血凝四項課件

止凝血產(chǎn)品線移轉(zhuǎn)

沃芬中國

08

May2012血凝常規(guī)項目介紹段鵬2013.5GrowingTogether2013

|攜手發(fā)展1血凝項目血栓/止血檢驗用于診斷的試驗大致分為兩部分：篩選試驗和確診試驗（或者也可以分為常規(guī)試驗和特殊試驗）篩選試驗一般有：PT,APTT,Fib,TT,其它為特殊試驗?？鼓龢吮?/p>

抗凝劑：0.109mol/L（3.2%）枸櫞酸鈉國際血液學標準化委員會推薦，因為V因子和Ⅷ因子在此抗凝劑中更為穩(wěn)定。另外，用枸櫞酸鈉抗凝的血漿做APTT試驗，其對肝素敏感性遠遠高于草酸鹽抗凝血漿?？鼓齽?全血=1:9一定要準確，抗凝劑在血標本中的絕對含量可改變血漿中鈣離子濃度，而影響實驗結果。收集管：最好使用真空法商業(yè)采集管，不推薦使用注射器凝血55

激活XII XIIaXI XIaIX IXa

PF3

VIIIa

Ca++內(nèi)源性途徑VII-TFVIIa-TF外源性途徑共同途徑II IIaX XaPF3 VaCa++VIIIV纖維蛋白原

纖維蛋白Ca++

Ca++

凝血因子的主要類型因子

I：

纖維蛋白原

因子

II：凝血酶原

因子

III：

組織因子

因子

IV：鈣因子(Ca2+)

因子

V：促凝血球蛋白原，易變因子

（因子

VI

事實上是活化的第五因子，已經(jīng)取消因子VI的命名。）

因子

VII：轉(zhuǎn)變加速因子前體，促凝血酶原激酶原，輔助促凝血酶原激酶

因子

VIII：抗血友病球蛋白A

(AHG

A)，抗血友病因子A

（AHFA)，血小板輔助因子

I，血友病因子

VIII

或

A,

因子

IX：抗血友病球蛋白B

(AHG

B)，抗血友病因子B

(AHF

B)，血友病因子

IX

或

B

因子

X：STUART(-PROWER)-F，自體凝血酶原C

因子

XI：ROSENTHAL因子，抗血友病球蛋白C

因子

XII：HAGEMAN因子，

表面因子

因子

XIII：血纖維穩(wěn)定因子6血液凝固內(nèi)源性凝血途徑

intrinsicpathway

參與因子：VIII,IX，XI，XII，PK(激肽釋放酶原),HMWK（高分子量激肽原）參與凝血的因子全部來自血液，通常因血液與帶負電荷的異物（玻璃、白陶土、硫酸酯、血管壁的膠原蛋白等）表面接觸而啟動，啟動因子為FXII。正常新鮮血漿中：I，VIII,IX，XI，XII

