動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 思考題

動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)思考題動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)思考題動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)思考題xxx公司動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)思考題文件編號：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準(zhǔn)審核制定方案設(shè)計，管理制度《動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)》復(fù)習(xí)思考題動物細(xì)胞培養(yǎng)的實驗器皿清洗要求為何較高你認(rèn)為該如何保證器皿中無雜質(zhì)如果器皿中有雜質(zhì)，會對細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生什么樣的影響？

答：①離體細(xì)胞對各種毒物都很敏感，若所用器材清洗效果未達(dá)到要求，各種毒物會損壞細(xì)胞影響實驗。②器皿使用高壓滅菌鍋，℃，20~30分鐘，在取拿的時候用經(jīng)過高壓滅菌后的鑷子取拿，避免造成污染。③敘述超凈工作臺的工作原理答：超凈工作臺最主要的是空氣循環(huán)過濾的過程，在這個過程中風(fēng)機(jī)起到了心臟的作用。鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動空氣通過高效過濾器得以凈化，凈化的空氣被徐徐吹過臺面空間而將其中的塵埃、細(xì)菌甚至病毒顆粒帶走，使工作區(qū)構(gòu)成無菌環(huán)境。正壓過濾器為何會除菌答：正壓式過濾器沒有內(nèi)置滅菌燈，正壓式過濾器利用的是兩層孔的過濾膜，這層膜可以將細(xì)菌阻擋在膜上，過濾的液體流下去就基本上完成了滅菌過程各種細(xì)胞培養(yǎng)用液的配制需要很精確嗎如果不精確，會導(dǎo)致什么后果請舉例說明。你認(rèn)為精確配制各種溶液答：配制后平衡鹽溶液呈黃色意味著液體的pH發(fā)生了什么變化？

答：配制后的液體應(yīng)呈桃紅色，PH值為左右。苯酚紅的變色域：（橙）~（黃），（棕色）~（紫色），若為黃色，則液體呈酸性，不利于細(xì)胞的生存。用于分離細(xì)胞的消化液為什么宜用無Ca、Mg離子的D-Hanks液或PBS液配制答：Ca＋2、Mg＋2是細(xì)胞膜的重要組分，具有使細(xì)胞凝聚的作用。因此，用于分離細(xì)胞的消化液宜用無Ca＋2、Mg＋2離子的D-Hanks液或PBS液。L-谷氨酰胺在營養(yǎng)液中有何作用？答：L－谷氨酰胺是細(xì)胞的能量來源；是一種必須氨基酸，是使物體合成核酸、蛋白質(zhì)、嘌呤、嘧啶的重要前體，也是蛋白質(zhì)合成分解的調(diào)節(jié)物；是細(xì)胞內(nèi)氨的清除劑，氨對一些細(xì)胞有毒性。HEPES溶液的作用機(jī)理答：它是一種氫離子緩沖劑。主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動平衡鹽溶液的組成與基本作用小牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中有哪些作用？

答：①平衡鹽溶液主要是由無機(jī)鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng).主要用于取材時組織塊的漂洗、細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。②作用：a提供能促使細(xì)胞指數(shù)生長的激素、基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或含量微小的營養(yǎng)物，以及某些低分子營養(yǎng)物質(zhì)；

b提供結(jié)合蛋白，識別維生素、脂類、金屬離子，并與有毒金屬和熱源物質(zhì)結(jié)合，起解毒作用；c是細(xì)胞貼壁、鋪展生長所需因子的來源；

d起酸堿度緩沖液作用；

e提供蛋白酶抑制劑，細(xì)胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受損傷。營養(yǎng)液制備后為什么要小劑量分裝？答：避免營養(yǎng)液被污染后，全部的營養(yǎng)液都被污染。營養(yǎng)液一次用完過后，下一次的實驗就不能用，會引起污染，影響實驗，若冷凍營養(yǎng)液，則營養(yǎng)液的營養(yǎng)成分會有所損失，影響細(xì)胞的生長10萬U/mL單位青霉素、鏈霉素的配制方法答：用注射器吸10毫升雙蒸水溶解100萬單位的鏈霉素，棄去2ml，用剩余的8ml鏈霉素溶解80萬單位的青霉素，配制成每毫升青霉素、鏈霉素各10萬單位的母液。細(xì)胞培養(yǎng)過程中對無菌的要求很高，你認(rèn)為該如何操作才能保證培養(yǎng)過程中無微生物污染？請詳細(xì)闡述。答：①實驗進(jìn)行前，無菌室及無菌操作臺（laminarflow）以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后，才開始實驗操作②無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗③進(jìn)無菌室前要徹底洗手④使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。⑤操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。⑥）吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時，應(yīng)專管專用⑦⑧你認(rèn)為組織塊培養(yǎng)成功需哪些條件？你們小組為了實驗成功采取了哪些具體的措施你在本次實驗中做了什么工作答：①實驗所用的器材必須保證無菌無毒，用胰蛋白酶（濃度適中）消化的時間不宜過長和過高、營養(yǎng)、溫度組織塊培養(yǎng)的基本原理如何？答：細(xì)胞增殖何時須更換培養(yǎng)基進(jìn)行傳代？可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類來進(jìn)行后期的培養(yǎng)？答：①一般兩天換一次,如果細(xì)胞貼壁率變化不大,可以適當(dāng)延長,到細(xì)胞貼壁率達(dá)到85左右,可以傳代②不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活。培養(yǎng)細(xì)胞時不用CO2或使用5%或10%CO2是否都可以說明原因答：不是。一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度.當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升g時,細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10%CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升時,則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞.你認(rèn)為心肌細(xì)胞培養(yǎng)的基本操作要點是什么？你在其中參與了什么操作有什么體會答：①要點：1）、首先用細(xì)胞分散法收獲細(xì)胞，隨時吸取少量消化液在鏡下觀察，并根據(jù)組織是否分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞，采取終止消化措施。用篩網(wǎng)濾掉未消化的組織塊。2）、低速離心細(xì)胞懸液，棄掉上清液，加入含血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打制成細(xì)胞懸液，計數(shù)并用培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度。3）、用吸管吸取一定量的細(xì)胞懸液，加到培養(yǎng)瓶中。4）、將培養(yǎng)瓶放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)。5）、每隔2到3天更換培養(yǎng)液一次或根據(jù)培養(yǎng)液顏色的變化確定換液時間。培養(yǎng)瓶移入CO2恒溫箱培養(yǎng)時，瓶蓋為何要稍松？又如何避免細(xì)胞污染如果細(xì)胞污染有何挽救措施答：①擰緊瓶蓋無法進(jìn)行氣體交換，瓶蓋稍松才能為細(xì)胞生長提供必要的氧氣和二氧化碳，尤其是二氧化碳特別重要，細(xì)胞在酸性培養(yǎng)液中生長的更好②胰蛋白酶的消化原理如何？如何初步判斷胰蛋白酶的消化時間？答：①原理：細(xì)胞外含有多種胞外蛋白,如膠原蛋白；使細(xì)胞間或細(xì)胞與培養(yǎng)瓶內(nèi)壁粘連起來.用胰蛋白酶分解這些蛋白質(zhì)后就可以使它們分開了!②顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再鏈接成片，表明此時細(xì)胞消化適度