選修311DNA重組技術(shù)的基本工具課件

基因工程第一節(jié)：DNA重組技術(shù)的基本工具

?？h一中劉秀榮基因工程據(jù)WTO調(diào)查：2004年全世界因狂犬病致死人數(shù)約5.5萬人

中國衛(wèi)生部通報(bào)：2004年７月，狂犬病列法定報(bào)告?zhèn)魅静∷劳鰯?shù)之首。發(fā)病死亡率近100%.能產(chǎn)生狂犬病抗體蛋白的轉(zhuǎn)基因植物據(jù)WTO調(diào)查：2004年全世界因狂犬病致死人數(shù)約5.5萬人選修3-1-1DNA重組技術(shù)的基本工具課件基因工程的概念

基因工程是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，并通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出更符合人類需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。由于基因工程是DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫DNA重組技術(shù)?；蚬こ痰母拍罨蚬こ淌侵赴凑杖藗兊脑竿?，進(jìn)行嚴(yán)基因工程的別名DNA重組技術(shù)操作環(huán)境生物體外操作對(duì)象基因操作水平DNA分子水平基本過程剪切→拼接→導(dǎo)入→表達(dá)結(jié)果人類需要的基因產(chǎn)物或性狀概念分析：基因工程的別名DNA重組技術(shù)操作環(huán)境生物體外操作對(duì)象基因操作問題探討：蘇云金芽孢桿菌含有一種可以合成毒蛋白的基因。讓細(xì)菌的毒蛋白基因在棉花細(xì)胞中表達(dá)，可培育出抵抗棉鈴蟲害的抗蟲棉。

想一想需要做哪些關(guān)鍵工作？蘇云金芽孢桿菌毒蛋白普通棉花抗蟲棉問題探討：蘇云金芽孢桿菌含有一種可以合成毒蛋白的基因。普通棉花(無抗蟲特性)蘇云金芽孢桿菌提取抗蟲基因棉花細(xì)胞(含抗蟲基因)棉花植株(有抗蟲特性)上述培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟是什么？重組DNA導(dǎo)入形成基因工程培育抗蟲棉的簡要過程普通棉花(無抗蟲特性)蘇云金芽孢桿菌提取抗蟲基因棉花細(xì)胞(含基因工程培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞內(nèi)提取出來關(guān)鍵步驟二：形成重組DNA關(guān)鍵步驟三：重組DNA導(dǎo)入受體(棉花)細(xì)胞基因工程培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽孢1.1DNA重組技術(shù)的基本工具關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞內(nèi)提取出來關(guān)鍵步驟二：形成重組DNA關(guān)鍵步驟三：重組DNA導(dǎo)入受體(棉花)細(xì)胞“分子手術(shù)刀”——

限制性核酸內(nèi)切酶“分子縫合針”——DNA連接酶“分子運(yùn)輸車”——

基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體1.1DNA重組技術(shù)的基本工具關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從“分子手術(shù)刀”——

限制性核酸內(nèi)切酶⒈主要來源：2.種類與命名：3.作用：4.作用結(jié)果：主要是從原核生物中分離純化出來的一類酶。約4000種識(shí)別特定的核苷酸序列，斷裂磷酸二酯鍵。形成粘性末端或平末端“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶⒈主要來源：2.種類與命尋根問底你能推測限制酶存在于原核生物中的作用是是什么嗎？

原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在長期的進(jìn)化過程中形成了一套完善的防御機(jī)制，以防止外來病原物的侵害。限制酶就是細(xì)菌的一種防御性工具，當(dāng)外源DNA侵入時(shí)，會(huì)利用限制酶將外源DNA切割掉，以保證自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，從而達(dá)到保護(hù)自身的目的。goback尋根問底你能推測限制酶存在于原核生物中的作用是是什么嗎？

