生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)1課件

生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)湖北省生物基礎(chǔ)課實(shí)驗(yàn)示范中心湖北民族學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院

田國政

（多媒體課件）實(shí)驗(yàn)基本知識與基本操作實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)類型基礎(chǔ)知識講授實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)2學(xué)時(shí)一實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諏?shí)驗(yàn)室的基本操作技能，包括玻璃器皿、天平、分光光度計(jì)、離心機(jī)、移液器等儀器的使用，熟悉實(shí)驗(yàn)室規(guī)則，實(shí)驗(yàn)室安全和防護(hù)知識，怎樣做好實(shí)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫。4．隨時(shí)保持實(shí)驗(yàn)臺整潔，儀器、藥品擺放整齊。公用試劑用完后，應(yīng)立即蓋嚴(yán)放回原處。勿使試劑、藥品灑在實(shí)驗(yàn)臺面和地上。實(shí)驗(yàn)完畢后，將玻璃器皿洗凈放好，實(shí)驗(yàn)臺面打掃干凈，填寫實(shí)驗(yàn)記錄本，老師簽字后才能離開實(shí)驗(yàn)室。5．使用藥品、試劑注意節(jié)約，儀器使用時(shí)，小心仔細(xì)，防止損壞，發(fā)現(xiàn)故障須及時(shí)報(bào)告教師，并填寫儀器故障登記表后補(bǔ)領(lǐng)。6.離開實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)認(rèn)真檢查水、電是否關(guān)好，嚴(yán)防發(fā)生安全事故。7．強(qiáng)酸、強(qiáng)堿溶液必須倒入指定的廢液缸內(nèi),用水稀釋后排放。廢紙屑及其他固體廢物倒入指定容器內(nèi),不能隨意倒入水槽或到處亂扔。8．實(shí)驗(yàn)室內(nèi)一切物品，未經(jīng)允許，嚴(yán)禁帶出室外，借物必須辦理登記手續(xù)。

9．值日生職責(zé)：每次實(shí)驗(yàn)課由班長或?qū)W習(xí)委員負(fù)責(zé)安排值日生，負(fù)責(zé)當(dāng)天實(shí)驗(yàn)室的衛(wèi)生、安全和一切服務(wù)性的工作。10.按要求認(rèn)真完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。三實(shí)驗(yàn)記錄與實(shí)驗(yàn)報(bào)告1實(shí)驗(yàn)記錄：從實(shí)驗(yàn)課開始就要培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)作風(fēng)，養(yǎng)成良好習(xí)慣。實(shí)驗(yàn)條件下觀察到的現(xiàn)象應(yīng)仔細(xì)地記錄下來，實(shí)驗(yàn)中觀測的每個(gè)結(jié)果和數(shù)據(jù)都應(yīng)及時(shí)如實(shí)地直接記在記錄本上，記錄清楚，以便總結(jié)實(shí)驗(yàn)完成報(bào)告時(shí)進(jìn)行核對和作為查找成敗原因的參考依據(jù)。如果發(fā)現(xiàn)記錄的結(jié)果有懷疑、遺漏、丟失等，都必須重做實(shí)驗(yàn)。2實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)整理和總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，寫出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。實(shí)驗(yàn)報(bào)告的格式：實(shí)驗(yàn)序號，實(shí)驗(yàn)名稱；（1）目的和要求（2）內(nèi)容與原理（3）主要儀器及試劑配制（4）操作方法與實(shí)驗(yàn)步驟（5）結(jié)果與討論9基本的應(yīng)急措施（1）吞食時(shí)的應(yīng)急處理方法a為了降低胃中藥品的濃度，緩延毒物被人體吸收的速度并保護(hù)胃粘膜，可飲食下述任一種東西：如牛奶；打溶的蛋；面粉；淀粉；或土豆泥的懸浮液以及水等。b如果一時(shí)弄不到上述東西，可于500mL蒸餾水中，加入約50g活性炭。用前再添加400mL蒸餾水，并把它充分搖動潤濕，然后，給患者分次少量吞服。一般10～15g活性炭，大約可吸收1g毒物。（2）吸入時(shí)的應(yīng)急處理方法立刻將患者轉(zhuǎn)移到空氣新鮮的地方，解開衣服，放松身體。呼吸能力減弱時(shí)，要馬上進(jìn)行人工呼吸（3）沾著皮膚時(shí)的應(yīng)急處理方法用自來水不斷淋濕皮膚。一面脫去衣服，一面在皮膚上澆水。不要使用化學(xué)解毒劑。（4）進(jìn)入眼睛時(shí)的應(yīng)急處理方法撐開眼瞼，用水洗滌5分鐘。不要使用化學(xué)解毒劑。2．毛刷的種類（1）試管類：（4）燒杯類（2）量筒類：（5）移液管類（3）三角瓶類：3．玻璃器皿的洗滌（1）能用毛刷刷洗的玻璃器皿的清洗方法（2）不能用毛刷刷洗的玻璃器皿的清洗方法（3）新玻璃器皿的清洗

