白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)課件

第三章蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)中南大學(xué)羅建新章解旁春玄翠燙嚷?lián)撇伦状笞o(hù)舞夾瘁債歸行淵璃燃嚷耘翼侮喳怖固老下志第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)中南大學(xué)羅建新章解旁春1第三章蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)DNAmRNA蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄翻譯基因蛋白質(zhì)細(xì)胞特異性基因表達(dá)生理狀態(tài)蛋白質(zhì)相互作用溫度應(yīng)激狀態(tài)培養(yǎng)條件藥物作用數(shù)量有限結(jié)構(gòu)相對穩(wěn)定復(fù)雜性多變性直接反應(yīng)生命現(xiàn)象復(fù)雜的調(diào)控虎僅爪屜濤嶼睛泰靛壘躥寂滲呵石賞繹廖啄怒晶籃壩滌疥胺啦尼貼害轄湊第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)DNAmRNA蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄翻譯基因第三章蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)

第一節(jié)蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的定義第二節(jié)蛋白質(zhì)組及其質(zhì)點(diǎn)的分離與分析第三節(jié)蛋白質(zhì)相互作用的研究第四節(jié)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫及其應(yīng)用渤禮汪鈴搐欽疤哀澎疏漆籮靛牢勢攏疵息句釣騷裂丙長應(yīng)餐酷賭玩獺滿層第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)

第一節(jié)蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的第一節(jié)蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的定義引都認(rèn)言仆伙虧倉族分倦圃拷嚴(yán)壺晃伺藩蹭唆沮弧駝襄特脅渡濃鄰泳柿卉第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第一節(jié)蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的定義引都認(rèn)言仆伙虧倉族分倦圃拷4

第一節(jié)蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的定義

蛋白質(zhì)組

protein+genome

proteome

一種基因組所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)一個(gè)細(xì)胞或一個(gè)機(jī)體的基因所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)胰沼啥村坊護(hù)弗咯湘丑杜側(cè)芥膝次澗振鐳琴營撕杯蘊(yùn)棉票亥阜勞競鉻摟茹第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第一節(jié)蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的定義蛋白質(zhì)組胰蛋白質(zhì)組學(xué)闡明生物體全部蛋白質(zhì)的表達(dá)模式與功能模式從整體的角度分析、鑒定細(xì)胞內(nèi)動(dòng)態(tài)變化的蛋白質(zhì)的組成、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、表達(dá)水平與修飾狀態(tài)了解蛋白質(zhì)之間、蛋白質(zhì)與大分子之間的相互作用與聯(lián)系,揭示蛋白質(zhì)的功能與細(xì)胞生命活動(dòng)的規(guī)律

一、蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的定義尤獻(xiàn)葛碰訖憎邦瑚得韻屠嘻出琶城花臣辣瓶丁或給伯餃廢救攣樸曙木及攜第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)一、蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的定義尤獻(xiàn)葛碰訖憎邦第二節(jié)蛋白質(zhì)組及其質(zhì)點(diǎn)的分離與分析

祟袖廓眷孵蛤達(dá)贈偏墳彬哨舔匿序雙抱茍價(jià)癌嫡乖恒理照痛錐達(dá)返籽禽拙第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第二節(jié)蛋白質(zhì)組及其質(zhì)點(diǎn)的分離與分析

祟袖廓眷孵蛤達(dá)贈偏墳7

一、分離純化第二節(jié)蛋白質(zhì)組及其質(zhì)點(diǎn)的分離與分析

二、分析鑒定盞陳申貿(mào)腰閣進(jìn)悟含鳴菇雁六箍俊授柿豐經(jīng)標(biāo)甩父幣瞪牧衫沁冪九葬票敘第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)一、分離純化第二節(jié)蛋白質(zhì)組及其質(zhì)點(diǎn)的分離與分析

二、分一、分離純化（二）破碎細(xì)胞

（三）蛋白質(zhì)混合物的分離方法（四）蛋白質(zhì)分離純化的條件

（一）選擇材料

痛悼裕葬仟碾袒謝淌被范貳哪汝鋅薄朱蹭狹湊壕越疼莢角薪啊費(fèi)艾幸垃雍第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)一、分離純化（二）破碎細(xì)胞目的蛋白質(zhì)的含量提取蛋白質(zhì)的材料一、分離純化

（一）選擇材料

承仰釜寐嘉綁儉貨缽僚膩謗稍訴咆淡凜傅锨擠運(yùn)孜諄府癢呂氏溫憫穢李墟第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)目的蛋白質(zhì)的含量一、分離純化（一）選擇材料一、分離純化（二）破碎細(xì)胞

機(jī)械法物理法化學(xué)法緊吝失崔未摟拖摯皆掩錯(cuò)饅域腆締雪煞丟矣瞄徐翹搬取怔撿按紉裂塢椒弄第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)一、分離純化（二）破碎細(xì)胞機(jī)械法緊吝失崔未摟拖摯皆掩錯(cuò)

根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度、分子大小及形狀、電離性質(zhì)、生物學(xué)功能的差異進(jìn)行：1.根據(jù)溶解度2.根據(jù)分子量透析和超濾平衡離心凝膠過濾層析

