中藥提取分離和純化課件

第二章

中藥化學成分的提取分離與鑒定

第二章

中藥化學成分的提取分離與鑒定主要內(nèi)容第一節(jié)中藥化學成分的提取方法第二節(jié)中藥化學成分的分離方法第三節(jié)中藥化學成分結(jié)構(gòu)研究簡介主要內(nèi)容第一節(jié)中藥化學成分的提取方法第一節(jié)中藥化學成分的提取方法提取前的準備工作：基源、產(chǎn)地、藥用部位、采集時間與方法的考察及文獻調(diào)研；提取前的預處理：粉碎、脫脂、酶的滅活；提取方法：溶劑提取法、水蒸汽蒸餾法及升華第一節(jié)中藥化學成分的提取方法提取前的準備一、溶劑提取法

（一）基本原理（二）溶劑的選擇（三）溶劑提取的方法一、溶劑提取法（一）基本原理（一）溶劑提取法的原理滲透擴散（一）溶劑提取法的原理滲透（二）溶劑的選擇

溶劑提取法的關(guān)鍵是選擇合適的溶劑，一種好的溶劑應對所提取的成分有較大的溶解度，而對共存雜質(zhì)的溶解度很小。良好溶劑的選擇應遵循“相似相溶”原理。

一般說來，只要溶劑的極性與化學成分的極性相似，化學成分就易被溶解。溶劑的極性與介電常數(shù)ε有關(guān)，溶劑的ε值越大，極性越大。一些常用溶劑

（二）溶劑的選擇

溶劑提取法的關(guān)鍵是選擇合適的溶劑，一種好的中藥提取分離和純化課件一些常見溶劑的親水性或親脂性的強弱順序一些常見溶劑的親水性或親脂性的強弱順序中藥提取分離和純化課件中藥提取分離和純化課件溶劑分類

——按照極性大小和溶解性能

1、水2、親水性有機溶劑

3、親脂性有機溶劑溶劑分類

——按照極性大小和溶解性能1、水強極性溶劑，對藥材細胞穿透力大，中藥中親水性成分，如無機鹽、有機酸鹽、生物堿鹽、糖類、苷類、鞣質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)等都能被水提出。水作為提取溶劑有安全、經(jīng)濟、廉價易得等優(yōu)點，缺點是水 提取液（有其是含糖或蛋白質(zhì)）易霉變，難以保存，而且不易濃縮和過濾。

1、水(2)親水性有機溶劑

包括甲醇、乙醇和丙酮；

這類有機溶劑具有較大的極性，與水可任意混溶；

乙醇對中藥材的細胞不僅有較強的穿透力，而且對許多成分的溶解性能好，價廉，回收方便，因此是提取中藥成分最常用的溶劑。(2)親水性有機溶劑包括甲醇、乙醇和丙酮(3)親脂性有機溶劑

包括石油醚、苯、乙醚、氯仿、乙酸乙酯等。這是一類與水不能任意混溶的有機溶劑，對非極性成分溶解的選擇性較強。天然藥物中的揮發(fā)油、油脂、葉綠素、樹脂、游離生物堿及一些苷元均可被這類溶劑提出。這類溶劑沸點低、濃縮回收方便，但易燃、有毒、價高，對設(shè)備要求高，穿透藥材組織的能力較差，故應用這類提取溶劑有一定的局限性。(3)親脂性有機溶劑包括石油醚、苯、乙醚、中藥提取分離和純化課件2.提取方法

(１)浸漬法

(２)滲漉法

(３)煎煮法

(４)回流提取法

(５)連續(xù)回流提取法

(６)超聲提取法2.提取方法(１)浸漬（１）浸漬法

又稱冷浸法，適用于遇熱易破壞成分以及含大量淀粉、樹膠、果膠、黏液質(zhì)等多糖成分的藥材，多用水、乙醇作溶劑。但本法提取時間長，效率不高，特別是在用水作溶劑浸漬時，提取液易發(fā)霉變質(zhì)，必要時可加適量防腐劑。（１）浸漬法又稱冷浸法，適用于遇熱易破壞成分以及

