免疫組化雙重染色技術(shù)24張課件

免疫組化雙重染色技術(shù)免疫組化雙重染色技術(shù)免疫組化雙重染色技術(shù)第八章.免疫組化雙重染色技術(shù)(Doublestainingtechnologyinimmunohistochemistry)用免疫組化方法在同一張組織切片上同時(shí)顯示兩種或兩種以上的抗原,以發(fā)現(xiàn)其定位,形態(tài)和功能上的相互關(guān)系連續(xù)切片雙重染色法A.最簡(jiǎn)單最可靠用同樣的免疫組化方法,在兩張相鄰切片上各顯示一種抗原,然后比較.由于每張切片上只進(jìn)行次染色,所以不會(huì)互相干擾或出現(xiàn)假性雙標(biāo)記B切片厚度1-3μm.如果較厚如神經(jīng)組織切片(10-20um),可以采用“鏡像”法,即相鄰切片翻轉(zhuǎn)后貼在載玻片上,或利用軟件PS免疫熒光雙重染色法:用不同的熒光色素標(biāo)記不同的抗體,染色后觀察,相應(yīng)的抗原物質(zhì)顯示不同的顏色A.直接法:1.一步法:將FTC(490-495520-530m,黃綠色熒光)和TRTC(550620nm,紅色熒光分別標(biāo)記的兩種抗體按一定比例混合,使每個(gè)抗體均為最適稀釋度,然后孵育切片2.二步法:先后依次使用兩種熒光抗體分別孵育切片TRITCFITC改革開(kāi)放以來(lái),隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)體制改革的逐步深化和城市化進(jìn)程的日益推進(jìn),農(nóng)村外出務(wù)工人員的流動(dòng)規(guī)模不斷擴(kuò)大,由此產(chǎn)生了一個(gè)龐大的特殊的未成年人群體――留守兒童隊(duì)伍,“生活上缺少照料,思想上缺少正確引導(dǎo),學(xué)習(xí)上缺少輔導(dǎo),心理上缺少疏導(dǎo),行為上缺少教育”,監(jiān)管、教育嚴(yán)重缺失,已成為影響其健康成長(zhǎng)的嚴(yán)重的社會(huì)問(wèn)題,應(yīng)當(dāng)引起家庭、學(xué)校、社會(huì)和政府的高度重視。因此,如何動(dòng)員全社會(huì)的力量來(lái)共同關(guān)注、解決“留守兒童”教育、監(jiān)管問(wèn)題,已成為當(dāng)今時(shí)代刻不容緩的重要現(xiàn)實(shí)性課題。一、留守兒童的發(fā)展存在的問(wèn)題及表現(xiàn)(一)在心理方面父母外出后,孩子大都感到家庭空落,心理寂寞難耐?？赡艹霈F(xiàn)有的“留守男生”周末不愿回家在網(wǎng)吧、游戲機(jī)房消磨時(shí)間,或與社會(huì)青年鬼混,拉幫結(jié)伙,以尋求所謂的友情慰藉,或?qū)⑶楦屑耐性诋愋耘笥焉砩?出現(xiàn)早戀現(xiàn)象;總感到別人在欺負(fù)他,一點(diǎn)小事就計(jì)較、盲目反抗,好沖動(dòng),心理承受能力低,與人交流時(shí)充滿警惕甚至敵意,對(duì)教師、監(jiān)護(hù)人、親友的管教和批評(píng)產(chǎn)生極強(qiáng)的逆反心理,不能與人友好相處,不服老師管教,與老師對(duì)著干等;自卑自閉,孤僻敏感,愛(ài)發(fā)脾氣,情緒異常,難于溝通。(二)在思想道德和人格發(fā)展方面留守兒童的道德情感往往比較淡漠;往往怕苦怕累、貪圖安逸,這使得艱苦鍛煉、積極向上的品性得不到發(fā)展,在品行方面難以克服一些惡習(xí),有的上網(wǎng)成癮不能自拔,有的在不良引誘面前無(wú)法自制;部分留守兒童愛(ài)撒謊、罵人,亂花錢(qián),不知道勤儉節(jié)約,喜歡惹事,打架斗毆,不關(guān)心他人,以自我為中心;抽煙、賭博,迷戀網(wǎng)吧、游戲廳、歌舞廳,上進(jìn)心、集體榮譽(yù)感多有缺失,道德品行、自控能力養(yǎng)成習(xí)慣較差,常有違規(guī)、違紀(jì),甚至違法行為發(fā)生。