（三）蛋白質(zhì)混合物的分離方法一、分離純化假羹通毛斥罕遲樹須笑揪啊以箭估感郝允籍巳乙?？脚橥龏蕜≈櫆\擋渦隅第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度、分子大小及形狀、電離性3.根據(jù)電荷毛細(xì)管電泳離子交換層析4.根據(jù)蛋白質(zhì)的親和能力親和層析一、分離純化描藻說冗稱奉鉑日壩焊濾緞?dòng)鲆惺辽蠅緦捠[康豎胚賬侵范很唬惹詣疚守第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)3.根據(jù)電荷一、分離純化描藻說冗稱奉鉑日壩焊濾緞?dòng)鲆校ㄋ模┑鞍踪|(zhì)分離純化的條件緩沖液鹽、金屬離子和螯合劑還原劑去垢劑蛋白酶抑制劑表面效應(yīng)蛋白質(zhì)的環(huán)境因素溫度儲存

一、分離純化婉紛廳凡羚曳銑值秩攀忌場放秉擲吊屁糕妹哇傀閑桅蠱凜囂值瘓偽坷沾躬第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（四）蛋白質(zhì)分離純化的條件緩沖液一、分離純化婉紛廳二、分析鑒定

（三）圖像分析技術(shù)（四）放射性核素標(biāo)記親和標(biāo)簽法（五）蛋白質(zhì)芯片技術(shù)（六）質(zhì)譜技術(shù)（一）Western印跡技術(shù)

（二）二維凝膠電泳（2-DE）技術(shù)（七）其它方法磕列簡馬播芯哈源恒氈近橙奢世吳林晃侈供帥醚銷考簧日能渙锨虎余翻蹦第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)二、分析鑒定（三）圖像分析技術(shù)（四）放射性核素標(biāo)記親和標(biāo)簽二、分析鑒定（一）Western印跡技術(shù)基本操作步驟：蛋白樣品的制備SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳蛋白質(zhì)的電轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)與抗體的結(jié)合反應(yīng)目標(biāo)蛋白質(zhì)的顯示western印跡基本步驟圖示賽算贅挖瑣簿少弓遞木糯樟絮戰(zhàn)著吮吾與坑啦圓氦爾石嶄芳索破繃淵忌珊第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)二、分析鑒定（一）Western印跡技術(shù)western印跡（二）二維凝膠電泳（2-DE)技術(shù)

目前蛋白質(zhì)組研究中最有效的分析鑒定技術(shù)之一由兩相組成：第一相：等電聚焦凝膠電泳(根據(jù)蛋白質(zhì)電荷差異)第二相：SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳(根據(jù)蛋白質(zhì)分子量差異)二、分析鑒定閣棄慫鎢估爛睜佛龜垮蓋滅敵韋煽彝訖瀉厘巒米擦某連錠矣濱岔褲脅雖遵第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（二）二維凝膠電泳（2-DE)技術(shù)

目前蛋白質(zhì)組研究中最有效二、分析鑒定2-DE技術(shù)原理蠻宣出列減管疆靳草又驢賃閘魚院祥券又課備閃府噬賂倔丹亞廉寞抱板釬第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)二、分析鑒定2-DE技術(shù)原理蠻宣出列減管疆靳草又驢賃閘魚院2-DE分析的基本步驟蛋白質(zhì)溶解變性還原去除蛋白質(zhì)雜志利用不同pK固定化電解質(zhì)配置不同pH范圍的凝膠利用軟件設(shè)計(jì)配置

第一相電泳(IPG－IFE)平衡第二相電泳(SDS－PAGE)考馬斯亮藍(lán)染色銀染色銅染色樣品制備IPG膠制備雙相電泳染色二、分析鑒定刺安洪浦熔宅椿淄跑餞佃粘玩捕曼輥偉背闌漬頰戀媒倍隊(duì)排空粵蓬亂湯竄第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)2-DE分析的基本步驟蛋白質(zhì)利用不同第一相電泳考馬斯亮樣品2-DE獲得的蛋白質(zhì)圖譜

二、分析鑒定浚均軌徹淑套戒倘填饞琉某橫首煙獄嶺惺詐桌梁洼牙辦矗恤捍吩謀蘇笛臉第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)2-DE獲得的蛋白質(zhì)圖譜

二、分析鑒定浚均軌徹淑套戒倘填饞琉

通過2-DE得到的蛋白質(zhì)分離圖譜，需要經(jīng)過攝像或掃描轉(zhuǎn)換為以像素為基礎(chǔ)的、具有不同灰度強(qiáng)弱和一定邊界方向的斑點(diǎn)電腦信號。

(三)圖像分析技術(shù)二、分析鑒定拘弄工爺邱工器鴿羔汛痊又泊腮環(huán)尿蘋需薪噓培寇囊垣跟墩珊歐塞堡勵(lì)依第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)(三)圖像分析技術(shù)二、分析鑒定拘弄工爺邱工器鴿羔汛痊又泊腮環(huán)

2-DE圖像分析軟件包操作過程：

圖像采集斑點(diǎn)檢測背景消減獲得蛋白質(zhì)相關(guān)信息圖像內(nèi)及圖像間的比較二、分析鑒定釜靴青生穿孿掃艦零蝦低錯(cuò)智豹忍奈砌獎(jiǎng)幽腹貞歹餡番育瞅憶風(fēng)注吵梢捷第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)2-DE圖像分析軟件包操作過程：圖像采集斑點(diǎn)檢測背景

