植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)

關(guān)于植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第1頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)一、現(xiàn)場檢驗(yàn)檢疫技術(shù)1、直接檢查：利用肉眼或放大鏡注意有無害蟲的排泄物、脫皮殼、卵、幼蟲、蛹、繭和成蟲諸蟲態(tài)以及食痕和危害狀等。第2頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)一、現(xiàn)場檢驗(yàn)檢疫技術(shù)2、過篩檢驗(yàn)：取樣攜回室內(nèi)進(jìn)行過篩檢驗(yàn)，按糧谷、油料、豆類顆粒形狀和大小，選用不同孔徑的規(guī)格篩第3頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)一、現(xiàn)場檢驗(yàn)檢疫技術(shù)2、過篩檢驗(yàn)：將需用的篩層，按篩孔大小順序套好(小篩孔放在下面)，將樣品放人上層選篩內(nèi)(不宜過多，約達(dá)篩層高度的2／3)，套上篩蓋，電動(dòng)或手動(dòng)回旋轉(zhuǎn)動(dòng)一定時(shí)間后，按篩層將篩上物和篩下物分別倒入白瓷盤中，用擴(kuò)大鏡或解剖鏡檢查，檢出昆蟲和螨類，同時(shí)還可檢出蟲粒、病粒、雜草籽和其它夾雜物。若檢查時(shí)室溫低于10℃，最下層篩出物須在20—30℃下處理15—20min，促使害蟲活動(dòng)，再行檢查。第4頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)一、現(xiàn)場檢驗(yàn)檢疫技術(shù)3、軟X光透視檢測4、檢疫犬檢查第5頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)1、相對密度檢驗(yàn)一定濃度的食鹽水或其它溶液第6頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)2、染色檢驗(yàn)法檢查糧粒中的谷象、米象等可將樣品放在鐵絲網(wǎng)中，在30℃的水中浸lmin，再移入1％高錳酸鉀溶液中l(wèi)min，然后用清水沖洗或用過氧化氫硫酸液洗滌20—30s，用擴(kuò)大鏡檢查，挑出有直徑約0．5mm黑斑點(diǎn)的籽粒，再行剖檢。豆類可用1％碘化鉀或2％碘酒染色1—1．5min，再移入0．5％氫氧化鈉或氫氧化鉀液中20—30s，取出用水沖洗30s，如粒面有1—2mm直徑的黑圓點(diǎn)，則內(nèi)部可能隱藏豆象。第7頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)2、染色檢驗(yàn)法對植物病原細(xì)菌檢驗(yàn)可以用革蘭氏染色法和鞭毛染色法，對于植物病原線蟲則用透明染色法第8頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)3、直接鏡檢第9頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)4、洗滌檢驗(yàn)法用于檢測種子表面附著的真菌孢子，包括黑粉菌的厚垣孢子、霜霉菌的卵孢子、銹菌的夏孢子以及多種半知菌的分生孢子等。第10頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)4、洗滌檢驗(yàn)法洗滌檢驗(yàn)的操作程序如下：(1)洗脫孢子：將一定數(shù)量的種子樣品放人容器內(nèi)并加入定量蒸餾水或其它洗滌液，振蕩5一lOmin，使孢子脫離種子，轉(zhuǎn)移到洗滌液中。(2)離心富集：將孢子洗滌液移人離心管，低速離心(2500—3000r／min)10—15min，使孢子沉集在離心管底部。第11頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)4、洗滌檢驗(yàn)法洗滌檢驗(yàn)的操作程序如下：(3)鏡檢計(jì)數(shù)：棄去離心管內(nèi)的上清液，加入一定量蒸餾水或其它浮載液，重新懸浮沉集在離心管底部孢子，取懸浮液，滴加在血球計(jì)數(shù)板上，用高倍顯微鏡檢查孢子種類并計(jì)數(shù)，據(jù)此可計(jì)算出種子的帶菌量。(4)孢子生活力測定：用常規(guī)孢子萌發(fā)測定法、分離培養(yǎng)法或紅四氯唑(TTC)染色法判定孢子死活。第12頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)5、分離培養(yǎng)檢驗(yàn)主要適用于潛伏于種子、苗木、繁殖材料及植物產(chǎn)品內(nèi)的病原菌分離真菌一般用PDA培養(yǎng)基，分離培養(yǎng)細(xì)菌用牛肉汁培養(yǎng)基，對于特殊要求的菌類可以用選擇性培養(yǎng)基第13頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)5、分離培養(yǎng)檢驗(yàn)方法有：組織分離法稀釋分離法劃線分離法第14頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)6、血清學(xué)檢驗(yàn)方法有：免疫電鏡技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)斑點(diǎn)免疫法免疫熒光抗體法第15頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)7、生理生化測定第16頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)8、噬菌體檢驗(yàn)法噬菌體是感染細(xì)菌的病毒，能在活細(xì)菌細(xì)胞中寄生繁殖，破壞和裂解寄主細(xì)胞，在液體培養(yǎng)時(shí)，使混濁的細(xì)菌懸浮液變得澄清，在固體平板上培養(yǎng)時(shí)，則出現(xiàn)許多邊緣整齊，透明光亮的圓形無菌空斑，稱為“噬菌斑”，肉眼即可分辯。