現(xiàn)在已經(jīng)從約300種微生物中分離出約4000種限制性內(nèi)切酶(限制酶)。EcoRⅠSmaⅠ粘質(zhì)沙雷氏桿菌（Serratia

marcesens）大腸桿菌（Escherichia

coli

R）練習(xí)：流感嗜血桿菌的d菌株(Haemophilusinfluenzaed)中先后分離到3種限制酶，則分別命名為:HindⅠ、HindⅡ和HindⅢ現(xiàn)在已經(jīng)從約300種微生物中分離出約4000限制酶的識(shí)別序列：能被限制性內(nèi)切酶特異性識(shí)別的切割部位都具有回文序列：在切割部位，一條鏈正向讀的堿基順序與另一條鏈反向讀的順序完全一致。限制酶的識(shí)別序列：能被限制性內(nèi)切酶特異性識(shí)別的切割部位都具有選修3-1-1DNA重組技術(shù)的基本工具課件限制性核酸內(nèi)切酶作用的是DNA分子中的什么鍵？磷酸二酯鍵即脫氧核糖、磷酸之間的連接ATGGCATCTTCGAAGP

AP限制性核酸內(nèi)切酶作用的是DNA分子中的什么鍵？磷酸二酯鍵ATAGGobackAGGoback

EcoRⅠ黏性末端黏性末端EcoRⅠ黏性末端黏性末端什么叫黏性末端？

被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)伸出的核苷酸，它們之間正好互補(bǔ)配對(duì)，這樣的切口叫黏性末端。什么叫黏性末端？被限制酶切開的DNA兩條單鏈SmaⅠ平末端平末端SmaⅠ平末端平末端限制酶DNA解旋酶區(qū)別限制酶與DNA解旋酶的區(qū)別切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯鍵將DNA兩條鏈的氫鍵打開形成兩條單鏈限制酶DNA水解酶區(qū)別限制酶與DNA水解酶的區(qū)別切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯鍵，形成片段的DNA.（雙鏈）切割磷酸二酯鍵，形成單個(gè)的脫氧核苷酸。限制酶DNA解旋酶區(qū)別限制酶與DNA解旋酶的區(qū)別切割特定的核目的基因所在DNA片段載體DNA片段EcoRⅠEcoRⅠDNA連接酶目的基因所在DNA片段載體DNA片段EcoRⅠEcoRⅠDN1.作用:

把切下來的DNA片段拼接成新的DNA.2.作用原理：催化磷酸二酯鍵形成3.種類：⑴E·coliDNA連接酶⑵T4DNA連接酶“分子縫合針”——DNA連接酶1.作用:把切下來的DNA片段拼接成新的DN

可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，E·coliDNA連接酶或T4DNA連接酶即恢復(fù)被限制酶切開的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，E·coliD

DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？T4DNA連接酶還DNA連接酶DNA聚合酶連接DNA鏈連接部位相同點(diǎn)雙鏈單鏈在兩DNA片段之間形成磷酸二酯鍵將單個(gè)核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羥基上，形成磷酸二酯鍵都能形成磷酸二酯鍵二者都是蛋白質(zhì)類化合物DNA連接酶DNA聚合酶連接DNA鏈連接部位雙鏈單鏈在兩DN嘗試寫出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端CTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATT嘗試寫出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端CTTCA“分子運(yùn)輸車”——

基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體1.作用：2.條件：3.種類：質(zhì)粒、λ噬菌體的衍生物和動(dòng)植物病毒等。將外源基因送入受體細(xì)胞。“分子運(yùn)輸車”——基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體1.作用：2.條件⑴有1~多個(gè)限制酶切點(diǎn)⑵對(duì)受體細(xì)胞無害⑶使導(dǎo)入基因能在受體細(xì)胞中復(fù)制、表達(dá)⑷有某些標(biāo)記基因，便于篩選⑶假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制或不能轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因生物能有預(yù)想的效果嗎？⑴作為分子運(yùn)輸車——載體，如果沒有切割位點(diǎn)將會(huì)怎樣？⑵霍亂菌的質(zhì)粒多個(gè)限制酶切點(diǎn)，你會(huì)用它來做分子運(yùn)輸車嗎？