新購買的玻璃儀器表面常附著有游離的堿性物質(zhì)，可先用肥皂水（或去污粉）洗刷再用自來水洗凈，然后浸泡在l％～2％鹽酸溶液中過夜（不少于4h），再用自來水沖洗，最后用蒸餾水沖洗2～3次，在100℃～130℃烘箱內(nèi)烤干備用。（4）量器類玻璃儀器的清洗使用后應(yīng)立即浸泡于涼水中，勿使物質(zhì)干涸；然后用流水沖洗，除去附著的試劑、蛋白質(zhì)等物質(zhì)。晾干后浸泡在鉻酸洗液中4～6h（或過夜），再用自來水充分沖洗，最后用蒸餾水沖洗2～4次，晾干備用。（5）具有傳染性標(biāo)本的容器的清洗如病毒、傳染病患者的血清等動污過的容器。應(yīng)浸泡在殺菌劑（5％煤酚皂溶液）中過夜，進(jìn)行消毒后再清洗。（6）油污玻璃器皿的清洗4．洗滌液的種類和配制方法（1）鉻酸洗液（重鉻酸鉀-硫酸洗液，簡稱為洗液）廣泛用于玻璃儀器的洗滌。常用的配制方法有下述四種：①取100mL工業(yè)濃硫酸置于燒杯內(nèi)，小心加熱，然后小心慢慢加入5g重鉻酸鉀粉末，邊加邊攪拌，待全部溶解后冷卻，貯于具玻璃塞的細(xì)口瓶內(nèi)。②稱取5g重鉻酸鉀粉末置于250mL燒杯中，加水5mL，盡量使其溶解。慢慢加入濃硫酸100mL，隨加隨攪拌。冷卻后貯存?zhèn)溆?。③稱取80g重鉻酸鉀，溶于1000mL自來水中，慢慢加入工業(yè)硫酸100mL（邊加邊用玻璃棒攪動）。④稱取200g重鉻酸鉀，溶于500mL自來水中，慢慢加入工業(yè)硫酸500mL（邊加邊攪拌）。（2）濃鹽酸（工業(yè)用）：可洗去水垢或某些無機(jī)鹽沉淀。（3）5％草酸溶液：用數(shù)滴硫酸酸化，可洗去高猛酸鉀的痕跡。（4）5％～10％磷酸三鈉（Na3PO4·12H2O）溶液：可洗滌油污物。（5）30％硝酸溶液：洗滌CO2測定儀器及微量滴管。（6）5％～10％乙二胺四乙酸二鈉（EDTA－Na2）溶液：加熱煮沸可洗脫玻璃儀器內(nèi)壁的白色沉淀物。（7）尿素洗滌液：為蛋白質(zhì)的良好溶劑，適用于洗滌盛蛋白質(zhì)制劑及血樣的容器。（8）酒精與濃硝酸混合液：最適合于洗凈滴定管，在滴定管中加入3mL酒精，然后沿管壁慢慢加入4mL濃硝酸（比重1.4），蓋住滴定管管口，利用所產(chǎn)生的氧化氮洗凈滴定管。5溶液的混勻（P7）玻棒攪拌混勻旋轉(zhuǎn)混勻(3)彈打混勻(4)倒轉(zhuǎn)混勻(5)吸量管混勻（6）轉(zhuǎn)動混勻（7）傾倒混勻（8）甩動混勻（10）電磁攪拌混勻（9）震蕩器混勻6過濾（P8）(1)常壓過濾（2）減壓過濾8普通離心機(jī)的使用（P9）高速離心機(jī)3500-50000r/min常速離心機(jī)3500r/min超速離心機(jī)50000r/min以上（1）將離心機(jī)置于平穩(wěn)地面或平穩(wěn)臺面上（2）負(fù)荷配重，各對稱放置的被分離物之間的重量誤差不大于1g（1）檢查手柄是否置于慢速位置，開關(guān)應(yīng)撥向“關(guān)”的位置，蓋與容器室鎖緊（2）接通電源，開關(guān)撥向“開”位置（3）平穩(wěn)移動手柄，視轉(zhuǎn)速表指示到達(dá)所需轉(zhuǎn)速，一、二分鐘后轉(zhuǎn)速穩(wěn)定開始記時(shí)。