大鼠取材方案

大鼠取材方案大鼠取材方案大鼠取材方案V:1.0精細(xì)整理，僅供參考大鼠取材方案日期：20xx年X月實(shí)驗(yàn)大鼠取材方案[取材內(nèi)容]1.取大鼠靜脈血分離血漿、血清-80℃保存。2.取大鼠門(mén)靜脈血分離血清-80℃保存。3.取大鼠甲狀腺組織制備甲狀腺電鏡觀(guān)察標(biāo)本其余組織液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?.取大鼠胸腺組織制備胸腺組織電鏡觀(guān)察標(biāo)本、免疫組化觀(guān)察標(biāo)本其余組織液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?.取大鼠肺組織制備肺組織電鏡觀(guān)察標(biāo)本、免疫組化觀(guān)察標(biāo)本其余組織分裝液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?.取大鼠肝臟組織制備肝臟組織電鏡觀(guān)察標(biāo)本、免疫組化觀(guān)察標(biāo)本其余組織分裝液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?.取大鼠胰腺組織制備胰腺組織電鏡觀(guān)察標(biāo)本、免疫組化觀(guān)察標(biāo)本其余組織分裝液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?.取大鼠腸系膜淋巴結(jié)組織制備腸系膜淋巴結(jié)免疫組化觀(guān)察標(biāo)本其余組織液氮冰凍保存。9.取大鼠胃部組織制備胃粘膜組織電鏡觀(guān)察標(biāo)本、免疫組化觀(guān)察標(biāo)本其余組織分裝液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?0.取大鼠空腸組織制備腸道粘膜組織電鏡觀(guān)察標(biāo)本、免疫組化觀(guān)察標(biāo)本其余組織分裝液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?1.取大鼠回腸組織制備腸道粘膜組織電鏡觀(guān)察標(biāo)本、免疫組化觀(guān)察標(biāo)本其余組織分裝液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?2.取大鼠腎組織制備左腎組織電鏡觀(guān)察標(biāo)本、免疫組化觀(guān)察標(biāo)本右腎組織液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?3.取大鼠腎上腺組織左側(cè)制備腎上腺組織免疫組化觀(guān)察標(biāo)本右側(cè)腎上腺液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?4.取大鼠睪丸組織左側(cè)制備電鏡觀(guān)察標(biāo)本、免疫組化觀(guān)察標(biāo)本右側(cè)睪丸液氮冰凍保存?zhèn)溆?。[試劑及藥品]戊巴比妥鈉或10%水合氯醛、75%酒精、生理鹽水、多聚甲醛或福爾馬林液、3戊二醛磷酸鹽緩沖液LP或4戊二醛、肝素鈉、器械液器械清洗消毒液[器材]備皮刀、解剖臺(tái)、彎盤(pán)、組織剪、眼科剪、手術(shù)刀柄、刀片、小號(hào)彎式血管鉗、蚊式血管鉗、眼科鑷、無(wú)損傷血管夾、聚乙烯管、三通管、絲線(xiàn)、培養(yǎng)皿、天平、一次性離2ml、、凍存管、肝素鋰真空采血管、微量移液器、高速離心機(jī)、注射器10ml、5ml、2ml、無(wú)菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐[取材動(dòng)物]Wistar大鼠[取材步驟]1.取材大鼠前夜禁食自由飲水。2.腹腔注射戊巴比妥鈉(45mg/kg)或10%水合氯醛(300mg/kg)將動(dòng)物麻醉。用5ml的注射器配合7號(hào)針頭。腹腔注射時(shí)右手持注射器左手的小指和無(wú)名指抓住大鼠的尾巴另外三個(gè)手指抓住大鼠的頸部使大鼠的頭部向下。這樣腹腔中的器官就會(huì)自然倒向胸部防止注射器刺入時(shí)損傷大腸、小腸等器官。進(jìn)針的動(dòng)作輕柔防止刺傷腹部器官。尤其是對(duì)于體重較小的大鼠腹腔注射時(shí)針頭可以在腹部皮下穿行一小段距離最好是從腹部一側(cè)進(jìn)針穿過(guò)腹中線(xiàn)后在腹部的另一側(cè)進(jìn)入腹腔注射完藥物后緩緩拔出針頭并輕微旋轉(zhuǎn)針頭防止漏液。待動(dòng)物麻醉成功后仰臥位固定于解剖臺(tái)。3.修剪去頸部及腹部毛發(fā)75%酒精消毒。4.沿腹側(cè)正中線(xiàn)自陰莖上緣由下而上剪開(kāi)腹部皮膚直至劍突向兩側(cè)鈍性剝開(kāi)皮膚與皮下組織暴露腹壁淺肌層。