疾病動(dòng)物模型特選借鑒

……參考資料…一頁(yè)眉頁(yè)腳可刪除…一疾病動(dòng)物模型1復(fù)制方法和應(yīng)用動(dòng)物疾病模型的復(fù)制，是用人為的方法，使動(dòng)物在一定的致病因素（物理的、化學(xué)的、生物的）作用下，造成動(dòng)物組織、器官或全身一定損害，出現(xiàn)某些類似人類疾病的功能、代謝、形態(tài)結(jié)構(gòu)方面的變化或各種疾病，通過這種手段來研究人類疾病的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律，為研究人類疾病的預(yù)防、治療（包括新藥物試用）提供理論依據(jù)。所以動(dòng)物疾病模型的復(fù)制，在醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中占有十分重要的地位。目前我國(guó)生物醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中，動(dòng)物疾病模型主要用于三個(gè)方面：即實(shí)驗(yàn)生物學(xué)、實(shí)驗(yàn)病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)治療學(xué)（新藥篩選亦屬于實(shí)驗(yàn)治療學(xué)范疇） 。由于研究目的不同，對(duì)于疾病模型的要求也有所區(qū)別。如實(shí)驗(yàn)病理學(xué)，它著重于研究用某種特定方法復(fù)制出某些疾病。整個(gè)疾病復(fù)制過程，就是它的研究?jī)?nèi)容，目的是通過疾病的復(fù)制去探討疾病的病因?qū)W和發(fā)病原。而實(shí)驗(yàn)治療學(xué)則完全不同，疾病的復(fù)制僅是它研究的開始，因?yàn)樗闹饕康氖菫榱岁U明在該病的發(fā)生發(fā)展過程中，某些治療措施或藥物的療效如何。誘發(fā)性動(dòng)物模型的復(fù)制方法不外是用生物的、物理的、化學(xué)的和各種環(huán)境因子作用于動(dòng)物而產(chǎn)生。生物學(xué)因素包括細(xì)菌、病毒、寄生蟲、細(xì)胞、生物毒素、激素等各種致病原，通過接種而使正常動(dòng)物發(fā)生疾病。如接種細(xì)菌、病毒于敏感動(dòng)物使其產(chǎn)生各種傳染病。目前已知的150余種人畜共患病提供了極有意義的傳染病材料。從流行病學(xué)、病理學(xué)或并發(fā)癥等不同角度研究，首先要充分了解動(dòng)物與人在疾病易感性和臨床表現(xiàn)等方面的同異處。例如輪狀病毒可引起嬰兒急性壞死性腸類，犬感染輪狀病毒后的表現(xiàn)只是亞臨床的。然而嚴(yán)重威脅幼犬的腸道病毒是細(xì)小病毒，而人對(duì)細(xì)小病毒則并不易感。物理因素是多方面的。例如在機(jī)械力作用下產(chǎn)生各種外傷性腦損傷、骨折等模型，氣壓變動(dòng)復(fù)制高空病、潛水??；溫度改變產(chǎn)生各種燒傷和凍傷；放射線照射可復(fù)制各型放射病，引起免疫功能抑制或誘發(fā)Spragae-Dawley系大鼠孚L腺癌；閃光刺激誘發(fā)癲癇模型；噪音刺激引起聽源性高血壓及改變行為記憶功能等。 復(fù)借鑒內(nèi)容#……參考資料…一頁(yè)眉頁(yè)腳可刪除…一制各種模型時(shí)必須嚴(yán)格考慮不同對(duì)象應(yīng)采用的不同的刺激強(qiáng)度、頻率和作用時(shí)問，即按設(shè)計(jì)要求摸索有關(guān)實(shí)驗(yàn)條件。例如用擴(kuò)張的氣囊在顱內(nèi)加壓制作急性顱內(nèi)壓增高癥動(dòng)物模型時(shí)，應(yīng)該按不同壓力梯度通過幾小時(shí)逐步加壓， 待腦的順應(yīng)性發(fā)生改變后才出現(xiàn)臨床腦缺血-腦水月中”的惡性循環(huán)。