⑷目的基因有沒有進(jìn)入受體細(xì)胞，如何去發(fā)現(xiàn)？

作為載體的必要條件:Goback⑶假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制或不能轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因生物質(zhì)粒的特點(diǎn)：是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA分子外并能自我復(fù)制的小型雙鏈環(huán)狀DNA分子。質(zhì)粒的特點(diǎn)：是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA分子能復(fù)制并帶著插入的目的基因一起復(fù)制有切割位點(diǎn)有標(biāo)記基因的存在，將來可用含青霉素的培養(yǎng)基鑒別。能復(fù)制并帶著插入的目的基因一起復(fù)制有切割位點(diǎn)有標(biāo)記基因的存在選修3-1-1DNA重組技術(shù)的基本工具課件基因工程的工具限制酶主要存在于原核生物中具有專一性(識(shí)別序列)切開DNA分子的磷酸二酯鍵DNA連接酶連接磷酸二酯鍵種類E.coliDNA連接酶T4DNA連接酶載體具備的條件質(zhì)粒、λ噬菌體衍生物、動(dòng)植物病毒種類能自我復(fù)制有一個(gè)或多個(gè)酶切割位點(diǎn)有標(biāo)記基因?qū)κ荏w細(xì)胞無害基因工程限制酶主要存在于原核生物中DNA連連接磷酸二酯鍵種類思考與探究P72、為什么限制酶不剪切細(xì)菌本身的DNA？

通過長期的進(jìn)化，細(xì)菌中含有某種限制酶的細(xì)胞，其DNA分子中或者不具備這種限制酶的識(shí)別切割序列；或者通過甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識(shí)別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開。這樣，盡管細(xì)菌中含有某種限制酶也不會(huì)使自身的DNA被切斷，并且可以防止外源DNA的入侵。思考與探究P72、為什么限制酶不剪切細(xì)菌本身的DNA3、天然的DNA分子可以直接用做基因工程載體嗎？為什么？提示：基因工程中作為載體使用的DNA分子很多都是質(zhì)粒（plasmid），即獨(dú)立于細(xì)菌擬核染色體DNA之外的一種可以自我復(fù)制、雙鏈閉環(huán)的裸露的DNA分子。是否任何質(zhì)粒都可以作為基因工程載體使用呢？不是，作為基因工程使用的載體必需滿足以下條件：思考與探究P73、天然的DNA分子可以直接用做基因工程載體嗎？為什么？提示1）載體DNA必需有一個(gè)或多個(gè)限制酶的切割位點(diǎn)，以便目的基因可以插入到載體上去。這些供目的基因插入的限制酶的切點(diǎn)所處的位置，還必須是在質(zhì)粒本身需要的基因片段之外，這樣才不至于因目的基因的插入而失活。2）載體DNA必需具備自我復(fù)制的能力，或整合到受體染色體DNA上隨染色體DNA的復(fù)制而同步復(fù)制。3）載體DNA必需帶有標(biāo)記基因，以便重組后進(jìn)行重組子的篩選。4）載體DNA必需是安全的，不會(huì)對(duì)受體細(xì)胞有害，或不能進(jìn)入到除受體細(xì)胞外的其他生物細(xì)胞中去。5）載體DNA分子大小應(yīng)適合，以便提取和在體外進(jìn)行操作，太大就不便操作。實(shí)際上自然存在的質(zhì)粒DNA分子并不完全具備上述條件，都要進(jìn)行人工改造后才能用于基因工程操作。1）載體DNA必需有一個(gè)或多個(gè)限制酶的切割位點(diǎn)，以便目的基4、DNA連接酶有連接單鏈DNA的本領(lǐng)嗎？

迄今為止，所發(fā)現(xiàn)的DNA連接酶都不具有連接單鏈DNA的能力，至于原因，現(xiàn)在還不清楚，也許將來會(huì)發(fā)現(xiàn)可以連接單鏈DNA的酶。思考與探究P74、DNA連接酶有連接單鏈DNA的本領(lǐng)嗎？迄今為1)不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是

A、能復(fù)制（）

B、有多個(gè)限制酶切點(diǎn)

C、具有標(biāo)記基因

D、它是環(huán)狀DNAD練習(xí)1)不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是D練習(xí)2）有關(guān)基因工程的敘述中，正確的是（）

