分析高效液相色譜法測(cè)定中藥中甘草酸的含量

分析高效液相色譜法測(cè)定中藥中甘草酸的含量〔〕:

摘要：通過高效液相色譜法對(duì)重要中甘草酸含量進(jìn)展檢測(cè)。甘草酸提取于0.3%的氨水超聲中，將其置于SyncronisC18色譜柱上，流動(dòng)相及流速分別設(shè)置為55%乙腈和1.0mL/min，柱溫及檢測(cè)波長(zhǎng)分別設(shè)置為30℃和256nm。1.5-50g/mL范圍內(nèi)，甘草酸具備良好的線性關(guān)系〔r=0.9991〕，檢測(cè)限及方法精細(xì)度RSD分別是0.19g/mL和0.88%〔n=5〕。高效液相色譜法具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、分析速度快等特點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：甘草酸；中藥；高效液相色譜法

本文引用格式：高曉寧,劉沙,張立娟,等.分析高效液相色譜法測(cè)定中藥中甘草酸的含量[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2022,19(69):121.

0引言

我國(guó)諸多中藥材中較為常見的一種是甘草，甘草中，甘草酸是相對(duì)重要的活性成分【1】。高效液相色譜法是檢測(cè)甘草酸含量的主要方法。

1實(shí)驗(yàn)

1.1檢測(cè)儀器與試劑。電子精細(xì)天平、色譜柱、高效液相色譜儀；甘草酸標(biāo)準(zhǔn)品，甘草，復(fù)方甘草片，乙腈；其它試劑均是分析純；蒸餾水為實(shí)驗(yàn)用水。

1.2配置標(biāo)準(zhǔn)溶液。利用電子精細(xì)天平稱取50mg甘草酸標(biāo)準(zhǔn)品，通過流動(dòng)相溶解，將其定容到25mL，獲取儲(chǔ)藏液0.2mg/mL，由流動(dòng)相稀釋標(biāo)準(zhǔn)并保存獲取的液體即為低濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3處理樣品。本次實(shí)驗(yàn)樣品為復(fù)方甘草片與甘草，隨機(jī)挑選購(gòu)置。利用粉碎機(jī)粉碎甘草，將粗粉過篩。復(fù)方甘草片通過研缽將其研細(xì)。在兩個(gè)離心管中分別置入5mg樣品粉末，添加5mL0.3%氨水，超聲提出，時(shí)間為5min，完成提取后制冷并過濾，通過流動(dòng)相定容濾液至10mL，最終獲取試品溶液。

1.4色譜條件。流動(dòng)相與流速分別是55%乙腈和1.0mL/min；進(jìn)樣體積、檢測(cè)波長(zhǎng)及柱溫分別是20L、256nm和30℃；色譜柱為SyncronisC18色譜柱。

2結(jié)果與討論

2.1確定研究方法

2.1.1確定色譜條件：甘草酸是屬于酸性化合物，羧基作為分子中的一局部，處于流動(dòng)相中的羧基具有較高的解離發(fā)生率，進(jìn)而誘發(fā)色譜峰脫位，產(chǎn)生甘草酸色譜峰對(duì)稱性減弱。實(shí)驗(yàn)期間，需要合理選擇流動(dòng)相，并對(duì)相的挑選進(jìn)展固定，保證甘草酸檢測(cè)含量的準(zhǔn)確性與高效性。防止解離羧基，實(shí)驗(yàn)過程中，可通過不同比例的磷酸添加對(duì)流動(dòng)相進(jìn)展調(diào)節(jié)，使其呈酸性【2】。其次，甘草樣品中具有諸多雜質(zhì)，使得色譜別離難度增加，所以，實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要對(duì)色譜柱合理選擇，探究并研究流速，以便更好地設(shè)置別離度，保證性能、分析方法等與分析要求相符。實(shí)驗(yàn)針對(duì)不同濃度流動(dòng)相進(jìn)展了研究，結(jié)果提示，55%的乙腈濃度可以有效別離樣品中的甘草酸，而且不會(huì)長(zhǎng)時(shí)間保存。