(2)滲漉法

該法適用于以水、稀醇為溶劑。用低沸點易揮發(fā)的溶劑提取，不宜用此法。因在室溫下進行，故特別適用于遇熱易破壞成分的提取。本法在滲濾過程中，不斷加人新溶劑，與滲濾液一直保持相當?shù)臐舛炔睿侍崛⌒时冉n法高。但存在溶劑用量大、費時較長的缺點。(2)滲漉法該法適用于以水、稀醇為溶劑。用(3)煎煮法

本法屬熱浸漬法，提取效率比冷浸法高。但含揮發(fā)性成分及遇熱不穩(wěn)定成分的提取不宜用此法。含多糖類成分藥材煎煮后，藥液黏稠，過濾較困難。此法僅適用于水作溶劑的提取(3)煎煮法本法屬熱浸漬法，提取效率比冷浸法（４）回流提取法

本法適用于有機溶劑的提取，提取效率與煎煮法相同。

對熱不穩(wěn)成分的提取不宜用此法（４）回流提取法本法適用于有機溶劑的提取，提取

(5)連續(xù)回流提取法—索氏提取法

應用揮發(fā)性有機溶劑提取天然藥物中的有效成分較多采用該法。本法僅需少量溶劑就能使有效成分提取完全，提取效率高。但提取液受熱時間長，一般需4～10小時。(5)連續(xù)回流提取法—索氏提取法應用揮發(fā)性有(6)超聲提取法

利用超聲波強烈振動能傳遞巨大能量給浸提藥材和溶劑，從而破壞植物藥材的細胞，加強胞內(nèi)物質(zhì)的釋放、擴散和溶解，加速有效成分的浸出。該方法具有提取時間短、提取效率高、無須加熱等優(yōu)點，但此法對容器壁的厚薄及放置要求較高。目前尚為實驗室小規(guī)模使用。(6)超聲提取法利用超聲波強烈振動能傳遞巨大能量給浸提藥材中藥提取分離和純化課件3、影響溶劑提取效率的因素

（1）藥材粉碎度；

（2）濕度；

（3）濃度差；

（4）時間；

（5）溶劑；其中選擇適當?shù)娜軇┦翘崛〉年P(guān)鍵，溶劑的選擇主要從溶解度方面考慮，同時要注意到溶劑易回收、安全低毒、價廉等因素。3、影響溶劑提取效率的因素增溶與助溶

由于在中藥的提取液中，存在著復雜的混合物，各成分的相互影響，有時會產(chǎn)生增溶現(xiàn)象，增大了欲提取成分的溶解度。但有時又可能相互生成難溶性化合物，改變了欲提取成分的溶解性能而提取不出。增溶與助溶增溶助溶現(xiàn)象舉例

（1）已知含生物堿的中藥與甘草配伍，生物堿與甘草酸產(chǎn)生沉淀，生物堿可能提取不出來。（2）黃連等中的小檗堿與黃芩苷產(chǎn)生沉淀，生物堿與銀花中的綠原酸發(fā)生沉淀，大黃鞣質(zhì)與梔子、茵陳之間也有沉淀產(chǎn)生。

（3）有的成分因其他成分的存在，溶解度有較大的改變，如油脂類雜質(zhì)的存在可以使不溶于石油醚的香豆素溶解，含麻黃的方劑中如有葛根則麻黃堿的含量增加等等。增溶助溶現(xiàn)象舉例（1）已知含生物堿的中藥與甘草配伍，生物堿增溶助溶現(xiàn)象的原因（1）中藥中含有某些能表面活性物質(zhì)，如皂苷、樹膠、蛋白質(zhì)等。（2）中藥湯劑屬于膠體溶液，由許多難溶物質(zhì)的分子組成的微?；鞈矣诮橘|(zhì)中成為溶膠或粗分散體系，也是使物質(zhì)在溶液中含量增加的一個重要因素。增溶助溶現(xiàn)象的原因（1）中藥中含有某些能表面活性物質(zhì)，如