A、所有的限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列

B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的載體

C、載體必須具備的條件之一是：具有多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與目的基因連接

D、DNA連接酶使黏性末端的堿基之間形成氫鍵C練習(xí)2）有關(guān)基因工程的敘述中，正確的是（）C練習(xí)3）同一種限制酶切割成的黏性末端是A.①②B.①③C.①④D.②③A3）同一種限制酶切割成的黏性末端是A.①②（10江蘇卷）4.下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖l、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問題：（10江蘇卷）4.下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)（1）一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有▲個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。（2）若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SmaⅠ酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越▲。

（1）0、2（2）高（1）一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有（3）用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是▲。（4）與只使用EcoRI相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止▲。

（3）SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因（4）質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化（3）用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用Sma（5）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入▲酶。（6）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了▲。（5）DNA連接（6）鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞（5）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并基因工程第一節(jié)：DNA重組技術(shù)的基本工具

?？h一中劉秀榮基因工程據(jù)WTO調(diào)查：2004年全世界因狂犬病致死人數(shù)約5.5萬人

中國衛(wèi)生部通報(bào)：2004年７月，狂犬病列法定報(bào)告?zhèn)魅静∷劳鰯?shù)之首。發(fā)病死亡率近100%.能產(chǎn)生狂犬病抗體蛋白的轉(zhuǎn)基因植物據(jù)WTO調(diào)查：2004年全世界因狂犬病致死人數(shù)約5.5萬人選修3-1-1DNA重組技術(shù)的基本工具課件基因工程的概念

基因工程是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，并通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出更符合人類需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。由于基因工程是DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫DNA重組技術(shù)?；蚬こ痰母拍罨蚬こ淌侵赴凑杖藗兊脑竿?，進(jìn)行嚴(yán)基因工程的別名DNA重組技術(shù)操作環(huán)境生物體外操作對(duì)象基因操作水平DNA分子水平基本過程剪切→拼接→導(dǎo)入→表達(dá)結(jié)果人類需要的基因產(chǎn)物或性狀概念分析：基因工程的別名DNA重組技術(shù)操作環(huán)境生物體外操作對(duì)象基因操作問題探討：蘇云金芽孢桿菌含有一種可以合成毒蛋白的基因。讓細(xì)菌的毒蛋白基因在棉花細(xì)胞中表達(dá)，可培育出抵抗棉鈴蟲害的抗蟲棉。

想一想需要做哪些關(guān)鍵工作？蘇云金芽孢桿菌毒蛋白普通棉花抗蟲棉問題探討：蘇云金芽孢桿菌含有一種可以合成毒蛋白的基因。普通棉花(無抗蟲特性)蘇云金芽孢桿菌提取抗蟲基因棉花細(xì)胞(含抗蟲基因)棉花植株(有抗蟲特性)上述培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟是什么？重組DNA導(dǎo)入形成基因工程培育抗蟲棉的簡要過程普通棉花(無抗蟲特性)蘇云金芽孢桿菌提取抗蟲基因棉花細(xì)胞(含基因工程培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞內(nèi)提取出來關(guān)鍵步驟二：形成重組DNA關(guān)鍵步驟三：重組DNA導(dǎo)入受體(棉花)細(xì)胞基因工程培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽孢1.1DNA重組技術(shù)的基本工具關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞內(nèi)提取出來關(guān)鍵步驟二：形成重組DNA關(guān)鍵步驟三：重組DNA導(dǎo)入受體(棉花)細(xì)胞“分子手術(shù)刀”——

限制性核酸內(nèi)切酶“分子縫合針”——DNA連接酶“分子運(yùn)輸車”——

基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體1.1DNA重組技術(shù)的基本工具關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從“分子手術(shù)刀”——

限制性核酸內(nèi)切酶⒈主要來源：2.種類與命名：3.作用：4.作用結(jié)果：主要是從原核生物中分離純化出來的一類酶。約4000種識(shí)別特定的核苷酸序列，斷裂磷酸二酯鍵。形成粘性末端或平末端“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶⒈主要來源：2.種類與命尋根問底你能推測限制酶存在于原核生物中的作用是是什么嗎？

