最新分析方法驗證-PPT幻燈片

ICH指導(dǎo)原則相關(guān)要求中國藥典2015年版四部通則相關(guān)要求分析方法驗證方案及可接受標(biāo)準(zhǔn)

ICH指導(dǎo)原則相關(guān)要求Typeofanalytical–procedurecharacterristicsIDENTIFICATIONTESTINGFORIMPURITIES

quantitatlimitASSAYdissolutioncontent/potencyAccuracy-+-+PrecisionRepeatability-+-+Interm.Precision-+-+（1）Specificity（2）++++DetectionLimit--（3）+-QuantitationLimit-+--Linearity-+-+Range-+-+

注釋：“-”signifiesthatthischaracterristicsisnotnormallyevaluated

“+”signifiesthatthischaracterristicsisnormallyevaluated（1）incaseswherereproducibilityhasbeenperformed,intermediateprecisionisnotneeded（2）lackofspecificityofoneanalyticalprocedurecouldbecompensatedbyothersupportinganaliticalprocedure(s)（3）maybeneededinsomecases

ICH指導(dǎo)原則相關(guān)要求準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指采用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍測定。

原料藥采用對照品進行測定，或用本方法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一種方法測定的結(jié)果進行比較。制劑可在處方量空白輔料中，加入已知量被測物對照品進行測定。如不能得到制劑輔料的全部組分，可向待測制劑中加入已知量被測物對照品進行測定。

2015年版藥典四部指導(dǎo)原則相關(guān)要求精密度

精密度系指在規(guī)定的條件下，同一份均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性。

重復(fù)性：在相同條件下，有同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性；

中間精密度：在同一個實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果之間的精密度，稱為中間精密度；重現(xiàn)性：在不同實驗室由不同分析人員測定結(jié)果之間的精密度，稱為重現(xiàn)性。

2015年版藥典四部指導(dǎo)原則相關(guān)要求專屬性

專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）存在下，采用的分析方法能正確測定被測物的能力。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查和含量測定方法，均應(yīng)考察其專屬性。檢測限

檢測限系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。定量限

定量限系指試樣中被測物能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)符合準(zhǔn)確度和精密度要求。對微量或痕量藥物分析、定量測定藥物雜質(zhì)和降解產(chǎn)物時，應(yīng)確定方法的定量限。

2015年版藥典四部指導(dǎo)原則相關(guān)要求線性

線性系指在設(shè)計的范圍內(nèi)，測定響應(yīng)值與試樣中被測物濃度成比例關(guān)系的程度。范圍

范圍系指分析方法能達到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性要求時的高低限濃度。耐用性

耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度。

2015年版藥典四部指導(dǎo)原則相關(guān)要求準(zhǔn)確度

方案（以化藥制劑為例）在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（相當(dāng)于100%濃度水平）的供試品，用至少6份樣品的結(jié)果進行評價；或設(shè)計3種不同濃度（通常是80%、100%和120%），對于要測定含量均勻度的項目，濃度通常是70%、100%和130%），每種濃度分別制備3份供試品溶液進行測定，用9份樣品的測定結(jié)果進行評價。

分析方法驗證方案及可接受標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確度

可接受標(biāo)準(zhǔn)

分析方法驗證方案及可接受標(biāo)準(zhǔn)待測定成分含量回收率限度（%）RSD（%）100%98～1012.010%95～102—1%92～105—0.1%90～108—0.01%85～110—10μg/g（ppm）80～115—1μg/kg75～120—10μg/kg(ppb)70～125—精密度

精密度包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性

重復(fù)性在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（相當(dāng)于100%濃度水平）的供試品，用至少6份樣品的結(jié)果進行評價；或設(shè)計3種不同濃度（通常是80%、100%和120%），每種濃度分別制備3份供試品溶液進行測定，用9份樣品的測定結(jié)果進行評價。

中間精密度實驗方案同重復(fù)性，由不同的實驗人員用不同的儀器測定，并將結(jié)果與重復(fù)性試驗結(jié)果一起進行評價。

重現(xiàn)性國家藥品標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法，應(yīng)進行重現(xiàn)性試驗，如通過不同實驗室檢驗獲得重現(xiàn)性結(jié)果。

分析方法驗證方案及可接受標(biāo)準(zhǔn)精密度

可接受標(biāo)準(zhǔn)