2.1.2創(chuàng)立合理的分析方法：對(duì)于濃度狹窄范圍及單一目的濃度的樣品或者簡(jiǎn)單樣品制備期間，可采取外標(biāo)法。含量檢測(cè)期間，內(nèi)標(biāo)法具有雜峰重疊或者供試雜質(zhì)與內(nèi)標(biāo)物雜質(zhì)風(fēng)險(xiǎn)，該階段，內(nèi)標(biāo)定量準(zhǔn)確性低于外表。外標(biāo)法應(yīng)用期間，技能需要對(duì)灰質(zhì)校正曲線時(shí)的條件進(jìn)展控制，利用對(duì)照品峰面積、濃度及待檢測(cè)無的峰面積便可對(duì)樣品含量進(jìn)展計(jì)算。

2.1.3制備并處理樣品：甘草酸屬于白色粉末，在乙醇溶液中很容易溶解，同時(shí)也可以溶解于熱水中。所以可采用溶劑提取法提取甘草，分析影響提取效率的因素，包括提取溶劑的比例、物料比、提取方法、溶劑種類等，經(jīng)實(shí)驗(yàn)可知，在甘草酸溶解度方面，70%的乙醇溶液效果一般，而且具有較高本錢，在提取效果方面低于氨水，所以提取劑為0.3%氨水，樣品進(jìn)入前，通過針式過濾器將微粒雜質(zhì)去除【3】。介入聲場(chǎng)有助于甘草酸提取過程增加，而相比于其他方法，其比照效率更高。提取時(shí)間越長(zhǎng)，提取液中甘草酸含量越來越多，在提取時(shí)間在50分鐘以上，那么提取液中甘草酸含量越來越平穩(wěn)。

2.2線性關(guān)系試驗(yàn)。采用電子精細(xì)儀器稱取400L標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)流動(dòng)相定量稀釋的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別是0.001563，0.003125，0.00625，0.0125，0.025和0.05，基于上述色譜條件，進(jìn)樣20，將甘草酸峰面積記錄下來，橫坐標(biāo)為甘草酸濃度，縱坐標(biāo)為峰面積，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程如下：Y=247.17X+0.25，r=0.9991，1.5-50g/mL范圍內(nèi)，甘草酸線性關(guān)系良好。

2.3精細(xì)度實(shí)驗(yàn)。將甘草酸標(biāo)準(zhǔn)溶液視為樣本，根據(jù)以上色譜條件進(jìn)展連續(xù)6次重復(fù)進(jìn)樣，對(duì)甘草酸峰面積RSD值進(jìn)展計(jì)算，回歸方程為Y=247.17X+0.25，精細(xì)度為0.08%，r=0.9991；儀器具有良好的精細(xì)度。

2.4檢測(cè)樣品含量。采用電子精細(xì)天平稱取復(fù)方甘草片與甘草粉末，基于上述條件對(duì)樣品溶液進(jìn)展支配，檢測(cè)進(jìn)樣20L，定量方法為外標(biāo)法，甘草與復(fù)方甘草片中甘草酸平均含量分別是22.42mg/g和89.63mg/g。

3結(jié)論

總之，高效液相色譜法檢測(cè)甘草酸含量具有操作簡(jiǎn)單、方便、靈敏度高等特點(diǎn)，通過測(cè)量復(fù)方甘草片與甘草中的甘草酸含量，可有效控制甘草藥材質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

【1】閆濤,姜維,王琴會(huì),等.苦參堿和甘草酸的小腸吸收特性分析[J].中國(guó)藥師,2022,20(11):1906-1910

【2】裴勇.中藥制劑有效成分含量測(cè)定中高效液相色譜法的應(yīng)用分析[J].中國(guó)衛(wèi)消費(fèi)業(yè),202