(三)在學(xué)習(xí)方面部分留守兒童學(xué)習(xí)動(dòng)機(jī)不明確或不端正有的為了父母學(xué)習(xí)、有的為了掙錢(qián)學(xué)習(xí)、有的為了混文憑學(xué)習(xí)、有的為了物質(zhì)獎(jiǎng)勵(lì)學(xué)習(xí)、有的為了學(xué)知識(shí)學(xué)習(xí);自我控制能力差,學(xué)習(xí)自覺(jué)性不強(qiáng),有些子女還有各種學(xué)習(xí)困難;學(xué)習(xí)環(huán)境較差,往往受到各種社會(huì)不良環(huán)境的影響,參加各種不良活動(dòng),如網(wǎng)吧、游戲廳、錄像廳,而影響學(xué)習(xí)。(四)行為習(xí)慣偏差行為習(xí)慣懶散化,說(shuō)謊,在家騙父母,在校騙老師;不服管教;生活習(xí)慣較差,有的形成了早上不洗臉不瀨口,晚上不洗腳。長(zhǎng)年不理發(fā)的壞習(xí)慣;興趣愛(ài)好庸俗低級(jí)化,易于沉迷武俠小說(shuō)和網(wǎng)絡(luò)游戲中;易于模仿,模仿成年人抽煙喝酒,模仿武俠小說(shuō)拉幫結(jié)派,結(jié)拜師兄師弟。二、解決留守兒童道德教育的對(duì)策(一)國(guó)家政府宏觀政策發(fā)展地方經(jīng)濟(jì),增加農(nóng)民就近就業(yè)的機(jī)會(huì),促進(jìn)農(nóng)民增收,減少留守兒童的數(shù)量,讓留守兒童在完整的家庭教育環(huán)境下成長(zhǎng)。完善相關(guān)法律政策,保障農(nóng)民工子女的受教育權(quán)益,讓留守兒童在老師、同學(xué)群體中成長(zhǎng),讓留守兒童受到更多的監(jiān)督、照顧與關(guān)愛(ài),減少留守兒童受教育的斷層與真空。發(fā)揮政府主導(dǎo)作用,加強(qiáng)各部門(mén)的配合,多部門(mén)配合,齊抓共管。構(gòu)建基層社會(huì)呵護(hù)機(jī)制,讓關(guān)愛(ài)農(nóng)村留守兒童行動(dòng)落到實(shí)處。(二)社會(huì)環(huán)境發(fā)揮社會(huì)媒體作用,增加適合農(nóng)村留守兒童觀賞的節(jié)目。引導(dǎo)留守兒童樹(shù)立正確的是非觀念、價(jià)值觀念和道德觀念。充分調(diào)動(dòng)社會(huì)力量介入留守兒童德育工作,凈化社會(huì)風(fēng)氣,確保農(nóng)村留守兒童免受不良社會(huì)風(fēng)氣的侵?jǐn)_。社會(huì)各階層都參與到關(guān)愛(ài)行動(dòng)中來(lái),鼓勵(lì)有條件的高等院校和各種社會(huì)組織經(jīng)常組織志愿者開(kāi)展下鄉(xiāng)服務(wù)活動(dòng),向留守兒童傳播心理健康知識(shí),為他們提供心理咨詢。(三)學(xué)校教育加強(qiáng)學(xué)校的德育工作,通過(guò)多種形式的教育活動(dòng),把法制教育、心理健康教育與之聯(lián)系起來(lái),互相補(bǔ)充,以提高教育的實(shí)效性。開(kāi)設(shè)心理健康教育課,成立心理咨詢室,訂閱心理健康教育教材或報(bào)刊,在學(xué)生中加強(qiáng)心理健康教育,盡量減少留守兒童心理健康問(wèn)題的發(fā)生。