正常新鮮血清中：IX，XI，XII

血液凝固外源性凝血途徑

extrinsicpathway

參與因子：III

VII

來自于血液之外的組織因子（TF）暴露于血液而啟動的凝血過程，啟動因子為FIII。開始于外傷或組織損傷，包括手術。PT凝血酶原時間

檢測原理：

向患者血漿中加入凝血酶原時間試劑，鈣離子存在情況下，可以激

活外源性凝血途徑。最終使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，

形成固體凝膠,PT檢測實驗可以定義為外源性凝血系統(tǒng)的

篩選實驗。

1012XII XIIaXI XIaIX IXaFP3 VIIIaCa++VII-TF

VIIa-TFFibrinogen FibrinII IIa

PTX XaFP3 VaCa++PT對因子II,V,VII,X和低纖維蛋白原敏感促凝血酶原激酶Ca++INRISIMNPTINR值是PT比率的國際敏感指數(shù)（ISI）次方。它代表的是，當存在有國際參考值時的PT比率。每一個批號的PT試劑都有其特定的ISI值，在不同儀器上其值也可能不同。因此，ISI值對試劑和儀器來說都是特異的。美國臨床病理學會（ACCP）建議選擇ISI值低于1.7的PT試劑。正常參比血漿PT值（MNPT）是測定20個健康成年人新鮮血漿的PT，然后取其平均值MNPT正常對照血漿要求采集20份以上年齡在18歲～55歲之間的健康男女個體，刪除服藥者。須在平靜狀態(tài)下采血血液經(jīng)抗凝離心后，分離血漿等量混勻，分裝小瓶，凍存于-80℃?zhèn)溆没蚶鋬龈稍?。PT檢測的臨床意義PT縮短：常見于高凝狀態(tài)（比如DIC早期）先天性凝血因子Ⅴ增多口服避孕藥血栓性疾病等PT檢測的臨床意義PT延長：

先天性Ⅶ、Ⅹ、Ⅴ、Ⅱ和Fg缺乏癥

獲得性缺乏，肝病，維生素K缺乏癥口服抗凝劑華法令等藥物和肝素治療時血循環(huán)中有抗凝物質(zhì)肝素、抗Ⅶ、Ⅹ、Ⅴ、Ⅱ的抗體DIC時，由于凝血因子的大量的消耗和產(chǎn)生的FDP拮抗凝血酶的作用可使PT延長。PT的臨床應用18手術前的篩選試驗凝血因子缺乏的篩選先天性缺乏獲得性缺乏新生兒出血性疾病

腸道重吸收障礙肝?。ǜ斡不?，肝炎，黃疸）彌散性血管內(nèi)溶血（DIC）口服抗凝劑治療的監(jiān)測基因重組試劑的優(yōu)勢合成技術重組試劑動物提取試劑高度純化的磷脂成分提取前對動物中的有效成分含量不清楚重組的組織因子提取兔或牛的腦組織脂質(zhì)和蛋白的成分比例明確混合異源的磷脂及蛋白質(zhì)無季節(jié)變化的差異提取物的有效成分受季節(jié)變化影響溶解后溶液不混濁溶解后溶液混濁試劑穩(wěn)定性顯著提高組織因子含量可變性大可復制20APTT活化部分凝血活酶時間