分離完畢將受柄調(diào)回原位，開關(guān)撥向“關(guān)”。（4）關(guān)閉電源。9電子天平的使用（P11）（1）置于穩(wěn)定的工作臺上。（2）調(diào)整水平，插好電源，打開開關(guān)，預(yù)熱30min。（3）待天平穩(wěn)定后，顯示“0.00”稱量模式。（4）將被稱物置秤盤上，即顯示該物的質(zhì)量，待顯示器左邊“.”熄滅后，即表示稱量已穩(wěn)定。注：去皮重操作即先將容器于秤盤上，天平顯示容器質(zhì)量，按“TARE”鍵后，顯示“0.00?±，即已去重。置物于容器中，即顯示物的重量。（5）關(guān)閉電源。稱重前必須預(yù)熱皮和物之和不超過稱量范圍，否則顯示“┈”，表示超重。不要將藥品灑到秤盤上，會腐蝕天平。操作時(shí)不要用力過大，會影響平衡。注意事項(xiàng)10分光光度計(jì)的使用和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作分光光度計(jì)的基本依據(jù)是朗伯—比耳定律，它是根據(jù)相對測量原理工作的，即先選定某一溶劑作為標(biāo)準(zhǔn)溶液，設(shè)定其透光率為100%，被測試樣的透光率是相對于標(biāo)準(zhǔn)溶液而言的，即讓單色光分別通過被測試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液，二者能量的比值就是在一定波長下對于被測試樣的透光率。白色光源經(jīng)入射狹縫、反射鏡和透光鏡后，變成平行光進(jìn)入棱鏡，色散后的單色光經(jīng)鍍鋁的反射鏡反射后，再經(jīng)過透鏡并聚光于出射狹縫上，狹縫寬度為0.32nm。反射鏡和棱鏡組裝在一可旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)盤上并由波長調(diào)節(jié)器的凸輪所帶動，轉(zhuǎn)動波長調(diào)節(jié)器便可以在出光狹縫后面選擇到任一波長的單色光。單色光透過樣品吸收池后由一光量調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)為適度的光通量，最后被光電電池吸收，轉(zhuǎn)換成電流后由微電計(jì)指示，直接讀出透光率的值。具體操作1、開機(jī)前的檢查(/programs/view/-r74bOVWzgI/)