(二)水蒸氣蒸餾法

水蒸氣蒸餾法適用于能隨水蒸氣餾出而不被破壞的天然藥物成分的提取。中草藥中的揮發(fā)油、某些小分子生物堿、小分子酚性物質(zhì)等都可采用本法提取。

(二)水蒸氣蒸餾法

水蒸氣蒸餾法適用于能隨水(三)升華法

有些固體物質(zhì)在低于其熔點的溫度下加熱，不經(jīng)過中間液體階段，直接轉(zhuǎn)化為蒸氣，蒸氣遇冷又凝結(jié)為原來的固體，這種現(xiàn)象稱為升華。天然藥物中具有升華性的成分如咖啡堿、樟腦等，其提取可用升華法。(三)升華法有些固體物質(zhì)在低于其熔點的溫度下加熱，不二、有效成分的分離和精制

用各種方法得到的提取物是包含諸多成分的混合物，要想得到所需成分或單體化合物，須經(jīng)反復分離精制。提取液一般體積較大，所含成分濃度較低，因此須對提取液通過蒸發(fā)或蒸餾進行濃縮，進行進一步的分離和精致。

二、有效成分的分離和精制

用各種方法得到的提取

(一)系統(tǒng)溶劑分離法

(二)兩相溶劑萃取法

(三)沉淀法

(四)吸附法

(五)鹽析法

(六)透析法

(七)分餾法

(八)超臨界流體萃取技術(shù)

（八）結(jié)晶

（九）色譜法分離和精制的方法(一)系統(tǒng)溶劑分離法分離(一)系統(tǒng)溶劑分離法

此法一般是選用3-7種不同極性的溶劑，由低極性至高極性分步對總提取物進行提取分離。使總提取物中各組分，依其在不同極性溶劑中溶解度的差異而得以分離。本法操作較為復雜，對微量成分、結(jié)構(gòu)性質(zhì)相似成分的分離精制有很大局限性，但仍是目前研究成分不明的天然藥物的最常用方法。(一)系統(tǒng)溶劑分離法

此法一般是選用3-7種中藥成分及其適用的提取溶劑中藥成分極性中藥成分類型適用的提取溶劑強親脂性（極性小）揮發(fā)油、脂肪油、蠟、脂溶性色素、甾醇類、某些苷元石油醚、己烷親脂性苷元、生物堿、樹脂、醛、酮、醇、醌、有機酸、某些苷類乙醚、氯仿中等極性小某些苷類（如強心苷等）氯仿：乙醇（2：1）中某些苷類（如黃酮苷等）乙酸乙酯大某些苷類（如皂苷、蒽醌苷等）正丁醇親水性極性很大的苷、糖類、氨基酸、某些生物堿鹽丙酮、乙醇、甲醇強親水性蛋白質(zhì)、黏液質(zhì)、果膠、糖類、無機鹽類水中藥成分及其適用的提取溶劑中藥成分極性中藥成分類型適用的提取（二）兩相溶劑萃取法

1．簡單萃取法兩相溶劑萃取法是分離天然藥物化學成分的常用方法。少量樣品的萃取用分液漏斗操作；萃取的基本原理是利用混合物中各種成分在兩相互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的差異而達到分離的目的。分配系數(shù)(Ｋ)可以下式表示：Ｋ＝Ｃu/ＣL

（二）兩相溶劑萃取法1．簡單萃取法兩相溶劑萃取法乳化現(xiàn)象

液--液萃取中常遇到乳化現(xiàn)象。產(chǎn)生的原因有：溶劑的組合、成分的種類等。操作中出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，可采用下列破乳方法：①久置；②用一金屬絲在乳化層中攪動使之破壞；⑦將乳化層抽濾；④將乳化層熱敷或冷凍；⑤分出乳化層，再用新溶劑萃?。虎藜由倭柯然c，解決兩相比重相差較小及兩相溶劑部分互溶的問題；⑦滴加數(shù)滴醇類如乙醇或磺化蓖麻油等破乳類物質(zhì)。乳化現(xiàn)象液--液萃取中常遇到乳化現(xiàn)象。產(chǎn)生的原因有：2．逆流連續(xù)萃取法2．逆流連續(xù)萃取法(三)沉淀法