原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在長期的進(jìn)化過程中形成了一套完善的防御機(jī)制，以防止外來病原物的侵害。限制酶就是細(xì)菌的一種防御性工具，當(dāng)外源DNA侵入時(shí)，會(huì)利用限制酶將外源DNA切割掉，以保證自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，從而達(dá)到保護(hù)自身的目的。goback尋根問底你能推測限制酶存在于原核生物中的作用是是什么嗎？

現(xiàn)在已經(jīng)從約300種微生物中分離出約4000種限制性內(nèi)切酶(限制酶)。EcoRⅠSmaⅠ粘質(zhì)沙雷氏桿菌（Serratia

marcesens）大腸桿菌（Escherichia

coli

R）練習(xí)：流感嗜血桿菌的d菌株(Haemophilusinfluenzaed)中先后分離到3種限制酶，則分別命名為:HindⅠ、HindⅡ和HindⅢ現(xiàn)在已經(jīng)從約300種微生物中分離出約4000限制酶的識(shí)別序列：能被限制性內(nèi)切酶特異性識(shí)別的切割部位都具有回文序列：在切割部位，一條鏈正向讀的堿基順序與另一條鏈反向讀的順序完全一致。限制酶的識(shí)別序列：能被限制性內(nèi)切酶特異性識(shí)別的切割部位都具有選修3-1-1DNA重組技術(shù)的基本工具課件限制性核酸內(nèi)切酶作用的是DNA分子中的什么鍵？磷酸二酯鍵即脫氧核糖、磷酸之間的連接ATGGCATCTTCGAAGP

AP限制性核酸內(nèi)切酶作用的是DNA分子中的什么鍵？磷酸二酯鍵ATAGGobackAGGoback

EcoRⅠ黏性末端黏性末端EcoRⅠ黏性末端黏性末端什么叫黏性末端？

被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)伸出的核苷酸，它們之間正好互補(bǔ)配對(duì)，這樣的切口叫黏性末端。什么叫黏性末端？被限制酶切開的DNA兩條單鏈SmaⅠ平末端平末端SmaⅠ平末端平末端限制酶DNA解旋酶區(qū)別限制酶與DNA解旋酶的區(qū)別切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯鍵將DNA兩條鏈的氫鍵打開形成兩條單鏈限制酶DNA水解酶區(qū)別限制酶與DNA水解酶的區(qū)別切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯鍵，形成片段的DNA.（雙鏈）切割磷酸二酯鍵，形成單個(gè)的脫氧核苷酸。限制酶DNA解旋酶區(qū)別限制酶與DNA解旋酶的區(qū)別切割特定的核目的基因所在DNA片段載體DNA片段EcoRⅠEcoRⅠDNA連接酶目的基因所在DNA片段載體DNA片段EcoRⅠEcoRⅠDN1.作用:

把切下來的DNA片段拼接成新的DNA.2.作用原理：催化磷酸二酯鍵形成3.種類：⑴E·coliDNA連接酶⑵T4DNA連接酶“分子縫合針”——DNA連接酶1.作用:把切下來的DNA片段拼接成新的DN

可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，E·coliDNA連接酶或T4DNA連接酶即恢復(fù)被限制酶切開的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，E·coliD

DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？T4DNA連接酶還DNA連接酶DNA聚合酶連接DNA鏈連接部位相同點(diǎn)雙鏈單鏈在兩DNA片段之間形成磷酸二酯鍵將單個(gè)核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羥基上，形成磷酸二酯鍵都能形成磷酸二酯鍵二者都是蛋白質(zhì)類化合物DNA連接酶DNA聚合酶連接DNA鏈連接部位雙鏈單鏈在兩DN嘗試寫出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端CTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATT嘗試寫出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端CTTCA“分子運(yùn)輸車”——

基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體1.作用：2.條件：3.種類：質(zhì)粒、λ噬菌體的衍生物和動(dòng)植物病毒等。將外源基因送入受體細(xì)胞。“分子運(yùn)輸車”——基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體1.作用：2.條件⑴有1~多個(gè)限制酶切點(diǎn)⑵對(duì)受體細(xì)胞無害⑶使導(dǎo)入基因能在受體細(xì)胞中復(fù)制、表達(dá)⑷有某些標(biāo)記基因，便于篩選⑶假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制或不能轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因生物能有預(yù)想的效果嗎？⑴作為分子運(yùn)輸車——載體，如果沒有切割位點(diǎn)將會(huì)怎樣？⑵霍亂菌的質(zhì)粒多個(gè)限制酶切點(diǎn)，你會(huì)用它來做分子運(yùn)輸車嗎？