開機(jī)前打開樣品室蓋，檢查樣品室內(nèi)是否有物品擋在光路上。光路上有阻擋物將影響儀器的自檢，甚至造成儀器故障。

2、接通儀器電源，使儀器預(yù)熱20分鐘.3、用波長選擇旋鈕設(shè)置測試所需的波長(325nm～1000nm)。

4、用〈MODE〉鍵選擇“T”測試方式，將黑體置于光路，按“%T”鍵，此時(shí)顯示器顯示“000.0”（此步驟可省略）5、比色皿的配對測試

在多個(gè)相同型號的潔凈的比色皿中加入純水，將比色皿置于吸收池架中，依次將各比色皿推或拉入光路中，在其中選擇“T”值或“A”值相等或相近的幾個(gè)比色皿以待測試時(shí)使用。6、用〈MODE〉鍵選擇合適的測試方式。

7、調(diào)零(每變換一次波長都要重新進(jìn)行調(diào)零)

將參比溶液與待測溶液分別倒入比色皿中，把盛有溶液的比色皿放入吸收池架中，蓋上樣品室蓋。將參比溶液拉入光路中，按“0A/100%T”鍵調(diào)0A/100%T，此時(shí)顯示器顯示“BLA”直至顯示“100.0”%T（T方式）或“0.000”A（A方式）為止8、測試

調(diào)零后，將待測樣品推（拉）入光路，這時(shí)顯示器上顯示的值即為待測樣品的T值或A值9、測試完畢

關(guān)機(jī)，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。注意事項(xiàng)：

1、必須在開機(jī)前檢查光路的通暢情況。

2、為了防止光電管疲勞。不測定時(shí)必須將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷，以延長光電管使用壽命。3、拿比色皿時(shí)，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。4、比色皿外壁的水用吸水紙吸干，再用擦鏡紙擦干凈，以保護(hù)透光面。5、溶液的吸光度控制在0.2～0.7(吸光度與液層厚度呈正比)。

1．挪動干凈玻璃儀器時(shí)，勿使手指接觸儀器內(nèi)部。2．量瓶是量器，不要用量瓶作盛器。帶有磨口玻璃塞的量瓶等儀器的塞子，不要蓋錯(cuò)。帶玻璃塞的儀器和玻璃瓶等，如果暫時(shí)不使用，要用紙條把瓶塞和瓶口隔開。3．洗凈的儀器要放在架上或干凈紗布上晾干，不能用抹布擦拭；更不能用抹布擦拭儀器內(nèi)壁。4．除微生物實(shí)驗(yàn)操作要求外，不要用棉花代替橡皮塞或木塞堵瓶口或試管口。5．不要用紙片覆蓋燒杯和錐形瓶等。11實(shí)驗(yàn)室常識6．不要用濾紙稱量藥品，更不能用濾紙作記錄。7．不要用石蠟封閉精細(xì)藥品的瓶口，以免摻混。8．標(biāo)簽紙的大小應(yīng)與容器相稱，或用大小相當(dāng)?shù)陌准?，絕對不能用濾紙。標(biāo)簽上要寫明物質(zhì)的名稱、規(guī)格和濃度、配制的日期及配制人。標(biāo)簽應(yīng)貼在試劑瓶或燒杯的2／3處，試管等細(xì)長形容器則貼在上部。9．使用鉛筆寫標(biāo)記時(shí)，要在玻璃儀器的磨砂玻璃處。如用玻璃蠟筆或水不溶性油漆筆，則寫在玻璃容器的光滑面上。10．取用試劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液后，需立即將瓶塞嚴(yán)，放回原處。取出的試劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，如未用盡，切勿倒回瓶內(nèi)，以免帶入雜質(zhì)。11．凡是發(fā)生煙霧、有毒氣體和有臭味氣體的實(shí)驗(yàn)，均應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。櫥門應(yīng)緊閉，非必要時(shí)不能打開。12．用實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，不許戲弄?jiǎng)游?。進(jìn)行殺死或解