沉淀法是在天然藥物提取液中，加入某些試劑使產(chǎn)生沉淀，通過過濾將成分分離的方法。依據(jù)加入沉淀劑的不同，沉淀法可分為以下幾種：

1．酸堿沉淀法

２.鉛鹽３.試劑沉淀法(三)沉淀法沉淀法是在天然藥物提取液中，加入某些試劑1．酸堿沉淀法

在天然藥物提取液中加入酸或堿試劑后產(chǎn)生沉淀從而達到分離的方法稱為酸堿沉淀法。該方法是依據(jù)酸(堿)成分與堿(酸)試劑反應成鹽而溶于水，再加酸(堿)試劑反應重新生成游離酸(堿)從溶液中析出。一些具有內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的化合物遇熱堿開環(huán)生成羧酸鹽而溶于水，加酸后，又重新形成內(nèi)酯環(huán)從溶液中析出。本分離法適用于酸或堿性成分，以及內(nèi)酯類成分的分離。1．酸堿沉淀法在天然藥物提取液中加入酸或堿試劑后產(chǎn)生沉淀從

2．鉛鹽沉淀法

在含天然藥物成分的水或稀醇溶液中加人中性醋酸鉛或堿式醋酸鉛試劑后，某些成分生成鉛鹽沉淀，過濾使之分離的方法稱為鉛鹽沉淀法。中性醋酸鉛可與酸性或酚性物質(zhì)結(jié)合成不溶性鉛鹽。如有機酸、蛋白質(zhì)、氨基酸、黏液質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂、酸性皂苷、部分黃酮等；堿性醋酸鉛除與上述物質(zhì)產(chǎn)生鉛鹽沉淀外，還可沉淀中性皂苷、異黃酮、糖類及一些生物堿等成分。得到的鉛鹽沉淀懸浮于水或含水乙醇中，通入H２Ｓ氣體進行復分解反應，即可得到純化的有效成分。本法也可用來沉淀雜質(zhì)。2．鉛鹽沉淀法在含天然藥物成分的水或稀醇溶液中加人中性

3．試劑沉淀法

（1）在天然藥物的提取液中，加入某些試劑，使之與有效成分結(jié)合生成水不溶物，濾集沉淀，經(jīng)復原處理后，即可得到有效成分。如加入雷氏銨鹽可沉淀分離水溶性季銨堿等。此外，還可以用明膠、蛋白質(zhì)溶液沉淀鞣質(zhì)；用膽甾醇沉淀甾體皂苷。（2）經(jīng)濃縮的提取液加入另一種難溶性溶劑，改變了原溶劑的極性，使其中某種或某些成分析出，以達到純化的日的。常用的方法有水-醇法、醇-水法、醇-丙酮法、醇-乙醚法等。3．試劑沉淀法（1）在天然藥物的提取液中，加入某些試（四）鹽析法

在天然藥物的水提液中，加入無機鹽，使其達到一定濃度或飽和，促使有效成分在水中溶解度降低而沉淀析出,與其他水溶性較大的雜質(zhì)分離。常作鹽析的無機鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。

如三七的水提液中加硫酸鎂至飽和狀態(tài)，三七皂苷乙即可沉淀析出。有些成分如原白頭翁素、麻黃堿、苦參堿等水溶性較大，在萃取分離時，也往往先在水提取液中加入一定量的食鹽，再用有機溶劑萃取。

（四）鹽析法

在天然藥物的水提液中，加入無機鹽，使（五）透析法

透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)而達到分離的方法。例如分離純化皂苷、蛋白質(zhì)、多肽、多糖等大分子成分時，可用透析法除去無機鹽、單糖、雙糖等小分子雜質(zhì)。透析成功與否和透析膜的規(guī)格關(guān)系很大。須根據(jù)欲分離成分的分子量大小來選擇。透析膜有動物膜、火棉膠膜、羊皮紙膜(硫酸紙膜)、蛋白膠膜及玻璃紙膜等。透析法的分離速度較慢，為了加快透析速，可用電透析法，電透析可使帶電離子的透析速度增加10倍以上。（五）透析法