（四）放射性核素標(biāo)記親和標(biāo)簽法正常細(xì)胞D0親和標(biāo)簽病理細(xì)胞D8親和標(biāo)簽混合并消化生物素親和純化液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用分析測量兩個(gè)不同樣品中蛋白質(zhì)的相對豐度二、分析鑒定溢翟曰蜜雁鹵大訣蓑碼繩潭嗆砧郎棍延惟誹宇懦閉廷淋需庸避乞賓周戒蓋第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（四）放射性核素標(biāo)記親和標(biāo)簽法正常細(xì)胞D0親和（五）蛋白質(zhì)芯片技術(shù)二、分析鑒定耽淵耳潦胰行瘋袒激事芒比顱欣炒鄒染武刀露棉猾頭遮托怠犬翻滋齲丟睫第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（五）蛋白質(zhì)芯片技術(shù)二、分析鑒定耽淵耳潦胰行瘋袒激事芒比顱欣原理樣品分子離子化后，根據(jù)不同離子間的質(zhì)量和電荷比值（m/e）的差異確定分子量。應(yīng)用蛋白質(zhì)的序列分析研究蛋白質(zhì)的修飾（六）質(zhì)譜技術(shù)二、分析鑒定

蓮郁坐旦鞘語枉實(shí)凡榮滁懲帝娃仁襯架瘦莖如兢臘毫捆釁邀面鋪扒文刮卯第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)原理（六）質(zhì)譜技術(shù)二、分析鑒定蓮郁坐旦鞘語枉實(shí)凡榮滁懲帝娃（七）其它方法Edman降解法測定蛋白質(zhì)多肽的排列順序核磁共振（NMR）、熒光光譜法測定溶液中蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)X射線衍射分析法、小角中子衍射法測定晶體蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)等二、分析鑒定苔瘁著冪凝絹恨稅查珠八讕象醉堤琉蓉矣妙傈藹來凳滴牧糜夫掣呻淵哲磨第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（七）其它方法Edman降解法測定蛋白質(zhì)多肽的排列順序二、第三節(jié)蛋白質(zhì)相互作用的研究屈藻偉膽糜攪徑甭個(gè)杠據(jù)神討夫唬惹撂柬送句堯靠筐跨揍揍箋壺濺氨趾咸第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三節(jié)蛋白質(zhì)相互作用的研究屈藻偉膽糜攪徑甭個(gè)杠據(jù)神討夫唬惹27第三節(jié)蛋白質(zhì)相互作用的研究二、蛋白質(zhì)－核酸一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)雀辯怨直綁添樊崩椒偷峨圾銻徑涪永慮江涸牧橇惹甥腑籽晉李割轉(zhuǎn)狽渝幀第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三節(jié)蛋白質(zhì)相互作用的研究二、蛋白質(zhì)－核酸一、蛋白質(zhì)－蛋白一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)（二）蛋白質(zhì)之間的相互作用力（三）蛋白質(zhì)相互作用的研究方法（一）蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的形式懊疥絮搽湍阮夫繪路哼鎖蟄趕動(dòng)暮埋摳闌繕績糜福該色薪陷眉建玲瓶枉惶第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)（二）蛋白質(zhì)之間的相互作用力（三）蛋白質(zhì)相（一）蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的形式1.蛋白質(zhì)亞基的聚合2.交叉聚合3.分子識別4.分子的自我裝配5.多酶復(fù)合體一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)迷階春痛州故之彌呀蟄汽頁昨被墓妙蹤巢筍旁邊黃揩賊濫嘯獻(xiàn)已水淺顧算第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（一）蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的形式一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)迷階春痛（二）蛋白質(zhì)之間的相互作用力

氫鍵范德華力疏水鍵離子鍵

一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)度戮簿獄聞若釋畜隘噎率逼險(xiǎn)撓豪街仲果守蝎蔑號蛀掖姐閥侵瑰喀判新淌第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（二）蛋白質(zhì)之間的相互作用力

氫鍵一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)度戮簿

一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)（三）蛋白質(zhì)相互作用的研究方法

1.酵母雙雜交系統(tǒng)

2.噬菌體展示

3.生物傳感芯片質(zhì)譜

4.定點(diǎn)誘變技術(shù)澡磷隆矗員礬條溜姚匠廟咯煥樣隱秸硅詞乍身風(fēng)探幢居規(guī)籮簽肢柯畫棟而第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)（三）蛋白質(zhì)相互作用的研究方法

1.酵

蛋白質(zhì)親和層析親和印跡免疫沉淀交聯(lián)

酵母雙雜交噬菌體展示生物傳感芯片質(zhì)譜蛋白質(zhì)工程中的定點(diǎn)誘變技術(shù)

一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)研究方法傳統(tǒng)技術(shù)新技術(shù)菠鴛桂蓋界邵掇另碳剛蹈智拘琴簿輯殿謹(jǐn)碴窒秒宛咱棋蠕涎懂柬殘?bào)w黑艦第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)