盲目加壓會(huì)急速發(fā)生腦疝死亡，不可能復(fù)制出腦水月中對(duì)機(jī)體代償和失代償?shù)牟±砩磉^程， 這樣的模型會(huì)喪失或缺乏臨床研究的價(jià)值?；瘜W(xué)因素可直接或間接（通過代謝產(chǎn)物）對(duì)機(jī)體產(chǎn)生有害作用。如用各種化學(xué)致癌劑誘發(fā)各種月中瘤；用各種化學(xué)毒物或毒氣誘發(fā)各種中毒性疾??；用強(qiáng)堿、強(qiáng)酸可致皮膚燒傷等。不同品種、不同年齡的動(dòng)物也存在劑量、耐受性和副作用等差異。實(shí)驗(yàn)者需要通過廣泛收集有關(guān)信息，在預(yù)實(shí)驗(yàn)中摸索穩(wěn)定而有效的實(shí)驗(yàn)條件。研究者可根據(jù)研究目的需要，選擇相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)方法，在健康的動(dòng)物身上復(fù)制出所需要的疾病模型。誘發(fā)性疾病模型已知有數(shù)千種，復(fù)制的方法也是多種多樣的，這里僅對(duì)一些常用的、經(jīng)典的人類疾病的動(dòng)物模型復(fù)制方法加以簡(jiǎn)介。2月中瘤模型的復(fù)制方法復(fù)制動(dòng)物月中瘤的方法很多，如將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用放射線照射或靜脈、局部注射放射性同位素；使用各種化學(xué)致癌劑（烷化劑、多環(huán)芳香姓類、芳香胺類、氨基偶氮染料、亞硝胺類）；使用植物毒素（如蘇鐵素、黃樟素等）；使用金屬（如銘、鍥、神、鎘等）；使用RNA和DNA月中瘤病毒；使用多種致癌性霉菌毒素（其中致癌作用最強(qiáng)者為黃曲霉素）等，均可誘發(fā)成各種月中瘤。誘發(fā)性月中瘤模型其數(shù)量在誘發(fā)性動(dòng)物模型中占首位。一般是利用致癌物質(zhì)通過口服、注入、埋藏和涂抹等方式使動(dòng)物發(fā)生月中瘤。能誘發(fā)動(dòng)物腫瘤的病毒也有不少報(bào)導(dǎo)，例如小鼠白血病病毒（MLV）、雞白血病病毒（ALV）和貓白血病病毒（FLV）分別能引起大小鼠，雞和貓白血病。Rous雞肉瘤病毒可使田鼠、雞、鴨、鴿鶉、猴、蛇等多種動(dòng)物發(fā)生肉瘤。貓肉瘤肉毒（FSV）可使大鼠、貓、犬和猴發(fā)生肉瘤。人類腺病毒能誘發(fā)小鼠、田鼠肉瘤和淋巴瘤。誘發(fā)性月中瘤動(dòng)物模型肝癌二乙基亞硝胺（DEN）誘發(fā)大白鼠肝癌：取體重250g左右的封閉群大白鼠，雌雄不拘。按性別分籠飼養(yǎng)。除給普通食物外，飼以致癌物，即用借鑒內(nèi)容#……參考資料…一頁(yè)眉頁(yè)腳可刪除…一0.25%DEN水溶液灌胃，劑量為10mg/kg,每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由飲用。共約4個(gè)月可誘發(fā)成肝癌。或單用0.005%摻入飲水中口吸服8個(gè)月誘發(fā)肝癌。4-2甲基氨基氮苯（DBA）誘發(fā)大鼠肝癌：用含0.06%DBA的飼料喂養(yǎng)大鼠，飼料中維生素B2不應(yīng)超過1.5?2mg/kg,4?6月就有大量的肝癌誘發(fā)成功。2-乙酰氨基酸（2AAF）誘發(fā)小鼠、狗、貓、雞、兔肝癌：給成年大鼠含0.03%2AAF標(biāo)準(zhǔn)飼料。每日每平均2?3mg2AAF（也可將2AAF混于油中灌喂），3?4月后有80?90%動(dòng)物產(chǎn)生肝月中瘤。二乙基亞硝胺誘發(fā)大鼠肝癌：用劑量為每日0.3?14mg/kg體重，混于飼料或飲水中給予，6?9個(gè)月后255/300大鼠發(fā)生了肝癌。亞胺基偶氮甲苯（OAAT）誘發(fā)小鼠肝癌：用1%OAAF苯溶液（約0.1ml含1mg）涂在動(dòng)物的兩肩胛間皮膚上，隔日一次，每次2?3滴，一般涂100次。