透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，（六）分餾法

分餾法是利用各成分沸點的差異進行提取分離的方法，用于分離液體混合物。在天然藥物有效成分研究中，揮發(fā)油及一些液體生物堿的分離常用此法。（六）分餾法分餾法是利用各成分沸點的差異進行提取分離的方(七)超臨界流體萃取技術(shù)

超臨界流體萃取是一種利用超臨界流體對天然藥物中有效成分進行萃取分離的新技術(shù)。有些物質(zhì)在臨界溫度和壓力下，可形成一種既非液體又非氣體的特殊相態(tài)稱為超臨界流體。該流體既具有與氣體相似的粘度，又具有與液體相似的密度，其擴散力和滲透力均大大強于液體，因而對許多天然藥物成分有很強的溶解能力，且介電常（極性）數(shù)隨壓力增大而增加。可根據(jù)成分的極性大小，改變壓力進行選擇性提取及析出。

(七)超臨界流體萃取技術(shù)超臨界流體萃取是一種利臨界流體萃取的優(yōu)點用二氧化碳作為超臨界流體物質(zhì)具有無毒無味，不易燃易爆，無殘留，安全、價廉，對大多數(shù)物質(zhì)不反應，可循環(huán)使用的優(yōu)點,故最常用于天然藥物的提取。臨界流體萃取的優(yōu)點用二氧化碳作為超臨界流體物質(zhì)具中藥提取分離和純化課件（八）結(jié)晶和重結(jié)晶

結(jié)晶法是分離和精制固體成分的重要方法之一，是利用混合物中各成分在溶劑中溶解度不同達到分離的方法。對天然藥物成分純化精制的過程常常就是反復結(jié)晶與重結(jié)晶的過程。通常情況下，結(jié)晶的形成標志著化合物的純度達到了相當程度，故獲得結(jié)晶并制備成單體純品，就成為鑒定天然藥物成分、研究其分子結(jié)構(gòu)的重要一步。（八）結(jié)晶和重結(jié)晶結(jié)晶法是分離和精制固體成分

1、結(jié)晶的條件

結(jié)晶的關(guān)鍵是選擇最佳的結(jié)晶條件，包括樣品純度、溶劑類型、溶液濃度、結(jié)晶溫度與速度等。（1）一般情況下，樣品純度越高，越容易結(jié)晶；樣品中存在雜質(zhì)較多，會阻礙或延緩結(jié)晶的形成。

（2）溶液的濃度高有利于結(jié)晶的形成，但若濃度過高，反而不易結(jié)晶；濃度較低的溶液可放置使溶劑自然揮發(fā)至適宜濃度而析出結(jié)晶。（3）最合適的結(jié)晶溫度為5～l０℃。長時間放置使結(jié)晶緩慢析出，所得結(jié)晶往往大而純。1、結(jié)晶的條件

結(jié)晶的關(guān)鍵是選擇最佳的結(jié)晶條件，

2、結(jié)晶溶劑的選擇

理想的結(jié)晶溶劑必須具備以下條件：①不與結(jié)晶物質(zhì)發(fā)生化學反應；②對結(jié)晶物質(zhì)的溶解度熱時大、冷時小，而對雜質(zhì)的溶解度很大或者很??；③沸點適中，容易揮發(fā)；④能給出較好結(jié)晶；⑤無毒或毒性很小，便于操作。

2、結(jié)晶溶劑的選擇

理想的結(jié)晶溶劑必須具備以下條件：

3、結(jié)晶純度的判斷

一種純的化合物通常都具有一定的晶形和均勻的色澤，以及一定的熔點和較小的熔距。故可根據(jù)結(jié)晶的色澤是否均勻、晶形是否一致、熔點是否一定及熔距是否較小，并結(jié)合紙色譜或薄層色譜技術(shù)，對結(jié)晶純度加以判斷。如果經(jīng)數(shù)種不同的展開劑系統(tǒng)展開后均為一近乎圓形的斑點，即可判斷結(jié)晶的純度較高。3、結(jié)晶純度的判斷