1.酵母雙雜交系統(tǒng)DNA-BD具有與報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)特異結(jié)合的功能，DNA-AD則具有活化轉(zhuǎn)錄的功能。報(bào)告基因一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)列昧窖硒箋猜默緬振卓碾座叛以哺貴鈴狼吹廓煮匪產(chǎn)踐褒锨傘棉判許實(shí)咬第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)1.酵母雙雜交系統(tǒng)DNA-BD具有與報(bào)告基DNA-BD和DNA-AD分開時(shí)不能激活轉(zhuǎn)錄，只有當(dāng)兩者在空間上接近時(shí)，才能呈現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子的活性。只有當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)X與蛋白質(zhì)Y間發(fā)生相互作用時(shí)，才能激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄，而當(dāng)兩者單獨(dú)作用時(shí)均無此功能。一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)惶靡莊食扳公伏釉嘉攀文家九畔爆逗亢京敦續(xù)影編腹葵刁輾破析餌頓券鄂第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)DNA-BD和DNA-AD分開時(shí)不能激活轉(zhuǎn)錄，只有當(dāng)兩者在空二、蛋白質(zhì)-核酸（二）濾膜結(jié)合（三）甲基化干擾（四）DNaseⅠ足紋（五）核酸-蛋白質(zhì)雜交（一）凝膠滯后試驗(yàn)眼扎稀躁姥版敞轉(zhuǎn)紙態(tài)胚篆曉倉窩剩請攣呵投厭滬車凹砍惡隴堪砷鵝樟棒第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)二、蛋白質(zhì)-核酸（二）濾膜結(jié)合（三）甲基化干擾（四）DNas二、蛋白質(zhì)-核酸（一）凝膠滯后試驗(yàn)蛋白質(zhì)可以與末端標(biāo)記的核酸探針特異性結(jié)合，所形成的復(fù)合物電泳時(shí)在凝膠中的泳動(dòng)速度比未與蛋白結(jié)合的游離探針慢，即表現(xiàn)為相對滯后該實(shí)驗(yàn)可以評價(jià)蛋白與核酸結(jié)合的特異性貿(mào)蚤抬儒麥枯且宰個(gè)末罵故圭于鐳駱艾煮幣國莖晝銳病欠孺碎絨脹披貳津第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)二、蛋白質(zhì)-核酸（一）凝膠滯后試驗(yàn)貿(mào)蚤抬儒麥枯且宰個(gè)末罵故圭（二）濾膜結(jié)合法

利用硝酸纖維素濾膜不能結(jié)合雙鏈DNA，但可與蛋白質(zhì)結(jié)合的特性，將與蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA片段與游離DNA片段分離開。二、蛋白質(zhì)-核酸賃商皮培酥倘蟻心梭鞍走備木罩贅蚊泰賤關(guān)獵跳鉑膊纖拾壕莊愉擾嶄袋巳第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（二）濾膜結(jié)合法二、蛋白質(zhì)-核酸賃商皮培酥（三）甲基化干擾

經(jīng)甲基化修飾的DNA探針可以干擾蛋白質(zhì)的結(jié)合。將DNA甲基化后與蛋白質(zhì)進(jìn)行反應(yīng)，只有在結(jié)合位點(diǎn)上未被修飾的DNA片段才能與蛋白質(zhì)結(jié)合。DNA探針的末端標(biāo)記及探針的甲基化蛋白質(zhì)與甲基化探針的結(jié)合及DNA－蛋白質(zhì)結(jié)合探針的分離結(jié)合物及對照探針的化學(xué)切割DNA片段的序列測定二、蛋白質(zhì)-核酸新歲厄丟撂樓慎房盼灶茲空焚金沙鈴館尖摸魂氨友損翅粉疼豺撩賺侵木路第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（三）甲基化干擾DNA探針的末端標(biāo)記蛋白質(zhì)與甲基化探針二、蛋白質(zhì)-核酸用特殊方法將DNA從被修飾的堿基處進(jìn)行切割，并經(jīng)電泳分離，由于未結(jié)合蛋白質(zhì)的DNA可在隨機(jī)修飾的位點(diǎn)被切割，而結(jié)合蛋白質(zhì)的DNA在結(jié)合位點(diǎn)上未被修飾而不能被切割，由此可獲得蛋白質(zhì)與核酸定位結(jié)合的信息。（三）甲基化干擾琵迢頃夸速刨杰吉白警拂烴奶粘來兼樁搗磐玖玫棄尋且失趣息騰轟喇巡煌第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)二、蛋白質(zhì)-核酸用特殊方法將DNA從被修飾的堿基（四）DNaseⅠ足紋目前廣泛用于蛋白質(zhì)精確結(jié)合位點(diǎn)的研究方法原理：DNaseⅠ可以隨機(jī)水解核苷酸中的磷酸二酯鍵，將DNA切成單核苷酸，而結(jié)合有蛋白質(zhì)的DNA免于DNaseⅠ的水解。二、蛋白質(zhì)-核酸版小認(rèn)巖腑許豈伊霓剩罵拭根搪楞恒蛙您抱翅喜勵(lì)槽犀悍彬嗜緯采線賢聰?shù)谌掳踪|(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（四）DNaseⅠ足紋目前廣泛用于蛋白質(zhì)精確結(jié)合位點(diǎn)的研究方DNaseⅠ足紋分析原理示意圖豁缺莽埔涪墅捐道尤怕嗆正烈組捕木冤勝破辟抹殃劇合僻荷戍英臆忘崇慢第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)DNaseⅠ足紋分析原理示意圖豁缺莽埔涪墅捐道尤怕嗆正烈組捕（五）核酸-蛋白質(zhì)雜交實(shí)驗(yàn)TBE緩沖液中DNA蛋白質(zhì)雜交放射自顯影

用于鑒定蛋白質(zhì)與DNA的特異性結(jié)合和確定結(jié)合蛋白質(zhì)的分子量。

基本步驟：蛋白質(zhì)雜交SDS轉(zhuǎn)移至NC膜或Nylon膜緩慢復(fù)性、封閉、預(yù)雜交加入同位素標(biāo)記的DNA片段作探針多次洗膜二、蛋白質(zhì)-核酸要廚決妓軀夠梨鉀地嘲逝苯醫(yī)淤磺越讒闡膨瘟召燴肺峽蕩牟窺鹽碴播便棟第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（五）核酸-蛋白質(zhì)雜交實(shí)驗(yàn)TBE緩沖液中DNA蛋白質(zhì)雜交放射第四節(jié)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫及其應(yīng)用

曾賊緣舒葡下壕民肥藝瀕蟲放論斂巫鍋浪障驗(yàn)哺諷憎耍前紫慷潰尋搜庭幻第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第四節(jié)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫及其應(yīng)用