與此同時(shí),學(xué)校還應(yīng)該重視學(xué)生的課余生活,培養(yǎng)健康的興趣愛(ài)好,開(kāi)展豐富多彩的文娛、體育和社會(huì)實(shí)踐活動(dòng),如演講、書(shū)法、美術(shù)、讀書(shū)比賽、參觀訪問(wèn)等,讓這些有益于學(xué)生健康發(fā)展的活動(dòng)占領(lǐng)學(xué)生的課余時(shí)間和寒暑假時(shí)間。加強(qiáng)學(xué)校和留守兒童監(jiān)護(hù)人的互動(dòng)交流,通過(guò)舉辦培訓(xùn)班、座談會(huì)等形式,組織家庭教育講師團(tuán)或有經(jīng)驗(yàn)的教師給留守兒童的監(jiān)護(hù)人講解,使他們轉(zhuǎn)變思想觀念和教育方式,提高教育和監(jiān)護(hù)水平。建立留守兒童跟蹤管理檔案,對(duì)留守兒童登記備案,分類(lèi)區(qū)別對(duì)待,進(jìn)行有針對(duì)性的教育和管理。開(kāi)通家長(zhǎng)(監(jiān)護(hù)人)熱線,組織留守兒童參與文體娛樂(lè)活動(dòng),充實(shí)業(yè)余生活,多與他們溝通交流,慰藉他們殘缺的感情。開(kāi)展“代理家長(zhǎng)”、一對(duì)一結(jié)對(duì)幫扶,經(jīng)常給孩子以親情問(wèn)候和情感疏導(dǎo)。讓孩子在這個(gè)特別的家里享受特別的親情,享受溫暖。家校聯(lián)系,充分利用假期、或春節(jié)家長(zhǎng)回家的時(shí)機(jī),召開(kāi)留守兒童家長(zhǎng)會(huì),與家長(zhǎng)交流,使學(xué)校內(nèi)外對(duì)子女的影響產(chǎn)生合力效應(yīng)。加強(qiáng)學(xué)校后勤管理,保障留守兒童安全。(四)家庭教育家長(zhǎng)一定要轉(zhuǎn)變育人觀念。要看清形勢(shì),徹底摒棄新的“讀書(shū)無(wú)用論”。充分利用兩季大忙、春節(jié)返鄉(xiāng)等機(jī)會(huì)和打電話、寫(xiě)信的方式,多向老師和監(jiān)護(hù)人了解孩子在學(xué)校、家里的學(xué)習(xí)、生活情況,多與孩子交流溝通,讓孩子感受到父母的關(guān)愛(ài)、家庭的溫暖。再者,家長(zhǎng)也可適當(dāng)改變外出務(wù)工方式。夫妻兩人盡量不要同時(shí)外出務(wù)工,一方可擇近在本地務(wù)工,最好能隔不長(zhǎng)時(shí)間回家一趟,增進(jìn)與孩子的親情交流,關(guān)心其成長(zhǎng)。父母和代養(yǎng)人努力為孩子的健康成長(zhǎng)創(chuàng)造條件和提供幫助,努力營(yíng)造一個(gè)良好的家庭教育氛圍。充分意識(shí)到留守兒童的德育問(wèn)題是一項(xiàng)系統(tǒng)工程,任何一個(gè)環(huán)節(jié)都不能疏忽。重視監(jiān)護(hù)人的選擇,考慮到受拖人是否有責(zé)任感,能否做好孩子的監(jiān)護(hù)工作,孩子所處的環(huán)境是否適宜學(xué)習(xí)和生活,并經(jīng)常保持聯(lián)系,及時(shí)了解孩子的情況。重視與留守兒童的親情溝通,要明確監(jiān)護(hù)權(quán)中的教育職責(zé),提高父母的監(jiān)護(hù)意識(shí)和責(zé)任感。父母應(yīng)以子女利益優(yōu)先,以子女能健康成長(zhǎng)優(yōu)先,意識(shí)到自己的責(zé)任和義務(wù)。盡量保持家庭教育的存在和完整。其次,應(yīng)加強(qiáng)與子女的溝通,盡量縮短溝通時(shí)間間隔,增加溝通頻率。鼓勵(lì)孩子以自己喜愛(ài)的方式向父母表達(dá)自己的生活感受,以便父母及時(shí)了解子女的成長(zhǎng),并及時(shí)進(jìn)行引導(dǎo)。