實(shí)驗(yàn)后7?8周即而出現(xiàn)第一個(gè)肝月中瘤，7個(gè)月以上可誘發(fā)小鼠肝月中瘤約55%?；蛴?.5mgOAAT溶于葵瓜子油中，給C3H小鼠皮下注射4次，每日間隔10天，也可誘發(fā)成肝癌。黃曲霉素誘發(fā)大鼠肝癌：每日飼料中含0.001?0.015ppm,混入飼料中喂6個(gè)月后，肝癌誘發(fā)率達(dá)80%。胃癌 甲基膽意誘發(fā)小鼠胃癌：取20g左右的小鼠，無菌手術(shù)下，在腺胃粘膜面穿掛含甲基膽意（MC）線結(jié)。含MC的線結(jié)是用普通細(xì)線，在一端打結(jié)后，將線結(jié)置于盛有MC小玻璃試管內(nèi)，在酒精燈上微微加溫，使MC液化滲入線結(jié)。MC濃度為0.05?0.1g20-甲基膽慈內(nèi)浸入10?20根線。手術(shù)埋線后4?8個(gè)月可誘發(fā)成功胃癌。用不對(duì)稱亞硝胺，劑量為0.25ml/kg體重，3個(gè)月后全部動(dòng)物發(fā)生前胃乳頭狀癌，7?8個(gè)月后有85?100%發(fā)生前胃癌。昆明種最敏感。A系次之，615系小鼠敏感性最差。此外還可用甲基亞硝基醋酸尿素給 BD大鼠飲水中加2mg/kg體重，每周5次飲用，520天后全部大鼠均發(fā)生了腺胃癌。食管癌 甲基甲基亞硝胺（MBNA）誘發(fā)大鼠食管癌：取體重100g以上的Wistar大鼠，任其食用含甲基甲基亞硝胺的飲水，并將MBNA摻入飼料中使每日攝入量達(dá)0.75?1.5mg/kg體重。80?100天可誘發(fā)成食管癌。也可用二姓黃樟素（Dihydrosafrole）,它是一種制備啤酒的調(diào)味品，在大鼠飼料中加入百萬分之二千五百至一萬（2500?10000ppm）黃樟素，就能引起20?75%的食管癌。用0.2%或0.005%的甲基甲基亞硝胺水溶液，給動(dòng)物經(jīng)口灌喂，每天一次，大鼠灌注劑量為1mg/kg體重，至第27天即發(fā)現(xiàn)一例食管乳頭狀瘤，154天發(fā)現(xiàn)第一借鑒內(nèi)容# 3……參考資料…一頁(yè)眉頁(yè)腳可刪除…一例食管癌，11個(gè)月食管癌的發(fā)生率為53%。肺癌二乙基亞硝胺（DEN）誘發(fā)小鼠肺癌：小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次，每次劑量56mg/kg,DEN總劑量達(dá)到868mg,觀察時(shí)間為100天左右時(shí)，發(fā)癌率可達(dá)40%。而DEN總劑量達(dá)到1176mg,觀察時(shí)間為半年左右時(shí)；發(fā)癌率可達(dá)94%0烏拉坦誘發(fā)肺腺癌：小鼠（A系，1?11/2月齡）較大鼠敏感，每次每只腹腔注入10%烏拉坦生理鹽水液0.1?0.3ml,間隔3?5日再注，共注2?3個(gè)月，每只小鼠用量約為100mg，注后3個(gè)月肺腺癌發(fā)生率為100%,而且多數(shù)為多發(fā)性，這種誘發(fā)瘤為良性。此外還可用氣管內(nèi)注入苯并在、硫酸俊氣溶膠、甲基膽慈等誘發(fā)肺癌。如猴氣管內(nèi)注入3,4苯并在（苯并花為3?15mg與等量之Fe2O3混合液），每周一次，共10次，6只猴中有2只誘發(fā)肺的鱗狀上皮癌。亦有人用硫酸胺氣溶劑給100只大鼠吸入，13個(gè)月后所有大鼠都發(fā)生了肺腺癌。用0.2%明膠作懸浮劑將甲基膽慈混合后給金地鼠氣管內(nèi)注入，每次0.1ml（含甲基膽慈5mg）每周一次，共6次，53周后有62.5%動(dòng)物發(fā)生了肺癌。鼻咽癌二甲基膽慈（MC）誘發(fā)大鼠鼻咽癌：取直徑2?3mm的硬質(zhì)塑米管，在酒精燈上小火拉成錐形，每段長(zhǎng)約 3.5cm,管內(nèi)填以結(jié)晶體MC。小管一端用火封閉，以防藥物外溢，尖端用針刺數(shù)孔，使MC能從小妃溢出。