分析方法驗證方案及可接受標(biāo)準(zhǔn)待測定成分含量重復(fù)性（RSD%）中間精密度（RSD%）100%1210%1.531%240.1%360.01%4810μg/g（ppm）6111μg/kg81610μg/kg(ppb)1532專屬性

鑒別

鑒別試驗要考察專屬性。含量測定

驗證空白和雜質(zhì)對主成分測定有沒有干擾。有關(guān)物質(zhì)

對于原料藥，可根據(jù)其合成工藝，采用各步反應(yīng)的中間體（尤其是后幾步反應(yīng)的中間體）、立體異構(gòu)體、粗品、重結(jié)晶母液等作為測試品進行系統(tǒng)適用性研究，考察產(chǎn)品中各雜質(zhì)峰及主成分峰相互間的分離度是否符合要求，從而驗證分析方法對工藝雜質(zhì)的分離能力。同時通過強制降解試驗來考察降解雜質(zhì)。

分析方法驗證方案及可接受標(biāo)準(zhǔn)專屬性

對于制劑，根據(jù)原料藥的化學(xué)特性，結(jié)合制劑的處方工藝和儲存條件等選用合適的強制降解試驗來驗證分析方法的專屬性。進行酸、堿、高溫、光、氧化等強制降解試驗時，降解程度要適度，對于敏感條件，通常要求降解10%左右，一般不超過20%。如樣品在某些條件下很穩(wěn)定，則無必要過度提高降解條件的劇烈程度。重點考察空白溶劑和空白輔料有沒有干擾，各峰之間的分離情況（通常要求主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度不小1.5，特定雜質(zhì)峰與相鄰峰的分離度不小于1.5），峰純度和物料平衡（95%～105%）。

分析方法驗證方案及可接受標(biāo)準(zhǔn)檢測限

直觀法用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。信噪比法一般以信噪比為3:1或2:1時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定檢測限?；陧憫?yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法

該方法通常適用于光譜測定，計算公式

：檢測限=3.3×響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差/標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率

分析方法驗證方案及可接受標(biāo)準(zhǔn)定量限直觀法用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地定量測定的最低濃度或量。信噪比法一般以信噪比為10:1時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定定量限。進樣6次，主峰保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于5.0%?；陧憫?yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法

該方法通常適用于光譜測定，計算公式

：檢測限=10×響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差/標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率

分析方法驗證方案及可接受標(biāo)準(zhǔn)線性

應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系?？捎猛粚φ掌焚A備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱取對照品，制備一系列對照品溶液的方法進行測定，至少制備5份不同濃度的對照品溶液。以測得的響應(yīng)信號對被測物的濃度作圖，用最小二乘法進行線性回歸。

對于含量測定，線性相關(guān)系數(shù)不低于0.999，Y軸截距應(yīng)在100%相應(yīng)值得2.0%；

對于雜質(zhì)，線性相關(guān)系數(shù)不低于0.995。

分析方法驗證方案及可接受標(biāo)準(zhǔn)范圍

范圍系指分析方法能達到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性要求時的高低限濃度。

原料藥和制劑含量測定，范圍一般為測定濃度的80%～120%;制劑含量均勻度檢查，范圍一般為測定濃度的70%～130%；溶出度或釋放度中溶出量的測定，范圍一般為限度的±30%，如規(guī)定了限度范圍，則應(yīng)為下限的-20%至上限的+20%；雜質(zhì)測定，范圍應(yīng)根據(jù)初步實際測定數(shù)據(jù)，擬定為規(guī)定限度的±20%。

分析方法驗證方案及可接受標(biāo)準(zhǔn)耐用性

以HPLC法為例，分別考察流動相比例變化±5％、流動相pH值變化±0.2、柱溫變化±5℃、檢測波長變化±5nm、流速相對值變化±20％以及采用3根不同品牌的色譜柱進行測定時，儀器色譜行為的變化。雜質(zhì)檢查可接受標(biāo)準(zhǔn)：系統(tǒng)適用性試驗符合要求；各條件下的雜質(zhì)的數(shù)量和含量應(yīng)基本一致，雜質(zhì)含量的絕對值在±0.1％以內(nèi)。含量測定可接受標(biāo)準(zhǔn)：系統(tǒng)適用性試驗符合要求；平行配制2份供試品溶液，每個條件下測定的6個含量結(jié)果的RSD應(yīng)不大于2.0%。

分析方法驗證方案及可接受標(biāo)準(zhǔn)溶液穩(wěn)定性

供試品溶液室溫放置24