在多年的歷史課堂教學(xué)中，我發(fā)現(xiàn)初中生對(duì)歷史課存在著嚴(yán)重的厭學(xué)現(xiàn)象。造成這種情況的主要原因是傳統(tǒng)的教學(xué)模式使課堂呈現(xiàn)沉悶、乏味狀態(tài)。課堂是教育教學(xué)的主陣地，所以，要想煥發(fā)課堂生命力，還得從如何充分調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)積極性著手。教師采取哪些有效的課堂教學(xué)可以充分調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)積極性？我在教學(xué)中注重培養(yǎng)學(xué)生學(xué)習(xí)歷史的興趣，瑞士著名教育家皮亞杰說(shuō)：“所有智力方面的工作都要依賴于興趣?！碑?dāng)一個(gè)人對(duì)某種事物發(fā)生興趣時(shí)，他就會(huì)入迷地去追求，去探索。學(xué)生一旦對(duì)學(xué)習(xí)產(chǎn)生興趣，必將成為他學(xué)習(xí)的內(nèi)在動(dòng)力。那么，如何增強(qiáng)課堂教學(xué)的趣味性，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)的興趣，來(lái)提高教學(xué)質(zhì)量？下面淺談幾點(diǎn)我在課堂教學(xué)中如何激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣，增強(qiáng)課堂教學(xué)效果的體會(huì)。一、巧設(shè)課堂導(dǎo)入，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣俗話說(shuō)：“好的開(kāi)頭，是成功的一半?！币_(dá)到這樣的效果，教師必須精心設(shè)計(jì)好每一節(jié)課的開(kāi)講導(dǎo)語(yǔ)，用別出心裁、平中有奇的導(dǎo)語(yǔ)來(lái)激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。如我在新的學(xué)期教學(xué)中說(shuō)：“同學(xué)們，你們一定聽(tīng)過(guò)或讀過(guò)許多歷史故事，看誰(shuí)能講出劉邦、秦檜、劉胡蘭、楊靖宇分別是什么時(shí)期的人物？他們是怎樣的人？”這一問(wèn)題的提出激發(fā)了學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，同學(xué)們議論紛紛。趁機(jī)我導(dǎo)入新課：“歷史上的人物形形色色，有的光耀千秋，象英雄劉胡蘭、楊靖宇，受到了世世代代人民的崇敬；有的遺臭萬(wàn)年，象奸臣秦檜，長(zhǎng)跪地上向人民請(qǐng)罪?！边M(jìn)而激勵(lì)學(xué)生：“我們學(xué)習(xí)了歷史，就應(yīng)懂得怎樣做人。我們應(yīng)當(dāng)做象劉胡蘭、楊靖宇那樣的人，有遠(yuǎn)大的理想，高尚的氣節(jié)，將來(lái)才能為建設(shè)祖國(guó)多作貢獻(xiàn)?！边@樣的開(kāi)頭，激發(fā)了學(xué)生的興趣，達(dá)到了預(yù)期的效果。二、巧用多媒體教學(xué)，激發(fā)學(xué)生的投入感“興趣是創(chuàng)造一個(gè)歡樂(lè)光明的教學(xué)途徑之一?！庇辛伺d趣，學(xué)生才能主動(dòng)、愉快地學(xué)習(xí)，才能在課堂教學(xué)中發(fā)揮主體作用和主動(dòng)精神。中華五千年文明史，大多保存在文字記述的歷史文獻(xiàn)中。單純的文字信息使學(xué)生感到枯燥乏味，生動(dòng)的歷史場(chǎng)景靠語(yǔ)言難以再現(xiàn)。