沿白線(xiàn)鈍性分離腹壁肌肉剪開(kāi)腹膜暴露腹腔將肝臟向上翻起顯露門(mén)并游離靜脈將剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝門(mén)方向插入門(mén)靜脈抽取門(mén)靜脈血2ml無(wú)創(chuàng)血管夾夾閉門(mén)靜脈止血。將抽取門(mén)靜脈血加入一次性離心管低溫靜置過(guò)夜4℃離心3000-3500/min10分鐘吸出上清液分裝-80攝氏度保存?zhèn)溆谩?.把胃與脾之間的薄膜除去可見(jiàn)到在其下方有如樹(shù)枝狀的肉色組織分為左、右兩葉鈍銳結(jié)合整體取下胰腺組織及脾臟組織結(jié)扎止血。胰腺放置于盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中涮洗去血跡。①切取胰腺體部約1mm×1mm×1mm組織3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液LP或4戊二醛固定②胰腺體部相鄰部位組織浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定③其余組織全部液氮冰凍保存?zhèn)溆谩Ｉ睇}水沖洗操作器械。6.剔除脾周組織放置脾臟于盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中涮洗去血跡。①?gòu)钠⑴K一端切取5×5mm脾組織浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定②繼續(xù)切取脾約1mm×1mm×1mm組織3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液LP或4戊二醛固定③其余組織液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?.從劍突繼續(xù)向上剪開(kāi)皮膚自頜下向兩側(cè)鈍性剝開(kāi)皮膚與皮下組織暴露胸廓及頸淺肌層。沿正中剪開(kāi)胸廓、胸膜避免損傷胸腺的胸腔臟器。暴露心臟找到上下腔靜脈后確認(rèn)右心房5ml注射器直接穿刺右心房最大量抽取外周回心靜脈血。加4ml靜脈血入肝素鋰真空采血管搖勻室溫靜置10分鐘4℃離心3000-3500/min5分鐘吸出上清液分裝-80攝氏度保存?zhèn)溆谩?ml加入普通真空采血管低溫靜置過(guò)夜4℃離心3000-3500/min5分鐘吸出上清液分裝-80攝氏度保存?zhèn)溆谩?.展開(kāi)腸系膜于腸系膜根部尋找淡藍(lán)色結(jié)節(jié)樣淋巴結(jié)組織剔取腸系膜淋巴結(jié)數(shù)枚放置于盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中涮洗去血跡。①取部分淋巴結(jié)組織浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定②其余組織放置于無(wú)菌凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆?。心?ml、9.上端于賁門(mén)上端結(jié)扎食管下端于直腸遠(yuǎn)端結(jié)扎直腸末端鈍銳結(jié)合完整取下胃腸道。10.離斷胃放置于無(wú)菌培養(yǎng)皿殘端結(jié)扎。①沿胃大彎剖開(kāi)生理鹽水洗滌切取約1mm×1mm×1mm胃竇和胃體黏膜組織各3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液LP或4戊二醛固定②剪取寬約包含胃竇、胃體組織1條浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定③其余胃組織放置于無(wú)菌凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?1.①距treitz韌帶10cm處切取空腸10cm距回盲部10cm處切取回腸10cm生理鹽水洗滌切取約1mm×1mm×1mm空腸和回腸黏膜組織各3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液LP或4戊二醛固定②剪取寬約包含全層的空腸和回腸組織各1條做標(biāo)記浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定③其余空腸和回腸組織全部放置于無(wú)菌凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?2.結(jié)扎剪斷肝門(mén)管道系統(tǒng)鈍銳結(jié)合完整取出大鼠肝臟放置于無(wú)菌培養(yǎng)皿生理鹽水沖洗稱(chēng)重并記錄。