碼90/636來自NIBSC（國家生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品

17、研究所）進行標(biāo)準(zhǔn)化。定校頻率：使用Elecsys HIV combi Cal1和Cal2溶液的試劑批次和新鮮試劑必須進行定標(biāo)（新試劑盒注冊后在分析儀上放置不能超過24小時）。以下情況建議重新進行定標(biāo)：使用同一批號試劑，1月后（28天）7天后（同一試劑盒在分析儀上使用）根據(jù)需要：如失控。有關(guān)規(guī)章要求可增加定標(biāo)頻率。定標(biāo)液的電化學(xué)發(fā)光信號（計數(shù)）的范圍：陰性定標(biāo)液（Cal1）：16005600（Elecsys 2010和cobas e 411分析儀）。10003000（MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀）陽性定標(biāo)液（Cal2）：24000110000（Ele

18、csys 2010和cobas e 411分析儀）。1800090000（MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀）。質(zhì)控質(zhì)控可使用Elecsys PreciControl HIV combi 或Elecsys PreciControl HIV。質(zhì)控品1、2和3至少每24小時內(nèi)檢測一次，每次更換試劑盒或定標(biāo)后也須進行質(zhì)控。每個實驗室可根據(jù)各自的情況設(shè)定合適的控制限和質(zhì)控周期。質(zhì)控值必須處于規(guī)定的控制限內(nèi)。若失控每個試驗室必須采取相應(yīng)的糾正措施。如有必要，重復(fù)測量樣本。遵照有關(guān)質(zhì)控的政府法規(guī)和本地指南。計算分析儀自動根據(jù)Cal1和Cal2的檢測結(jié)果計算臨界值。按

19、活性或非活性表達并以臨界指數(shù)形式給出樣本結(jié)果（信號樣本/臨界值）。結(jié)果解釋Elecsys HIV combi檢測中臨界指數(shù)0.90的樣本是無活性樣本。這些樣本被認定為HIV-1抗原和HIV-1/-2特異性抗體陰性，不需要進一步檢測。臨界指數(shù)在0.90至1.0之間的樣本結(jié)果被視為Elecsys HIV combi檢測的臨界限。在Elecsys HIV combi檢測中臨界指數(shù)1.0的樣本被視為活性樣本。必須對所有初始檢出活性或臨界結(jié)果的樣本重復(fù)兩次Elecsys HIV combi檢測。如果復(fù)測時這些樣本得出的臨界指數(shù)均值0.90，這些樣本即被視為HIV-1抗原和HIV-1/-2特異性抗體陰性。

20、如果初始結(jié)果為活性或臨界的樣本的任何一次復(fù)測結(jié)果0.90則被視為重復(fù)檢出活性結(jié)果。必須根據(jù)推薦的確認算法確認重復(fù)檢出活性結(jié)果的樣本。確證試驗包括蛋白質(zhì)印記試驗和HIV RNA試驗。干擾因素本測定法不受黃疸（膽紅素222mol/L或13mg/dL）、溶血（血紅蛋白0.994mmol/L或1.6g/dL）、脂血（脂肪乳劑Intralipid2000mg/dL）和生物素205nmol/L或5mg/天），必須在末次生物素治療8小時后采集樣本。濃度為2300 IU/ml的類風(fēng)濕因子對檢測無影響。Elecsys HIV combi檢測沒有觀察到高劑量鉤鐮效應(yīng)所致假陰性結(jié)果。體外對17種常用藥物進行試驗，未

21、發(fā)現(xiàn)會影響檢測結(jié)果。少數(shù)病例中極高濃度的分析物特異性抗體（例如HAMA），鏈霉素抗體和釕抗體會影響檢測結(jié)果。合適的試驗設(shè)計可將影響因素降到最低。作為診斷指標(biāo)，必須結(jié)合患者病史，臨床檢查和其他臨床資料來綜合評估檢測結(jié)果。陰性結(jié)果并不能完全排除HIV感染的可能性。極早（血清陽轉(zhuǎn)前）期或HIV感染后期的血清和血漿樣本可能得出陰性結(jié)果。未知的HIV變體也可能導(dǎo)致HIV陰性檢測結(jié)果。檢出HIV抗原和HIV抗體并不能診斷AIDS。特殊的性能指標(biāo)試劑在各分析儀上的性能試驗數(shù)據(jù)如下。各實驗室得出的數(shù)據(jù)可能會稍有差異。精密度使用Elecsys試劑盒、人血清和質(zhì)控品測定可重復(fù)性（批內(nèi)，n21，批間n10）；MOD