一種純的化合物通常都具有一定的（九）色譜分離法

色譜法是一種分離和鑒定復雜混合物的有效方法。近年來已被廣泛應用于天然藥物有效成分的分離、提純及鑒定。對一些性質(zhì)相近、結(jié)構(gòu)類似化合物的分離，采用經(jīng)典的溶劑法和結(jié)晶法不能達到分離的目的，使用色譜法往往可以收到很好的分離效果。根據(jù)色譜分離原理的不同，現(xiàn)將幾種常用的色譜分離法介紹如下。（九）色譜分離法色譜法是一種分離和鑒定復雜按分離原理的色譜分類一、吸附色譜二、分配色譜三、離子交換色譜四、大孔吸附樹脂法五、凝膠色譜法

按分離原理的色譜分類一、吸附色譜一、吸附色譜1、基本原理2、吸附劑3、洗脫劑4、被分離物質(zhì)5、吸附劑、洗脫劑和被分離成分三者關(guān)系6、操作方式7、兩種特殊的吸附色譜一、吸附色譜1、基本原理1、基本原理

吸附劑、洗脫劑與待分成分稱為吸附過程的三要素。吸附色譜是利用吸附劑(固定相)對混合物中各成分吸附能力的差別而達到分離目的的。當混合成分到達吸附劑表面對．由于吸附劑表面分子對成分分子的吸附作用，使成分分子在吸附劑表面濃度增大，這種現(xiàn)象稱為吸附；當洗脫劑(移動相)連續(xù)通過吸附劑表面時，吸附劑吸附洗脫溶劑，混合物中各成分分子被洗脫溶解，這種現(xiàn)象稱為解吸附。被分離混合物中各成分對同一固定相和移動相之間的吸附—解吸附平衡不同，就使各成分在兩相的遷移速度不同而分離。此法特別適用于脂溶性中等分子量成分的分離。1、基本原理

吸附劑、洗脫劑與待分成分稱為吸附過程的三要

2、吸附劑

常用的極性吸附劑有:硅膠、氧化鋁非極性吸附劑常用：活性炭2、吸附劑

常用的極性吸附劑有吸附劑的活化

氧化鋁吸附力大于硅膠，吸附劑的活度級別(吸附力)與其含水量有關(guān)。吸附劑含水量愈高，吸附力愈低，如硅膠含水量＞12％，吸附力就很弱而不能作為吸附劑使用，但當加熱到100～110℃記時即可除去絕大多數(shù)水分。吸附劑受熱除去水分，提高其吸附力的過程稱為活化；加入一定量水，降低其吸附能力的過程稱為去活化。

吸附劑的活化氧化鋁吸附力大于硅膠，吸附劑的活度級別(適用范圍

硅膠適用于中性或酸性成分的分離，但不適用于堿性成分的分離；氧化鋁適用于堿性成分的分離，但不宜用于醛、酮、酯、內(nèi)酯等類型化合物的分離。

活性碳多孔的結(jié)構(gòu)導致接觸面積大，吸附性強,可以除異味和某些液體的顏色.還可以凈化氣體與液體,如防毒面具就是以活性炭來凈化空氣.適用范圍硅膠適用于中性或酸性成分的分離，但不適用于堿性3、洗脫劑

洗脫劑應具備以下條件：①純度高，雜質(zhì)含量少；②與樣品、吸附劑不起化學反應；②對被分離成分有一定溶解度；④黏度小、沸點低、易揮發(fā)等。洗脫劑的極性一般用介電常數(shù)ε表示。對極性吸附劑來說，洗脫劑的介電常數(shù)愈大，極性愈強，其洗脫能力愈強；對非極性吸附劑而言則相反，洗脫劑的介電常數(shù)愈小，其洗脫能力愈強。3、洗脫劑洗脫劑應具備以下條件：4、被分離物質(zhì)

用硅膠、氧化鋁等極性吸附劑作固定相的吸附色譜，對極性小的成分吸附力弱，洗脫時先流出；對極性大的成分吸附力大，洗脫時后流出。化合物的極性大小主要取決于其化學結(jié)構(gòu)。4、被分離物質(zhì)用硅膠、氧化鋁等極性吸附劑作固5、吸附劑、洗脫劑和被分離成分三者關(guān)系