①切取肝左葉約1mm×1mm×1mm組織3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液LP或4戊二醛固定②左葉肝組織浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定③右葉肝組織稱(chēng)重記錄分裝后全部放置于無(wú)菌凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?3.于腹膜外腰部脊柱兩側(cè)尋找到腎臟表面光滑、背腹略扁呈蠶豆形。在腎臟的前方內(nèi)側(cè)和腰下肌的腹面相接處尋找到腎上腺。右側(cè)腎上腺呈豆?fàn)铋L(zhǎng)軸指向后內(nèi)側(cè)左側(cè)呈卵圓形長(zhǎng)軸指向腹外側(cè)。鈍銳結(jié)合摘取兩側(cè)腎上腺。①左側(cè)腎上腺浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定②右葉腎上腺放置于無(wú)菌凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?4.剪開(kāi)后腹膜結(jié)扎剪斷雙側(cè)腎門(mén)鈍銳結(jié)合取下雙側(cè)腎臟剔除腎周筋膜組織放置于盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中涮洗去血跡。①于中間腎門(mén)部橫行切開(kāi)左側(cè)腎臟切取上端腎臟1mm×1mm×1mm組織3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液LP或4戊二醛固定②下端脾臟浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定③右側(cè)腎臟放置于無(wú)菌凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?5.大鼠的陰囊是由肛門(mén)腹側(cè)會(huì)陰部皮膚下垂所形成的囊袋。性成熟的大鼠睪丸和附睪下降入陰囊使表面凸出并突向后方。小心剪開(kāi)雙側(cè)陰囊可見(jiàn)橢圓形睪丸鈍銳結(jié)合摘取雙側(cè)睪丸、附睪放置于盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中涮洗去血跡。16.頸白線(xiàn)鈍銳結(jié)合分離頸前肌群直至氣管向上顯露甲狀腺。仔細(xì)操作切取包括甲狀軟骨在內(nèi)的甲狀腺。①切取約1mm×1mm×1mm組織各3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液LP或4戊二醛固定②其余組織全部浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定。切取左側(cè)睪丸下端1mm×1mm×1mm組織3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液LP或4戊二醛固定②余左側(cè)睪丸組織浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定③右側(cè)睪丸組織放置于無(wú)菌凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?7.大鼠胸腺由兩葉組成似等邊三角形。大部分位于胸腔前縱膈頂端近喉部基底部附著于心包腹面的前上方。鈍銳結(jié)合完整取下胸腺放置于盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中涮洗去血跡。①切取胸腺1mm×1mm×1mm組織3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液LP或4戊二醛固定②切取胸腺5mm×5mm×5mm組織1塊浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定③其余組織置于無(wú)菌凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?8.整體取下大鼠心肺組織剪開(kāi)分離雙側(cè)肺臟置于盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中涮洗去血跡。①切取左肺1mm×1mm×1mm組織3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液LP或4戊二醛固定②余左肺浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆谩?9.各取樣標(biāo)本細(xì)致編號(hào)登記。20.大鼠廢棄尸體處理。[注意事項(xiàng)1.戊巴比妥鈉配成1%生理鹽水溶液平均每只大鼠用量左右。2.大鼠腹腔注射可以大鼠腹腔注射的給藥容積一般為510ml/kg。3.完整取下胃腸道后已將腸系膜撕碎不易尋找腸系膜淋巴結(jié)所以先取淋巴結(jié)。取下胃腸道由專(zhuān)人操作取胃腸道及胃腸道取下后取材的操作器械單用