22、ULAR ANALYTICS E170分析儀上的總體精密度采用NCCLS（國家臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會）的改良協(xié)議（EP5-A）進行測定：每日6次，共10天（n=60）。下面是獲得的結(jié)果。b）HS人血清c）PCPreciControl分析靈敏度（最低檢出限）抗原檢測6U/mL通過系列稀釋人HIV陰性血清中的1型人類免疫缺陷病毒（HIV-1 p24抗原）第一國際參考試劑1992，代碼90/636獲取標(biāo)準(zhǔn)曲線，再通過讀取對應(yīng)臨界值信號的HIV抗原濃度測定靈敏度。通過系列稀釋人HIV陰性血清中的HIV-1 p24抗原（依照DuPont，貨號NEA522001，批次32286進行標(biāo)準(zhǔn)化）獲取標(biāo)準(zhǔn)曲線，再通

23、過在標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取對應(yīng)臨界值信號的HIV抗原濃度，可得出靈敏度33pg/mL?？贵w檢測HIV特異性抗體檢測還沒有國際可接受標(biāo)準(zhǔn)。分析特異性1364份存在潛在感染的樣本采用Elecsys HIV combi檢測進行測試，這些樣本包括：含對抗HAV、HBV、HCV、HTLV、CMV、EBV、HSV、抗風(fēng)疹病毒形體、抗鼠弓形體抗體、抗梅毒螺旋體抗體、抗伯氏疏螺旋體抗體自身抗體和類風(fēng)濕因子滴度升高念珠菌、大腸桿菌、腸球菌、惡性瘧原蟲、結(jié)核分支桿菌陽性接種過HAV、HBV和流感疫苗單克隆丙種球蛋白病和多發(fā)性骨髓瘤/淋巴瘤d）RR重復(fù)檢出活性結(jié)果e）計算時排除WB結(jié)果不確定的樣本f）有自身抗體的病人：22

24、5名中，有2名；乙肝恢復(fù)/接種乙肝疫苗：48名中有2名；EBV陽性：43名中有2名；HTLV陽性：142名中有1名；蒼白密螺旋體陽性：38名中有1名；惡性瘧原蟲陽性：137名中有3名臨床靈敏度33份陽轉(zhuǎn)早期的HIV抗原陽性的樣本中，采用Elecsys HIV combi檢測檢出32份陽性樣本。一個樣本采用敏感HIV抗原獨立檢測得出弱陽性結(jié)果，采用蛋白質(zhì)印記試驗得出不確定結(jié)果，采用本檢測得出COI結(jié)果為0.8。1509份樣本來自感染HIV的處于疾病不同階段的病人，感染HIV-1 M、O群和HIV-2，采用Elecsys HIV combi檢測重復(fù)檢出1509份活性的樣本。本研究中Elecsys

25、HIV combi檢測的靈敏度為100。95的置信區(qū)間下限為99.80。采用Elecsys HIV combi檢測測試了60份含不同HIV-1 M群亞型（A-H）、HIV-1 O群和HIV-2的細胞裂解液的上清液，并檢出活性結(jié)果。臨床特異性對8406份隨機選擇的來自歐洲和亞洲的血樣采用Elecsys HIV combi檢測得出的特異性為99.76（RR）。95的置信區(qū)間下限為99.65。對4389份未經(jīng)選擇的臨床的常規(guī)樣本、透析病人的樣本和妊娠婦女樣本，采用Elecsys HIV combi檢測得出的特異性為99.63（RR）。95的置信區(qū)間下限為99.42。g）IR初次活性結(jié)果h）計算時排除

26、蛋白質(zhì)印記結(jié)果不確定的樣本血清陽轉(zhuǎn)面板采用Elecsys HIV combi檢測的血清陽轉(zhuǎn)靈敏度測試了93份市面上有售的血清陽轉(zhuǎn)面板，并與經(jīng)注冊的HIV combi檢測或抗HIV免疫測定法和/或HIV抗原測定法進行比較，得出其靈敏度。參考文獻1. Barre-Sinoussi F, et al. Isolation of a T-lymphotrophic Retrovirus from a Patient at Risk for Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS). Science 1983;220:868-871.2. Popovic M,

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