檢測原理：

血漿樣本與適量磷脂共同孵育，帶有負電荷的接觸激活劑與緩沖液共同作

用啟動內(nèi)源性凝血途徑。37℃下孵育一定時間后，加入鈣以觸發(fā)凝血

過程，測定血液凝固所需要的時間。

APTT檢測實驗可以定義為內(nèi)源性凝

血系統(tǒng)的篩選實驗。2123

XII

XIIaXI

XIaIX

IXa

FP3

VIIIa

Ca++VII-TFVIIa-TFFibrinogen

FibrinII

IIa

X

Xa

FP3

Va

Ca++APTT激活物+磷脂CaCl2APTT對因子XII,XI,IX,VIII,X,II,V和低纖維蛋白原敏感APTT檢測的臨床意義APTT延長：Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ缺乏癥如血友病A、B，Ⅷ減少還見于部分血管性血友病患者（vWF保護VIII的活性）嚴重的Ⅹ、Ⅴ、凝血酶原、纖維蛋白原缺乏癥如肝臟疾病，阻塞性黃疸，新生兒出血癥,腸道細菌綜合癥，吸收不良綜合癥，口服抗凝劑等。纖溶亢進，PL水解Fb(g)及其它蛋白質(zhì)如V、VIII、XIII因子等。血中有抗凝物質(zhì)如抗Ⅷ、Ⅸ抗體等狼瘡抗凝物APTT的臨床應用手術前的篩選試驗凝血因子缺乏的篩選先天性缺乏凝血因子VIII缺乏-血友病A凝血因子IX缺乏-血友病B凝血因子XI或XII缺乏VWD（低VIII因子）獲得性缺乏肝病，DIC，...狼瘡抗凝物（LA）檢測肝素抗凝治療監(jiān)測26HemosILAPTT:APTTReagentAPTT-SPSynthASilSynthAFaxPartNumberandSize0020006300APTTreag.5x9mL0.025MCaCl25x8mL0020006800APTTreag.5x10mL0.025MCaCl25x10mL0020007400APTTreag.5x10mL0.020MCaCl25x10mLLiquidorLyophilizedLiquidLiquidLiquidActivatorSilicaColoidalSilicaEllagicAcidPhospholipidsSyntheticSyntheticSyntheticRecon.Stability@2-8CAPTTreagent-30daysinoriginalvialCaCl2-30daysinoriginalvialAPTTreagent-30daysinoriginalvialCaCl2-30daysinoriginalvialAPTTreagent-30daysinoriginalvialCaCl2-30daysinoriginalvialNormalRange24.4–35.0seconds25.4–38.4seconds19.7–27.6secondsHeparinSensitivity++++++++FactorSensitivity++++++++LupusSensitivity++++++FIB纖維蛋白原檢測原理在經(jīng)過稀釋后的血漿中加入過量的凝血酶，使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。在高凝血酶濃度與低纖維蛋白原濃度情況下，反應速率反應的是纖維蛋白原的濃度。Fib：纖維蛋白原30IIa纖維蛋白過量的凝血酶Clauss法-WHO推薦的Fib檢測方法PT衍生纖維蛋白原（PTbasedFIB）Clauss法纖維蛋白原（ClaussFIB）ACL系列凝血儀纖維蛋白原的檢測方法FIB的檢測方法Clauss法FIB的基本原理時間:S濃度：mg/dL525105101520IntrinsicExtrinsicCommon濃縮凝血酶纖維蛋白原纖維蛋白［FIB］∝CT1

演算FIB的檢測原理PTbasedFIB的基本原理基于PT反應曲線光學差值與FIB濃度的線性關系ODOD1OD2OD3250mg/dl125mg/dl62mg/dlOD3OD2OD1062125250mg/dl[FIB]時間ODPTPTPTODx[FIB]濃度Fib檢測的臨床意義臨床意義：Fg減少：先天性纖維蛋白原缺乏癥先天性異常纖維蛋白原血癥獲得性常見于嚴重肝病，纖維蛋白原消耗過度，如：DIC大量失血，胎盤早期剝離、分娩時羊水滲入血管形成血栓，肺、前列腺手術。營養(yǎng)不良及肝臟疾病時纖維蛋白原合成減少。Fib檢測的臨床意義臨床意義：Fg增高：Fg是主要的急性時相反應蛋白，其合成受炎癥、感染或惡性病中白細胞介素的刺激。如肺炎、風濕熱、結核、敗血癥等細菌感染，糖尿病和糖尿病酸中毒，動脈粥樣硬化，急性傳染病，急性腎炎和尿毒癥，放射治療后，休克，外科大手術后，妊娠晚期和妊高癥，輕型肝炎，惡性腫瘤，月經(jīng)期，代償性DIC，腦血栓，心肌梗塞等。高纖維蛋白原血癥是誘發(fā)腦卒中和冠心病的高危因素。

FIB-CFIBReagentFibrinogen-CFibrinogen-CXLPartNumber00203011000020003900Size10x2mLBovineThrombin(lyo)10x5mLBovineThrombin(lyo)InsensitivetoHeparin1U/mL1U/mLStability2-8℃

3days3daysTT凝血酶時間檢測原理在樣品中加入純化的凝血酶，將其中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，測量形成凝塊所需要的時間TT：凝血酶時間38IIa纖維蛋白定量的凝血酶TT臨床應用TT延長表示（和/或）Fib異常質(zhì)量（異常纖維蛋白原血癥）數(shù)量：

先天性低或無纖維蛋白原血癥獲得性低纖維蛋白原血癥（肝病，DIC）存在肝素、水蛭素（最強有力的凝血酶抑制劑），以及AT-Ⅲ升高時。存在FDP39TT

用NCCLSTypeII水或同等材料按1:5（1＋4）的比例稀釋濃縮緩沖液TTTT2TT5TT8PartNumber000975851500097585150009758515Size4x2,