取體重120g左右的大白鼠，雌雄均可，乙醴麻醉后，由前鼻孔將上述含 MC的塑料小管插入鼻腔，利用前鼻孔較小管粗端為小的特點(diǎn)， 稍加用力，迫使小管全部進(jìn)入鼻腔內(nèi)，其尖部可達(dá)鼻咽腔。不需另加固定，即可使小管長(zhǎng)期留于鼻腔內(nèi)。待到預(yù)定時(shí)間（半年以上），或動(dòng)物自行死亡時(shí)，到其鼻咽部，10%福爾馬林固定，脫鈣后，石蠟包埋，進(jìn)行連續(xù)切片。發(fā)癌率可達(dá)60%以上。二乙基亞硝胺滴鼻法誘發(fā)鼻咽癌：取120g左右大白鼠，雌雄均可，乙醴麻醉后，用磨平針尖的 8號(hào)針頭，從前鼻孔輕輕插入，針尖可達(dá)鼻咽腔。經(jīng)注射器灌注用 1%吐溫-80新配的33.3%DEN混懸液0.02ml（含DEN6.7mg）每周1次，共15?20次，可誘發(fā)成鼻咽癌。宮頸癌取雌性小白鼠，以附有0.1mgMC的棉紗線結(jié)在動(dòng)物不麻醉的狀態(tài)下，借助于陰道擴(kuò)張器及磨純的彎針，將線穿入宮頸。經(jīng)右宮角背部穿出，使線結(jié)固定于宮頸口。線的另一端則固定于背部肌肉，縫合皮膚，掛線以后，同日開始連續(xù)注射青霉素2?3天。以防術(shù)后感染。至一定時(shí)間（半年左右）處死動(dòng)借鑒內(nèi)容#……參考資料…一頁(yè)眉頁(yè)腳可刪除…一物，宮頸組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)切片。結(jié)腸癌給四周齡的雄性大白鼠，皮下注射二甲基葦?。―imethlhydrazine,DMH）每周一次，連續(xù)21周，每次DMH21mg/kg。最后一次給藥后1?4周，處死動(dòng)物。降結(jié)腸部位用Bouin液固定，脫水，石蠟包埋，切片。所用之DMH先配成每100ml含400mg的母液，并加EDTA37mg,用氫氧化納（0.1N）液將pH調(diào)至6.5備用。移植性月中瘤動(dòng)物模型目前臨床所用的抗腫瘤藥中，大多數(shù)是經(jīng)動(dòng)物移植性月中瘤試驗(yàn)篩選而發(fā)現(xiàn)的。應(yīng)用動(dòng)物移植性月中瘤篩選藥物的優(yōu)點(diǎn)是： 使一群動(dòng)物同時(shí)接種同樣量的瘤細(xì)胞，生長(zhǎng)速率比較一致，個(gè)體差異較小，接種成活率近100%,對(duì)宿主的影響相類似，易于客觀判斷療效，可在同種或同品系動(dòng)物中連續(xù)移植，長(zhǎng)期保留供試驗(yàn)用，試驗(yàn)周期一般均較短，試驗(yàn)條件易于控制等。因此目前抗月中瘤藥篩選大多數(shù)采用動(dòng)物移植瘤作為篩選模型。目前世界上保存的動(dòng)物移植腫瘤約有400株，但篩選試驗(yàn)常用者僅20?30種。據(jù)1984年統(tǒng)計(jì)，我國(guó)在同系、同種動(dòng)物中已建立各種動(dòng)物和人的常見的瘤株64個(gè)。例如小鼠肺腺瘤（HP615）、小鼠子宮頸瘤27號(hào)（U27）、小鼠腦瘤22（B22）、小鼠淋巴細(xì)胞性血?。↙615）、裸鼠人肝瘤移植瘤和人腦惡性膠質(zhì)細(xì)胞瘤（NCS-1）等。動(dòng)物月中瘤可通過移植傳代而培養(yǎng)出所需要的月中瘤細(xì)胞株。 瘤株是一種組織學(xué)類型和生長(zhǎng)特性已趨穩(wěn)定，并能在同系或同種動(dòng)物中連續(xù)傳代的月中瘤細(xì)胞模型。月中瘤移植于健康動(dòng)物，相當(dāng)于活體組織培養(yǎng)，可長(zhǎng)期保存瘤種，供實(shí)驗(yàn)所用。實(shí)驗(yàn)中常用腹水瘤和實(shí)體瘤兩種方式進(jìn)行移植。對(duì)于會(huì)產(chǎn)生腹水的月中瘤，可將其一定數(shù)量的細(xì)胞注入受體動(dòng)物腹腔形成腹水瘤或產(chǎn)生腹水。實(shí)體瘤移植也是在無菌條件下