⑷目的基因有沒有進(jìn)入受體細(xì)胞，如何去發(fā)現(xiàn)？

作為載體的必要條件:Goback⑶假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制或不能轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因生物質(zhì)粒的特點(diǎn)：是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA分子外并能自我復(fù)制的小型雙鏈環(huán)狀DNA分子。質(zhì)粒的特點(diǎn)：是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA分子能復(fù)制并帶著插入的目的基因一起復(fù)制有切割位點(diǎn)有標(biāo)記基因的存在，將來可用含青霉素的培養(yǎng)基鑒別。能復(fù)制并帶著插入的目的基因一起復(fù)制有切割位點(diǎn)有標(biāo)記基因的存在選修3-1-1DNA重組技術(shù)的基本工具課件基因工程的工具限制酶主要存在于原核生物中具有專一性(識(shí)別序列)切開DNA分子的磷酸二酯鍵DNA連接酶連接磷酸二酯鍵種類E.coliDNA連接酶T4DNA連接酶載體具備的條件質(zhì)粒、λ噬菌體衍生物、動(dòng)植物病毒種類能自我復(fù)制有一個(gè)或多個(gè)酶切割位點(diǎn)有標(biāo)記基因?qū)κ荏w細(xì)胞無害基因工程限制酶主要存在于原核生物中DNA連連接磷酸二酯鍵種類思考與探究P72、為什么限制酶不剪切細(xì)菌本身的DNA？

通過長期的進(jìn)化，細(xì)菌中含有某種限制酶的細(xì)胞，其DNA分子中或者不具備這種限制酶的識(shí)別切割序列；或者通過甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識(shí)別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開。這樣，盡管細(xì)菌中含有某種限制酶也不會(huì)使自身的DNA被切斷，并且可以防止外源DNA的入侵。思考與探究P72、為什么限制酶不剪切細(xì)菌本身的DNA3、天然的DNA分子可以直接用做基因工程載體嗎？為什么？提示：基因工程中作為載體使用的DNA分子很多都是質(zhì)粒（plasmid），即獨(dú)立于細(xì)菌擬核染色體DNA之外的一種可以自我復(fù)制、雙鏈閉環(huán)的裸露的DNA分子。是否任何質(zhì)粒都可以作為基因工程載體使用呢？不是，作為基因工程使用的載體必需滿足以下條件：思考與探究P73、天然的DNA分子可以直接用做基因工程載體嗎？為什么？提示1）載體DNA必需有一個(gè)或多個(gè)限制酶的切割位點(diǎn)，以便目的基因可以插入到載體上去。這些供目的基因插入的限制酶的切點(diǎn)所處的位置，還必須是在質(zhì)粒本身需要的基因片段之外，這樣才不至于因目的基因的插入而失活。2）載體DNA必需具備自我復(fù)制的能力，或整合到受體染色體DNA上隨染色體DNA的復(fù)制而同步復(fù)制。3）載體DNA必需帶有標(biāo)記基因，以便重組后進(jìn)行重組子的篩選。4）載體DNA必需是安全的，不會(huì)對(duì)受體細(xì)胞有害，或不能進(jìn)入到除受體細(xì)胞外的其他生物細(xì)胞中去。5）載體DNA分子大小應(yīng)適合，以便提取和在體外進(jìn)行操作，太大就不便操作。實(shí)際上自然存在的質(zhì)粒DNA分子并不完全具備上述條件，都要進(jìn)行人工改造后才能用于基因工程操作。1）載體DNA必需有一個(gè)或多個(gè)限制酶的切割位點(diǎn)，以便目的基4、DNA連接酶有連接單鏈DNA的本領(lǐng)嗎？

迄今為止，所發(fā)現(xiàn)的DNA連接酶都不具有連接單鏈DNA的能力，至于原因，現(xiàn)在還不清楚，也許將