因此運(yùn)用多媒體教學(xué)可以很好的發(fā)揮這些資源優(yōu)勢(shì)，把鮮活的歷史信息呈現(xiàn)出來(lái)，使學(xué)生如身臨其境，在感性上受到強(qiáng)烈刺激，從而吸引學(xué)生主動(dòng)投入到歷史學(xué)習(xí)中去。如我在講《中華人民共和國(guó)成立》這課時(shí)，運(yùn)用多媒體展示開(kāi)國(guó)大典的圖片并同時(shí)播放資料“偉人音”----“中華人民共和國(guó)中央人民政府今天成立了”，讓學(xué)生在充分了解相關(guān)歷史的基礎(chǔ)上感受這令人歡欣鼓舞的時(shí)刻來(lái)之不易，不僅激發(fā)了學(xué)生的歷史學(xué)習(xí)興趣，而且增強(qiáng)了課堂教學(xué)效果。三、巧設(shè)疑問(wèn)，開(kāi)啟學(xué)生心智學(xué)起于思，思源于疑?！耙伞笔屈c(diǎn)燃學(xué)生積極思維的火種，是學(xué)生創(chuàng)新能力培養(yǎng)的突破口。巧妙質(zhì)疑可以開(kāi)啟學(xué)生心智，教師在教學(xué)中要有意識(shí)地設(shè)置一些疑問(wèn)，使他們先感到“山重水復(fù)疑無(wú)路”，后激勵(lì)他們?nèi)で蟆傲祷饔忠淮濉?。我在講《昌盛的秦漢文化》“紙的發(fā)明和蔡倫改進(jìn)造紙術(shù)”時(shí)，我設(shè)問(wèn)：“紙?jiān)谌藗內(nèi)粘Ｉ钪杏兄浅Ｖ匾淖饔?，誰(shuí)能說(shuō)出最早發(fā)明紙的國(guó)家和時(shí)間？”學(xué)生回答“中國(guó)”和“西漢前期”后，我又提出第二個(gè)問(wèn)題：“我國(guó)在紙發(fā)明以前用什么作書(shū)寫(xiě)材料？”同學(xué)回答“龜甲、竹木簡(jiǎn)或帛”。于是我又提出第三個(gè)問(wèn)題：“與紙相比，竹木簡(jiǎn)和帛的缺點(diǎn)是什么？”學(xué)生回答：“竹木簡(jiǎn)太笨重，帛的價(jià)格昂貴”，這時(shí)我補(bǔ)充道：“要是你們的書(shū)包里的學(xué)習(xí)材料還是木簡(jiǎn)的話，會(huì)怎么樣？”學(xué)生聽(tīng)后，情不自禁地議論紛紛，都感到紙的發(fā)明太偉大了。緊接著提出第四個(gè)問(wèn)題：“西漢發(fā)明了紙，為什么東漢蔡倫又要改進(jìn)造紙術(shù)？”學(xué)生們紛紛說(shuō)：“在蔡倫之前造的紙質(zhì)量差，易脆裂，厚薄不一，急需改進(jìn)?！边@樣一環(huán)扣一環(huán)的設(shè)疑解難，把學(xué)生引向柳暗花明又一村的境地，這樣既激發(fā)了興趣，又掌握了知識(shí)，也更好地理解了造紙術(shù)的發(fā)明是中華民族對(duì)世界文明的巨大貢獻(xiàn)的偉大意義。四、巧設(shè)情感教育，提高課堂效果蘇聯(lián)教育家蘇霍姆林斯基在《給教師的建議》中說(shuō)：“讓學(xué)生體驗(yàn)到一種自己在親身參與掌握知識(shí)的情感，乃是喚起少年特有的對(duì)知識(shí)的興趣的重要條件?！痹诮虒W(xué)中，堅(jiān)持情感教育不僅激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣，又使學(xué)生在潛移默化中受到教育。