第17頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)8、噬菌體檢驗(yàn)法國內(nèi)已采用噬菌體法檢查水稻稻種是否帶有白葉枯病菌。病田稻種的稻殼中通常都帶有?；缘氖删w或存活細(xì)菌，可據(jù)以確定稻種確系帶菌。第18頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)8、噬菌體檢驗(yàn)法取10g稻種，脫下谷殼剪碎或磨碎，放入已滅菌處理的燒杯中，加滅菌水20ml浸泡30min，過濾后分別吸取濾液1.5、1.0和0.5ml，置于三個(gè)滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)第19頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)8、噬菌體檢驗(yàn)法各加lml新培養(yǎng)的白葉枯細(xì)菌指示菌液(濃度為9X108／ml以上)混勻后加入10ml融化的肉汁胨瓊脂培養(yǎng)基，搖勻凝成平板后，放在25—28℃溫箱中，培養(yǎng)10—12h第20頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)9、保濕萌芽檢驗(yàn)保濕培養(yǎng)檢驗(yàn)吸水紙檢驗(yàn)法通常用底部鋪有三層吸水紙的塑料培養(yǎng)皿或其它適用容器作培養(yǎng)床。先用蒸餾水濕潤吸水紙，將種子按適當(dāng)距離排列在吸水紙上，再在一定條件下培養(yǎng)，對多數(shù)病原真菌，適宜的培養(yǎng)溫度為20—25℃，每天用近紫外光(NUV)燈或日光燈照明12h。第21頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)9、保濕萌芽檢驗(yàn)保濕培養(yǎng)檢驗(yàn)吸水紙檢驗(yàn)法培養(yǎng)7一l0d后檢查和記載種子帶菌情況，檢查時(shí)，用兩側(cè)照明的實(shí)體顯微鏡逐粒種子檢查。本法依據(jù)種子上真菌菌落的整個(gè)形象，即“吸水紙鑒別特征”來區(qū)分真菌種類。檢查時(shí)應(yīng)特別注意觀察種子上菌絲體的顏色、疏密程度和生長特點(diǎn)、真菌繁殖結(jié)構(gòu)的類型和特征第22頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)9、保濕萌芽檢驗(yàn)保濕培養(yǎng)檢驗(yàn)冰凍吸水紙法是前一個(gè)的改進(jìn)版，可以減少雜菌污染、抑制種子發(fā)芽第23頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)9、保濕萌芽檢驗(yàn)保濕培養(yǎng)檢驗(yàn)瓊脂平皿法用瓊脂培養(yǎng)基代替了吸水紙第24頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)9、保濕萌芽檢驗(yàn)萌芽法檢驗(yàn)沙土萌發(fā)檢驗(yàn)土內(nèi)萌發(fā)檢驗(yàn)試管幼苗癥狀測定第25頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)10、誘捕器誘集檢驗(yàn)信息素誘餌第26頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)11、鑒別寄主檢測應(yīng)用于植物病毒的鑒定、診斷及檢疫中第27頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)12、植物病原線蟲的各種分離方法漏斗分離法：此法適于分離少量植物材料中有活動(dòng)能力的線蟲。基本裝置是一個(gè)直徑適當(dāng)?shù)穆┒?，漏斗頸末端接一段乳膠管，用彈簧夾把管子夾住。漏斗放置在支架上，其內(nèi)盛滿清水。把檢驗(yàn)的植物材料洗掉泥土后，切成0．5cm長的小段，放在紗布中包起來，輕輕地浸入漏斗內(nèi)。線蟲從植物組織中逸出，經(jīng)紗布沉落到漏斗頸底，經(jīng)12h或過一夜后，打開彈簧夾使膠管前端的水流到玻皿內(nèi)，鏡檢線蟲第28頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)12、植物病原線蟲的各種分離方法淺盤分離法：原理同漏斗法第29頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)12、植物病原線蟲的各種分離方法簡易漂浮分離法：本法利用干燥的線蟲胞囊能漂浮在水面的特性分離土壤中的馬鈴薯金線蟲(Globoderarostochiensis)和各種胞囊線蟲(Heterodera)。第30頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)12、植物病原線蟲的各種分離方法過篩分離法：本法用于從大量土壤中分離各類線蟲。將充分混勻的土壤樣品置于不銹鋼盆或塑料盆中，加入2—3倍的冷水，攪拌土壤并振碎土塊后過20目篩，土壤懸浮液流人第二個(gè)盆中并噴水洗滌篩上物，棄去第一個(gè)盆中和篩上的剩余物，第二個(gè)盆中的土壤懸浮液經(jīng)lmin沉淀后再按上法過150目篩，從篩子背面將篩中物沖洗到燒杯中，盆中土壤懸浮液再繼續(xù)過325目和500目篩。篩中物收集在燒杯中靜置20—30min，線蟲沉集底部，棄去上清液，將沉集物轉(zhuǎn)移到玻皿內(nèi)鏡檢或吸取線蟲鑒定。第31頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第二節(jié)植物檢驗(yàn)檢疫新技術(shù)的應(yīng)用一、核酸雜交技術(shù)二、限制性片斷長度多態(tài)性標(biāo)記技術(shù)（RFLP）第32頁，共35頁，2022年，5月20日，2點(diǎn)0分，星期五第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)