在吸附色譜中，各成分的分離取決于它們的遷移速。成分的極性愈大，與固定相的吸附力愈大，遷移速度愈慢；反之則遷移速度愈快。洗脫劑的極性大，被吸附劑吸附的力大，則對成分的洗脫能力大；反之，洗脫力小。無論是吸附力還是洗脫力，過大或過小均不利于成分的分離。具體應用時必須從吸附劑、被分離成分、洗脫劑三個方面綜合考慮。5、吸附劑、洗脫劑和被分離成分三者關(guān)系

在吸附色譜中6、操作方式

（1）

薄層色譜法

（2）

柱色譜法

6、操作方式（1）薄層色譜法（1）薄層色譜法

薄層色譜法是一種快速、簡便、靈敏的分離檢識方法。薄層色譜將吸附劑均勻地鋪在玻璃板上，把欲分析的樣品點加到薄層上，然后用合適的溶劑展開而達到分離、鑒定和定量的目的。薄層色譜的操作過程主要包括制板、點樣、展開和顯色四個方面。

（1）薄層色譜法薄層色譜法是一種快速、簡中藥提取分離和純化課件（2）柱色譜法

柱色譜法是天然藥物成分研究中常用的色譜方法。其分離原理、吸附劑及洗脫劑的選擇均與薄層色譜法相同。在操作上可以分為裝柱、上樣和洗脫三大步驟。柱色譜法分離樣品量大，故大多數(shù)情況下均為制備性分離，但應注意上柱的樣品一定要經(jīng)過適當?shù)募兓幚?，如過濾、萃取、脫色、沉淀等，否則將影響分離效果。（2）柱色譜法柱色譜法是天然藥物成分研究中常吸附柱層析常用混合溶劑

已烷—苯苯—乙醚苯—乙酸乙酯氯仿—乙醚氯仿—乙酸乙酯氯仿—甲醇丙酮—水甲醇—水極性遞增吸附柱層析常用混合溶劑7、兩種特殊的吸附色譜

（1）聚酰胺吸附色譜（2）大孔吸附樹脂7、兩種特殊的吸附色譜（1）聚酰胺吸附色譜

一般認為聚酰胺色譜是一種吸附色譜，因分子上的酰胺基能與酚類的羥基、酸類的羧基及醌類的醌基等形成氫鍵吸附。對黃酮類、酚類、醌類、有機酸、鞣質(zhì)等成分的分離效果極佳，可使性質(zhì)極相似的類似物得到分離。吸附性強弱取決于各種化合物與與之形成氫鍵締合的能力。通常在含水溶劑中大致有如下規(guī)律（1）聚酰胺吸附色譜一般認為聚酰胺色譜是中藥提取分離和純化課件形成氫鍵的基團數(shù)目越多，吸附力越強形成氫鍵的基團數(shù)目越多，吸附力越強成鍵位置影響吸附力。易形成氫鍵者吸附力減弱成鍵位置影響吸附力。易形成氫鍵者吸附力減弱分子中芳香化程度高，則吸附性增強，反之，則弱分子中芳香化程度高，則吸附性增強，反之，則弱各種溶劑聚酰胺柱上的洗脫能力有弱至強可大致排列如下

水甲醇丙酮氫氧化鈉水溶液甲酰胺二甲基甲酰胺尿素水溶液各種溶劑聚酰胺柱上的洗脫能力有弱至強可大致排列如下（2）大孔吸附樹脂法

大孔吸附樹脂是一種具有大孔結(jié)構(gòu)的高分子吸附劑，具有選擇性吸附與分子篩的雙重功能。根據(jù)聚合材料的不同，通常分為中等極性與非極性兩類。它所具有的吸附性是由范德華引力或產(chǎn)生氫鍵吸附的結(jié)果，在水溶液中能選擇性地吸附有效成分。分子篩的性能是由于其本身的多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)決定的?？梢莱煞址肿芋w積大小及極性的強弱，在一定規(guī)格的大孔吸附樹脂上，以適當?shù)娜軇┫疵摱蛛x。（2）大孔吸附樹脂法大孔吸附樹脂是一種具有洗脫劑的選擇