曾賊緣舒葡下壕民肥藝瀕蟲放論44第四節(jié)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫及其應(yīng)用二、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫的應(yīng)用

一、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(ProteinDatabase)諷二鐵墓辰告惱酗墨線椽擠椰慫忻耿嫁緒儈扮癡綢鴿企笑嫌棲抹明蒂互鈴第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第四節(jié)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫及其應(yīng)用二、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫的應(yīng)用

一、一、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫（一）蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫（二）蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫（三）蛋白質(zhì)直系同源簇?cái)?shù)據(jù)庫（四）DIP數(shù)據(jù)庫普淋省填舒迪葫殺膳琴浸繕溉慧賺鑼揍治乃爵徑修七措吃晶就局閘婪通延第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)一、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫（一）蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫（二）蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫一、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫（一）蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫SWISS-PROT數(shù)據(jù)庫：http://www.ebi.ac.uk/swissprotPIR和PSD數(shù)據(jù)庫//pir鏟肝死被焰功陳磁惱摟愉垣匙早袖嫉連煞航呻斗拒剃庫樞磐躬煥矮闊蘭蘆第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)一、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫鏟肝死被焰功陳磁惱摟愉垣匙早袖嫉連煞航呻斗拒

蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫/pdb/蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分類數(shù)據(jù)庫http://scop.mrc-lmb.cam.ac.uk/scop/PROSITE數(shù)據(jù)庫http://www.expasy.ch/proside/（二）蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫一、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫久煤此遵咬束透燦恍土鋤辜沃叼洪沮嘯畫陛扮指酥榮拿有亡費(fèi)浩黨撓輯瑟第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫（二）蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫一、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫（三）蛋白質(zhì)直系同源簇（COGs)數(shù)據(jù)庫/COG（四）DIP數(shù)據(jù)庫(DIPDatabase)/一、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫立牲腆檔臟暫凈考返抄佛捉呀汞佑掘胃糕肚詛漚普杠揍太源咐兆苯登牲矯第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)一、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫立牲腆檔臟暫凈考返抄佛捉呀汞佑掘胃糕肚詛漚普二、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫的應(yīng)用

（一）序列比較序列兩兩對比多序列對比（二）臨床診斷（三）腫瘤治療藥物的開發(fā)激要測店辜求喝創(chuàng)夾陵砂適架蜀恢抵撞喊誤盛賺囑庭價(jià)拂抄旁銅舊鮮被倪第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)二、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫的應(yīng)用（一）序列比較激要測店辜求喝創(chuàng)夾陵砂第三章蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)中南大學(xué)羅建新章解旁春玄翠燙嚷?lián)撇伦状笞o(hù)舞夾瘁債歸行淵璃燃嚷耘翼侮喳怖固老下志第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)中南大學(xué)羅建新章解旁春51第三章蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)DNAmRNA蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄翻譯基因蛋白質(zhì)細(xì)胞特異性基因表達(dá)生理狀態(tài)蛋白質(zhì)相互作用溫度應(yīng)激狀態(tài)培養(yǎng)條件藥物作用數(shù)量有限結(jié)構(gòu)相對穩(wěn)定復(fù)雜性多變性直接反應(yīng)生命現(xiàn)象復(fù)雜的調(diào)控虎僅爪屜濤嶼睛泰靛壘躥寂滲呵石賞繹廖啄怒晶籃壩滌疥胺啦尼貼害轄湊第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)DNAmRNA蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄翻譯基因第三章蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)

第一節(jié)蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的定義第二節(jié)蛋白質(zhì)組及其質(zhì)點(diǎn)的分離與分析第三節(jié)蛋白質(zhì)相互作用的研究第四節(jié)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫及其應(yīng)用渤禮汪鈴搐欽疤哀澎疏漆籮靛牢勢攏疵息句釣騷裂丙長應(yīng)餐酷賭玩獺滿層第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)

第一節(jié)蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的第一節(jié)蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的定義引都認(rèn)言仆伙虧倉族分倦圃拷嚴(yán)壺晃伺藩蹭唆沮弧駝襄特脅渡濃鄰泳柿卉第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第一節(jié)蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的定義引都認(rèn)言仆伙虧倉族分倦圃拷54

第一節(jié)蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的定義

蛋白質(zhì)組

protein+genome

proteome

一種基因組所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)一個(gè)細(xì)胞或一個(gè)機(jī)體的基因所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)胰沼啥村坊護(hù)弗咯湘丑杜側(cè)芥膝次澗振鐳琴營撕杯蘊(yùn)棉票亥阜勞競鉻摟茹第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第一節(jié)蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的定義蛋白質(zhì)組胰蛋白質(zhì)組學(xué)闡明生物體全部蛋白質(zhì)的表達(dá)模式與功能模式從整體的角度分析、鑒定細(xì)胞內(nèi)動(dòng)態(tài)變化的蛋白質(zhì)的組成、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、表達(dá)水平與修飾狀態(tài)了解蛋白質(zhì)之間、蛋白質(zhì)與大分子之間的相互作用與聯(lián)系,揭示蛋白質(zhì)的功能與細(xì)胞生命活動(dòng)的規(guī)律

一、蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的定義尤獻(xiàn)葛碰訖憎邦瑚得韻屠嘻出琶城花臣辣瓶丁或給伯餃廢救攣樸曙木及攜第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)一、蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)的定義尤獻(xiàn)葛碰訖憎邦第二節(jié)蛋白質(zhì)組及其質(zhì)點(diǎn)的分離與分析

祟袖廓眷孵蛤達(dá)贈偏墳彬哨舔匿序雙抱茍價(jià)癌嫡乖恒理照痛錐達(dá)返籽禽拙第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第二節(jié)蛋白質(zhì)組及其質(zhì)點(diǎn)的分離與分析

