3,5-二硝基水楊酸比色定糖法

實(shí)驗(yàn)一3硝基水酸比色定糖目的要1.握35-硝基水酸比色法定的原理方法2.3硝基水酸定糖測(cè)定山芋份的總糖及還原糖。3.悉721分光光度計(jì)原理及用方法實(shí)驗(yàn)原3，5-二硝基楊酸與還原共熱后還原成棕紅的氨基合物，在一定范圍，還原糖的和反應(yīng)的顏色強(qiáng)度比例關(guān)，利用比色可測(cè)知品的含量。該方法半微量糖法，操作便，快，雜質(zhì)干擾少。實(shí)驗(yàn)操方法一、葡糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制定取9支試管，分別下表順加入各種試：將上述管溶液混勻，在721光光度上用520納米行比色定，用空白溶液調(diào)零點(diǎn)記錄光收值。以葡糖濃度橫坐標(biāo)，光收值為坐標(biāo)繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線二、山粉中總糖和原糖含的測(cè)定1.樣中還原的提?。簻?zhǔn)稱(chēng)取2克山芋粉，放100毫燒杯，加入85%乙醇50升，混，在恒溫水中保溫鐘，過(guò)，濾渣再用85%醇提取次將濾液并，蒸去醇，少量水移入100升容量瓶，用水稀到刻度，備。2.樣中總糖水解及提取準(zhǔn)確稱(chēng)山芋粉1克，放大試管，加入10升鹽酸和15升蒸餾?；炀?，在水浴中熱半時(shí)后，碘化-碘溶液查水解程度若已水完全，則不現(xiàn)藍(lán)色冷卻后加入酞指示1滴，以10%氫氧化中和至液呈微紅色過(guò)濾并容至毫。再精確吸上述溶10毫升放人升容量瓶，稀釋刻度，備用

3.樣中含糖的測(cè)定：取大試管，別按下加入各種試：將各管勻后，按制標(biāo)準(zhǔn)曲時(shí)同樣的操測(cè)定各的光密度，標(biāo)準(zhǔn)曲線上出相應(yīng)的還糖含量按下述公式算出山粉內(nèi)還原糖總糖的分含量總糖

水解后還原糖毫克數(shù)品釋倍數(shù)樣品重量

100還原一、試

還原克品稀釋數(shù)樣品試劑和材

100（135-硝基水酸試劑（稱(chēng)試劑：甲液：解6.9克結(jié)晶于毫IO%氧化鈉，并稀釋至升，在此溶中加入6.9亞硫酸鈉。乙液：取255克酒酸鈉，加到300毫升10%氫氧化鈉中，再入毫升5-硝基水酸溶液將甲液乙液相混合得黃色劑，貯于棕試劑瓶。在室溫下放置7—天以后用。（20.1%葡萄糖標(biāo)液：準(zhǔn)確取100毫分析純的葡糖預(yù)先在105℃干燥至重，少量蒸水溶解后定至100毫升，冰箱保備用。（3）酸溶液（410%氫氧鈉溶液（5）化鉀-溶液碘試劑（6）酚酞指示。（7）85%醇。二、器（1）管和試架。（2）堿定管（毫升（3）臺(tái)。（4）滴定夾。（5）量管（1毫升和2毫升。（6容量瓶（100升。（7）水浴鍋（）玻璃漏斗和燒。（9）鐵三架。（10）筒（10升、100毫（）電熱恒溫水?。簹鉄?。

（）玻璃棒。（白瓷板。（721分光度計(jì)思考題1.比測(cè)定的作要點(diǎn)是什？基本理是什么？2.721型光光度的原理及使時(shí)的注事項(xiàng)是什么3.比測(cè)定時(shí)什么要設(shè)計(jì)白管？4.糖包括哪化合物答：1.）比色測(cè)定操作要：相同型號(hào)的色管.2.配制等體的系列標(biāo)準(zhǔn)品.3.制待測(cè)樣與標(biāo)準(zhǔn)品等體積).4.比,找出相的濃度DNS的原理：在堿性條下，還糖3,5-二硝水楊酸熱，3,5-硝基水楊酸還原為棕紅的3-基-5-硝水楊酸，而原糖則氧化成糖酸其它產(chǎn)物在一定范圍，還原的量與棕紅物質(zhì)顏深淺的程度呈一定比例關(guān)，540nm長(zhǎng)下測(cè)定棕色物質(zhì)消光值，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)線可求出樣中還原的含量。2.分光光度計(jì)的本依據(jù)朗伯—比耳律，它根據(jù)相對(duì)測(cè)原理工的，即先選某一溶劑作標(biāo)準(zhǔn)溶，設(shè)定其透率為100%被測(cè)試的透光率是相對(duì)于準(zhǔn)溶液而言，即讓色光分別通被測(cè)試和標(biāo)準(zhǔn)溶液二者能的比值是在一定波下對(duì)于測(cè)試樣的透率。實(shí)驗(yàn)注事項(xiàng)（1為了防光電管疲勞不測(cè)定必須將試樣蓋打開(kāi)使光路切，以延長(zhǎng)光管的使壽命。（）取拿比色時(shí)，手只能捏住比皿的毛璃面而不能比色皿的光表面。（）比色皿不用堿溶或氧化性強(qiáng)洗滌液滌，不能用刷清洗。比皿外壁著的水或溶應(yīng)用擦紙或細(xì)而軟吸水紙干，不要擦，以免傷它的學(xué)表面3.用空白管調(diào)整位時(shí)，器和試劑等成的系誤差就可以消或減到最低程度上面說(shuō)是一般概念在很多驗(yàn)中都是這做，或以標(biāo)準(zhǔn)試樣空白試，就是為降低系統(tǒng)誤。4.總