如講《秦漢開(kāi)拓西域和絲綢之路》一課時(shí)，在講到張騫帶著１００多人剛走出漢朝邊境，就被匈奴兵抓住時(shí)，學(xué)生為張騫的安危擔(dān)憂；當(dāng)聽(tīng)到匈奴人想讓張騫投降，而張騫始終保持漢節(jié)，忠于祖國(guó)時(shí)，學(xué)生被張騫忠心報(bào)國(guó)的愛(ài)國(guó)主義精神所感動(dòng)；；當(dāng)再次得知張騫歷盡千難萬(wàn)險(xiǎn)，從大月氏返回漢朝的途中又被匈奴人捉住并扣留一年時(shí)，學(xué)生又一次為張騫的命運(yùn)擔(dān)憂；當(dāng)知道張騫好不容易在經(jīng)受１３年的磨難之后，終于和另一個(gè)人回到了長(zhǎng)安時(shí)，學(xué)生的高興之情溢于言表。這樣講述不但使學(xué)生產(chǎn)生了極大興趣，尤如身臨其境，同時(shí)又加深了對(duì)張騫這個(gè)歷史人物的了解，深深地被張騫的愛(ài)國(guó)主義精神所感動(dòng)。這樣以情感人的教學(xué)能更好地回答課文中提出的“張騫對(duì)我國(guó)歷史上作出了什么貢獻(xiàn)”。五、巧設(shè)開(kāi)放氣氛，使師生平等互動(dòng)歷史教學(xué)是師生相互交往、共同發(fā)展的互動(dòng)過(guò)程。有效的課堂應(yīng)該是教師的教與學(xué)生的學(xué)在平等互動(dòng)中交流溝通，來(lái)實(shí)現(xiàn)課堂教學(xué)目標(biāo)和提高課堂效率。依靠互動(dòng)課堂，教學(xué)資源得以整合、教學(xué)環(huán)境得以優(yōu)化、教學(xué)凝聚力得以增強(qiáng)、教學(xué)質(zhì)量得以提升。如講：馬克思主義在中國(guó)有過(guò)怎樣的發(fā)展？你能看出和中國(guó)革命、發(fā)展的聯(lián)系嗎？學(xué)生開(kāi)始自由討論。我傾聽(tīng)學(xué)生發(fā)表見(jiàn)解，并且對(duì)每位同學(xué)的發(fā)言作鼓勵(lì)性點(diǎn)評(píng)，讓他們獲得探討的快樂(lè)。最后學(xué)生互動(dòng)討論的結(jié)果是：毛澤東建立農(nóng)村革命根據(jù)地，走農(nóng)村包圍城市最后奪取革命勝利的道路，就是馬克思主義普遍真理和中國(guó)革命具體實(shí)際相結(jié)合的產(chǎn)物。后來(lái)，取得長(zhǎng)征偉大勝利，建立新中國(guó)，實(shí)行改革開(kāi)放等都是在馬克思主義指導(dǎo)下走過(guò)的正確道路。最后得出結(jié)論“從實(shí)際出發(fā)，將馬克思主義普遍真理同中國(guó)的具體實(shí)際相結(jié)合，才是正確的道路?！碑?dāng)然激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)歷史興趣的方法和途徑還很多，如巧講典故，以奇引趣；精讀詩(shī)詞，以詩(shī)牽趣；編寫(xiě)歌謠，以歌導(dǎo)趣；設(shè)置圖表，以圖增趣等等，只要經(jīng)過(guò)教師精心設(shè)計(jì)，巧妙安排，就一定能在教學(xué)中充分激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)歷史的興趣，使他們的學(xué)習(xí)化繁為簡(jiǎn)，變被動(dòng)為主動(dòng)，從而在充滿興趣的教學(xué)中，既接受了愛(ài)國(guó)主義教育，又增長(zhǎng)了知識(shí)，提高了教學(xué)質(zhì)量，真正達(dá)到學(xué)史明志，知史做人的目的。免疫組化雙重染色技術(shù)免疫組化雙重染色技術(shù)免疫組化雙重染色技術(shù)第八章.免疫組化雙重染色技術(shù)(Doublestainingtechnologyinimmunohistochemistry)用免疫組化方法在同一張組織切片上同時(shí)顯示兩種或兩種以上的抗原,以發(fā)現(xiàn)其定位,形態(tài)和功能上的相互關(guān)系連續(xù)切片雙重染色法A.