常用的洗脫劑有水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等，一般先采用水洗除雜質(zhì)后，再采用對化合物有較大溶解度的溶劑將被吸附的成分洗脫。也可采用不同極性梯度的洗脫劑分別洗下不同組分。洗脫劑的選擇常用的洗脫劑有水、甲醇、乙醇、丙大孔吸附樹脂的應用

大孔吸附樹脂因具有吸附容量大、選擇性好、吸附速度快、吸附容易及成本低、收率較高、易再生等優(yōu)點，廣泛用于天然化合物的分離與富集工作如苷與糖的分離、生物堿的精致。在多糖、黃酮、三萜類化合物的分離方面有很好的應用實例。大孔吸附樹脂的應用

大孔吸附樹脂因具有吸附容量大、選擇性二、分配色譜

(一)基本原理

（二）被分離成分與溶劑系統(tǒng)性質(zhì)的關(guān)系

(三)操作方式二、分配色譜

(一)基本原理(一)基本原理

當硅膠含水量＞17％時，其吸附性消失，硅膠成為支持劑(載體)，其吸附的水成為固定相，洗脫劑選擇與水互不相溶的有機溶劑

樣品中的成分就在固定相和移動相之間分配而達到分離。在洗脫過程中，成分極性愈大，在固定相中溶解度愈大，遷移速度愈慢，洗脫時后流出；相反，成分極性愈小，洗脫時先流出，以此進行分離。(一)基本原理當硅膠含水量＞17％時，其吸附性消失，正相色譜和反相色譜

分離水溶性較大或極性較大的成分如生物堿、苷類、糖類、有機酸等化合物。固定相多采用強極性溶劑，如水、緩沖溶液等，流動像則用氯仿、乙酸乙酯等弱極性有機溶劑，如此類色譜稱為正相分配色譜。當分離脂溶性化合物，如高級脂肪酸、油脂、游離甾體時，固定相多采用石油蠟等親脂性溶劑作固定相，水或甲醇等強極性溶劑為移動相，稱為反相分配色譜。正相色譜和反相色譜分離水溶性較大或極性（二）被分離成分與溶劑系統(tǒng)性質(zhì)的關(guān)系（二）被分離成分與溶劑系統(tǒng)性質(zhì)的關(guān)系(三)操作方式1、紙色2、分配薄層色譜3、分配柱色譜(三)操作方式1、紙色1．紙色譜

紙色譜是以濾紙作為載體(支持劑)，濾紙上吸附的水作為固定相，與水不相混溶的有機溶劑作為移動相的分配色譜?；旌衔镏懈鞒煞衷趦上嚅g的分配系數(shù)不同，在層析紙上移動的位置不同，產(chǎn)生比移值的差異，由此達到分離的目的。某種物質(zhì)在一定溶劑系統(tǒng)的兩相之間有固定的分配系數(shù)，因此在紙色譜上也有固定的比移值，借此可以達到分析鑒定的目的。1．紙色譜紙色譜是以濾紙作為載體(支持劑)，濾紙上吸附2．分配薄層色譜

分配薄層色譜的原理和紙色譜相同。裝置及操作與吸附薄層色譜相同，只是鋪板用的不是吸附劑而是支持劑。在分配色譜中流動相應先用固定相飽和，否則在展開過程中，流動相流過支持劑就把支持劑上的固定相帶走一部分或全部，最后只剩下支持劑，就不再是分配色譜了。2．分配薄層色譜分配薄層色譜的原理和紙色譜相3．分配柱色譜

裝置同吸附柱色譜。將吸附固定相的支持劑裝于柱中，樣品溶于少量固定相加入柱上端，以移動相進行洗脫，分別收集。3．分配柱色譜裝置同吸附柱色譜。將吸附固定相的三、離子交換色譜法(一)基本原理(二)操作（三）離子交換色譜的應用。三、離子交換色譜法(一)基本原理。(一)基本原理

離子交換樹脂解離的陽離子或陰離子和水溶液中的離子發(fā)生交換作用，并被吸附到柱上；再用強離子濃度的水溶液進行可逆交換，使被分離成分從柱上洗脫下來，即可實現(xiàn)分離。用于離子型成分的精制及解離有差異成分的分離。(一)基本原理