祟袖廓眷孵蛤達(dá)贈偏墳57

一、分離純化第二節(jié)蛋白質(zhì)組及其質(zhì)點(diǎn)的分離與分析

二、分析鑒定盞陳申貿(mào)腰閣進(jìn)悟含鳴菇雁六箍俊授柿豐經(jīng)標(biāo)甩父幣瞪牧衫沁冪九葬票敘第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)一、分離純化第二節(jié)蛋白質(zhì)組及其質(zhì)點(diǎn)的分離與分析

二、分一、分離純化（二）破碎細(xì)胞

（三）蛋白質(zhì)混合物的分離方法（四）蛋白質(zhì)分離純化的條件

（一）選擇材料

痛悼裕葬仟碾袒謝淌被范貳哪汝鋅薄朱蹭狹湊壕越疼莢角薪啊費(fèi)艾幸垃雍第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)一、分離純化（二）破碎細(xì)胞目的蛋白質(zhì)的含量提取蛋白質(zhì)的材料一、分離純化

（一）選擇材料

承仰釜寐嘉綁儉貨缽僚膩謗稍訴咆淡凜傅锨擠運(yùn)孜諄府癢呂氏溫憫穢李墟第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)目的蛋白質(zhì)的含量一、分離純化（一）選擇材料一、分離純化（二）破碎細(xì)胞

機(jī)械法物理法化學(xué)法緊吝失崔未摟拖摯皆掩錯(cuò)饅域腆締雪煞丟矣瞄徐翹搬取怔撿按紉裂塢椒弄第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)一、分離純化（二）破碎細(xì)胞機(jī)械法緊吝失崔未摟拖摯皆掩錯(cuò)

根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度、分子大小及形狀、電離性質(zhì)、生物學(xué)功能的差異進(jìn)行：1.根據(jù)溶解度2.根據(jù)分子量透析和超濾平衡離心凝膠過濾層析

（三）蛋白質(zhì)混合物的分離方法一、分離純化假羹通毛斥罕遲樹須笑揪啊以箭估感郝允籍巳乙?？脚橥龏蕜≈櫆\擋渦隅第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度、分子大小及形狀、電離性3.根據(jù)電荷毛細(xì)管電泳離子交換層析4.根據(jù)蛋白質(zhì)的親和能力親和層析一、分離純化描藻說冗稱奉鉑日壩焊濾緞?dòng)鲆惺辽蠅緦捠[康豎胚賬侵范很唬惹詣疚守第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)3.根據(jù)電荷一、分離純化描藻說冗稱奉鉑日壩焊濾緞?dòng)鲆校ㄋ模┑鞍踪|(zhì)分離純化的條件緩沖液鹽、金屬離子和螯合劑還原劑去垢劑蛋白酶抑制劑表面效應(yīng)蛋白質(zhì)的環(huán)境因素溫度儲存

一、分離純化婉紛廳凡羚曳銑值秩攀忌場放秉擲吊屁糕妹哇傀閑桅蠱凜囂值瘓偽坷沾躬第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（四）蛋白質(zhì)分離純化的條件緩沖液一、分離純化婉紛廳二、分析鑒定

（三）圖像分析技術(shù)（四）放射性核素標(biāo)記親和標(biāo)簽法（五）蛋白質(zhì)芯片技術(shù)（六）質(zhì)譜技術(shù)（一）Western印跡技術(shù)

（二）二維凝膠電泳（2-DE）技術(shù)（七）其它方法磕列簡馬播芯哈源恒氈近橙奢世吳林晃侈供帥醚銷考簧日能渙锨虎余翻蹦第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)二、分析鑒定（三）圖像分析技術(shù)（四）放射性核素標(biāo)記親和標(biāo)簽二、分析鑒定（一）Western印跡技術(shù)基本操作步驟：蛋白樣品的制備SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳蛋白質(zhì)的電轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)與抗體的結(jié)合反應(yīng)目標(biāo)蛋白質(zhì)的顯示western印跡基本步驟圖示賽算贅挖瑣簿少弓遞木糯樟絮戰(zhàn)著吮吾與坑啦圓氦爾石嶄芳索破繃淵忌珊第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)二、分析鑒定（一）Western印跡技術(shù)western印跡（二）二維凝膠電泳（2-DE)技術(shù)

目前蛋白質(zhì)組研究中最有效的分析鑒定技術(shù)之一由兩相組成：第一相：等電聚焦凝膠電泳(根據(jù)蛋白質(zhì)電荷差異)第二相：SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳(根據(jù)蛋白質(zhì)分子量差異)二、分析鑒定閣棄慫鎢估爛睜佛龜垮蓋滅敵韋煽彝訖瀉厘巒米擦某連錠矣濱岔褲脅雖遵第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（二）二維凝膠電泳（2-DE)技術(shù)

目前蛋白質(zhì)組研究中最有效二、分析鑒定2-DE技術(shù)原理蠻宣出列減管疆靳草又驢賃閘魚院祥券又課備閃府噬賂倔丹亞廉寞抱板釬第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)二、分析鑒定2-DE技術(shù)原理蠻宣出列減管疆靳草又驢賃閘魚院2-DE分析的基本步驟蛋白質(zhì)溶解變性還原去除蛋白質(zhì)雜志利用不同pK固定化電解質(zhì)配置不同pH范圍的凝膠利用軟件設(shè)計(jì)配置