最簡(jiǎn)單最可靠用同樣的免疫組化方法,在兩張相鄰切片上各顯示一種抗原,然后比較.由于每張切片上只進(jìn)行次染色,所以不會(huì)互相干擾或出現(xiàn)假性雙標(biāo)記B切片厚度1-3μm.如果較厚如神經(jīng)組織切片(10-20um),可以采用“鏡像”法,即相鄰切片翻轉(zhuǎn)后貼在載玻片上,或利用軟件PS第八章.免疫組化雙重染色技術(shù)(Doublestainin免疫熒光雙重染色法:用不同的熒光色素標(biāo)記不同的抗體,染色后觀察,相應(yīng)的抗原物質(zhì)顯示不同的顏色A.直接法:1.一步法:將FTC(490-495520-530m,黃綠色熒光)和TRTC(550620nm,紅色熒光分別標(biāo)記的兩種抗體按一定比例混合,使每個(gè)抗體均為最適稀釋度,然后孵育切片2.二步法:先后依次使用兩種熒光抗體分別孵育切片TRITCFITC免疫熒光雙重染色法:用不同的熒光色素標(biāo)記不同的抗3觀察:同一個(gè)視野里a對(duì)每一種熒光標(biāo)記物(綠色或紅色)使用不同的濾色板進(jìn)行觀察和照相,每張照片顯示一種熒光,比較兩張照片b.兩種熒光重疊照相,則在一張照片上可發(fā)現(xiàn)分別含不同抗原的細(xì)胞(呈綠色或紅色,如果兩種抗原存在于同一個(gè)細(xì)胞或結(jié)構(gòu),則呈現(xiàn)兩種紅綠熒光的混合色,如黃色p58/GolgibPresenilin1c免疫熒光雙重染色法:FTC綠色,TRTC紅色,混合色為黃色3觀察:同一個(gè)視野里B.間接法:羊抗兔lgG羊(或豬)1.兩種一抗不標(biāo)記,但來(lái)自抗脈鼠IgG不同種屬的動(dòng)物如兔和豚鼠2兩種來(lái)源于同種動(dòng)物或不豚鼠IgG同種動(dòng)物的二抗(如羊抗兔lgG和羊抗豚鼠lgG,或羊抗兔lgG和豬抗豚鼠lG分別以FTC和TRTC標(biāo)記3染色程序:a先用第一種一抗和相應(yīng)的標(biāo)記二抗依次孵育切片,顯示第種抗原;然后再用第二種一抗和相應(yīng)的標(biāo)記二抗依次孵育切片,顯示第二種抗原b.將兩種一抗混合后孵育切片,再將兩種標(biāo)記的二抗混合后孵育切片,最后用熒光顯微鏡觀察B.間接法:免疫熒光雙重染色法:FTC綠色,TRTC紅色,混合色為黃色免疫熒光雙重染色法:FTC綠色,TRTC紅色,混合色為黃色HoechstAnti-MycAnti-USP26-W12MergeWLin.USP26stainedbyAlexaFluor488andMycstainedbyAlexaFluor594inCOS7cells.Nucleiwerestainedbyhoechstblue6Hoechst三.免疫酶雙重染色A.單酶法1.原理a.用一種酶如HRP標(biāo)記顯示兩種不同的抗原,但用不同的電子供體如DAB和CN呈現(xiàn)不同顏色的反應(yīng)終產(chǎn)物b.兩種一抗來(lái)自同種屬動(dòng)物,兩重染色之間需將第一次染色反應(yīng)中的各級(jí)抗體和酶或各級(jí)抗體,酶和反應(yīng)產(chǎn)物從組織上洗脫c.連續(xù)做兩次染色,所費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)三.免疫酶雙重染色洗脫各級(jí)抗體和酶elution洗脫各級(jí)抗體,酶和反應(yīng)產(chǎn)物photographyAAelution抗體,酶和反應(yīng)產(chǎn)物洗脫8洗脫各級(jí)抗體和酶2染色的最佳條件:先對(duì)兩種待檢抗原分別染色,以決定合適的抗體稀釋度和反應(yīng)條件等3.雙重染色的先后次序a.先顯示含量較少的抗原b先顯示容易受染色過(guò)