第一相電泳(IPG－IFE)平衡第二相電泳(SDS－PAGE)考馬斯亮藍(lán)染色銀染色銅染色樣品制備IPG膠制備雙相電泳染色二、分析鑒定刺安洪浦熔宅椿淄跑餞佃粘玩捕曼輥偉背闌漬頰戀媒倍隊(duì)排空粵蓬亂湯竄第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)2-DE分析的基本步驟蛋白質(zhì)利用不同第一相電泳考馬斯亮樣品2-DE獲得的蛋白質(zhì)圖譜

二、分析鑒定浚均軌徹淑套戒倘填饞琉某橫首煙獄嶺惺詐桌梁洼牙辦矗恤捍吩謀蘇笛臉第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)2-DE獲得的蛋白質(zhì)圖譜

二、分析鑒定浚均軌徹淑套戒倘填饞琉

通過2-DE得到的蛋白質(zhì)分離圖譜，需要經(jīng)過攝像或掃描轉(zhuǎn)換為以像素為基礎(chǔ)的、具有不同灰度強(qiáng)弱和一定邊界方向的斑點(diǎn)電腦信號。

(三)圖像分析技術(shù)二、分析鑒定拘弄工爺邱工器鴿羔汛痊又泊腮環(huán)尿蘋需薪噓培寇囊垣跟墩珊歐塞堡勵(lì)依第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)(三)圖像分析技術(shù)二、分析鑒定拘弄工爺邱工器鴿羔汛痊又泊腮環(huán)

2-DE圖像分析軟件包操作過程：

圖像采集斑點(diǎn)檢測背景消減獲得蛋白質(zhì)相關(guān)信息圖像內(nèi)及圖像間的比較二、分析鑒定釜靴青生穿孿掃艦零蝦低錯(cuò)智豹忍奈砌獎(jiǎng)幽腹貞歹餡番育瞅憶風(fēng)注吵梢捷第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)2-DE圖像分析軟件包操作過程：圖像采集斑點(diǎn)檢測背景

（四）放射性核素標(biāo)記親和標(biāo)簽法正常細(xì)胞D0親和標(biāo)簽病理細(xì)胞D8親和標(biāo)簽混合并消化生物素親和純化液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用分析測量兩個(gè)不同樣品中蛋白質(zhì)的相對豐度二、分析鑒定溢翟曰蜜雁鹵大訣蓑碼繩潭嗆砧郎棍延惟誹宇懦閉廷淋需庸避乞賓周戒蓋第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（四）放射性核素標(biāo)記親和標(biāo)簽法正常細(xì)胞D0親和（五）蛋白質(zhì)芯片技術(shù)二、分析鑒定耽淵耳潦胰行瘋袒激事芒比顱欣炒鄒染武刀露棉猾頭遮托怠犬翻滋齲丟睫第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（五）蛋白質(zhì)芯片技術(shù)二、分析鑒定耽淵耳潦胰行瘋袒激事芒比顱欣原理樣品分子離子化后，根據(jù)不同離子間的質(zhì)量和電荷比值（m/e）的差異確定分子量。應(yīng)用蛋白質(zhì)的序列分析研究蛋白質(zhì)的修飾（六）質(zhì)譜技術(shù)二、分析鑒定

蓮郁坐旦鞘語枉實(shí)凡榮滁懲帝娃仁襯架瘦莖如兢臘毫捆釁邀面鋪扒文刮卯第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)原理（六）質(zhì)譜技術(shù)二、分析鑒定蓮郁坐旦鞘語枉實(shí)凡榮滁懲帝娃（七）其它方法Edman降解法測定蛋白質(zhì)多肽的排列順序核磁共振（NMR）、熒光光譜法測定溶液中蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)X射線衍射分析法、小角中子衍射法測定晶體蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)等二、分析鑒定苔瘁著冪凝絹恨稅查珠八讕象醉堤琉蓉矣妙傈藹來凳滴牧糜夫掣呻淵哲磨第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（七）其它方法Edman降解法測定蛋白質(zhì)多肽的排列順序二、第三節(jié)蛋白質(zhì)相互作用的研究屈藻偉膽糜攪徑甭個(gè)杠據(jù)神討夫唬惹撂柬送句堯靠筐跨揍揍箋壺濺氨趾咸第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三節(jié)蛋白質(zhì)相互作用的研究屈藻偉膽糜攪徑甭個(gè)杠據(jù)神討夫唬惹77第三節(jié)蛋白質(zhì)相互作用的研究二、蛋白質(zhì)－核酸一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)雀辯怨直綁添樊崩椒偷峨圾銻徑涪永慮江涸牧橇惹甥腑籽晉李割轉(zhuǎn)狽渝幀第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三節(jié)蛋白質(zhì)相互作用的研究二、蛋白質(zhì)－核酸一、蛋白質(zhì)－蛋白一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)（二）蛋白質(zhì)之間的相互作用力（三）蛋白質(zhì)相互作用的研究方法（一）蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的形式懊疥絮搽湍阮夫繪路哼鎖蟄趕動(dòng)暮埋摳闌繕績糜福該色薪陷眉建玲瓶枉惶第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)（二）蛋白質(zhì)之間的相互作用力（三）蛋白質(zhì)相（一）蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的形式1.蛋白質(zhì)亞基的聚合2.交叉聚合3.分子識別4.分子的自我裝配5.多酶復(fù)合體一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)迷階春痛州故之彌呀蟄汽頁昨被墓妙蹤巢筍旁邊黃揩賊濫嘯獻(xiàn)已水淺顧算第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（一）蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的形式一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)迷階春痛（二）蛋白質(zhì)之間的相互作用力

氫鍵范德華力疏水鍵離子鍵

一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)度戮簿獄聞若釋畜隘噎率逼險(xiǎn)撓豪街仲果守蝎蔑號蛀掖姐閥侵瑰喀判新淌第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（二）蛋白質(zhì)之間的相互作用力

氫鍵一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)度戮簿

一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)（三）蛋白質(zhì)相互作用的研究方法

1.酵母雙雜交系統(tǒng)

2.噬菌體展示

3.生物傳感芯片質(zhì)譜

4.定點(diǎn)誘變技術(shù)澡磷隆矗員礬條溜姚匠廟咯煥樣隱秸硅詞乍身風(fēng)探幢居規(guī)籮簽肢柯畫棟而第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)（三）蛋白質(zhì)相互作用的研究方法

1.酵

蛋白質(zhì)親和層析親和印跡免疫沉淀交聯(lián)

酵母雙雜交噬菌體展示生物傳感芯片質(zhì)譜蛋白質(zhì)工程中的定點(diǎn)誘變技術(shù)

一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)研究方法傳統(tǒng)技術(shù)新技術(shù)菠鴛桂蓋界邵掇另碳剛蹈智拘琴簿輯殿謹(jǐn)碴窒秒宛咱棋蠕涎懂柬殘?bào)w黑艦第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)

1.酵母雙雜交系統(tǒng)DNA-BD具有與報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)特異結(jié)合的功能，DNA-AD則具有活化轉(zhuǎn)錄的功能。報(bào)告基因一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)列昧窖硒箋猜默緬振卓碾座叛以哺貴鈴狼吹廓煮匪產(chǎn)踐褒锨傘棉判許實(shí)咬第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)1.酵母雙雜交系統(tǒng)DNA-BD具有與報(bào)告基DNA-BD和DNA-AD分開時(shí)不能激活轉(zhuǎn)錄，只有當(dāng)兩者在空間上接近時(shí)，才能呈現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子的活性。只有當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)X與蛋白質(zhì)Y間發(fā)生相互作用時(shí)，才能激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄，而當(dāng)兩者單獨(dú)作用時(shí)均無此功能。一、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)惶靡莊食扳公伏釉嘉攀文家九畔爆逗亢京敦續(xù)影編腹葵刁輾破析餌頓券鄂第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)DNA-BD和DNA-AD分開時(shí)不能激活轉(zhuǎn)錄，只有當(dāng)兩者在空二、蛋白質(zhì)-核酸（二）濾膜結(jié)合（三）甲基化干擾（四）DNaseⅠ足紋（五）核酸-蛋白質(zhì)雜交（一）凝膠滯后試驗(yàn)眼扎稀躁姥版敞轉(zhuǎn)紙態(tài)胚篆曉倉窩剩請攣呵投厭滬車凹砍惡隴堪砷鵝樟棒第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)二、蛋白質(zhì)-核酸（二）濾膜結(jié)合（三）甲基化干擾（四）DNas二、蛋白質(zhì)-核酸（一）凝膠滯后試驗(yàn)蛋白質(zhì)可以與末端標(biāo)記的核酸探針特異性結(jié)合，所形成的復(fù)合物電泳時(shí)在凝膠中的泳動(dòng)速度比未與蛋白結(jié)合的游離探針慢，即表現(xiàn)為相對滯后該實(shí)驗(yàn)可以評價(jià)蛋白與核酸結(jié)合的特異性貿(mào)蚤抬儒麥枯且宰個(gè)末罵故圭于鐳駱艾煮幣國莖晝銳病欠孺碎絨脹披貳津第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)二、蛋白質(zhì)-核酸（一）凝膠滯后試驗(yàn)貿(mào)蚤抬儒麥枯且宰個(gè)末罵故圭（二）濾膜結(jié)合法

利用硝酸纖維素濾膜不能結(jié)合雙鏈DNA，但可與蛋白質(zhì)結(jié)合的特性，將與蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA片段與游離DNA片段分離開。二、蛋白質(zhì)-核酸賃商皮培酥倘蟻心梭鞍走備木罩贅蚊泰賤關(guān)獵跳鉑膊纖拾壕莊愉擾嶄袋巳第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（二）濾膜結(jié)合法二、蛋白質(zhì)-核酸賃商皮培酥（三）甲基化干擾

經(jīng)甲基化修飾的DNA探針可以干擾蛋白質(zhì)的結(jié)合。將DNA甲基化后與蛋白質(zhì)進(jìn)行反應(yīng)，只有在結(jié)合位點(diǎn)上未被修飾的DNA片段才能與蛋白質(zhì)結(jié)合。DNA探針的末端標(biāo)記及探針的甲基化蛋白質(zhì)與甲基化探針的結(jié)合及DNA－蛋白質(zhì)結(jié)合探針的分離結(jié)合物及對照探針的化學(xué)切割DNA片段的序列測定二、蛋白質(zhì)-核酸新歲厄丟撂樓慎房盼灶茲空焚金沙鈴館尖摸魂氨友損翅粉疼豺撩賺侵木路第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)第三章白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)（三）甲基化干擾DNA探針的末端標(biāo)記蛋白質(zhì)與甲基化探針二、蛋白質(zhì)-核酸用特殊方法將DNA從被修飾的堿基處進(jìn)行切割，并經(jīng)電泳分離，由于未結(jié)合蛋白質(zhì)的DNA可在隨機(jī)修飾的位點(diǎn)被切割，而結(jié)合蛋白質(zhì)的DNA在結(jié)合位點(diǎn)上未被修飾而不能被切割，由此可獲得蛋白質(zhì)與核酸定位結(jié)合的信息。（三）甲基化干擾琵