血清中葡萄糖濃度的測定課件

血清葡萄糖濃度的測定（GOD-POD法）小組成員：石子濤習文盛世豪蔣勇實驗目的掌握酶法測定血清葡萄糖濃度的原理。掌握血糖變化的臨床生理意義。知識窗酶法分析是指用酶作為工具定量測定某種物質含量的分析方法。定量分析的目標可以是酶的底物，輔酶，也可以是酶的激活劑或抑制劑。

其分類如下：單酶反應定量法：指用一種酶為工具酶定量測定某種物質的方法。偶聯(lián)酶反應定量法：當單酶反應底物或產(chǎn)物反應底物或產(chǎn)物噢物理化學手段無法區(qū)分時，還可以借助另一種酶作為指示酶，通過偶聯(lián)反應進行定量分析。由于酶法檢測具有快速、漸變、準確、無不良反應、靈敏等優(yōu)點，現(xiàn)已逐步取代其他方法，在臨床診斷中應用廣泛。(詳見實驗教程P103-104)實驗器材與試劑（一）器材5ml移液管，50或100ul微量可調式移液器721E型分光光度計，37度恒溫水浴鍋（二）試劑（1）0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.0）：稱取無水磷酸二氫鈉8.67g,稱取無水磷酸二氫鉀5.3g，溶于蒸餾水800ml中，調節(jié)pH=7.0,定容至1L（2）酶試劑：取過氧化物酶12000U，葡萄糖氧化酶1200U,4-氨基安替比林10mg，疊氮化鈉100mg，溶入磷酸鹽緩沖液80ml中，用磷酸鹽緩沖液定容至100ml，置于4℃保存。（3）酚溶液：稱取重蒸餾酚100mg，溶入蒸餾水100ml中，用棕色瓶儲存。（4）酶酚混合試劑：將酶試劑及酚溶液等量混合，4可放一個月。（5）苯甲酸鈉溶液(12mmol/L)：稱取苯甲酸鈉1.6g，于800ml蒸餾水中加溫助溶，冷卻后加蒸餾水定容至1L。（6）葡萄糖標準儲存液（100mmol/L）：稱取已干燥至恒重的無水葡萄糖1.082g，溶入約70ml12mmol/L苯甲酸鈉溶液中定容至100ml。2h以后方可使用（7）葡萄糖標準工作液（5mmol/L）：吸取葡萄糖標準儲存液5.00ml，用12mmol/L苯甲酸鈉溶液稀釋至100ml。操作步驟取試管3支，按表操作

試劑/ml

空白管

標準管

測定管血清──0.020葡萄糖標準液─0.020─蒸餾水0.020──酶酚混合試劑3.003.003.00

混勻，置37℃水域中，保溫25min,在波長510nm比色處，以空白管調零，讀取標準管及測定管的吸光度血清中葡萄糖濃度的測定反應式

葡萄糖＋O2＋H2O葡萄糖酸+2H2O2

2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚紅色醌類化合物計算公式血清葡萄糖濃度=A測定/A標準*5mmol/l(根據(jù)朗伯-比爾定律:A＝klc)參考值：空腹血清葡萄糖濃度：3.89—6.11mmol/LGODPOD注意事項葡萄糖氧化酶對β-D-葡萄糖高度特異，溶液中的葡萄糖約36%α型，64%為β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的變旋反應。新配制的葡萄糖標準液主要是α型，故須放置2h以上，待變旋平衡后方可應用。（1）葡萄糖氧化酶法可直接用于測定腦脊液葡萄糖含量，但不能直接測定尿液葡萄糖含量。因為尿液中尿酸等干擾性物質濃度過高，可干擾氧化酶反應，造成結果假性偏低。（2）對于血液樣品需及時分離紅細胞因紅細胞的酵解將導致測定結果偏低，建議測定樣品以草酸鉀-氟化鈉為抗凝劑以抑制糖酵解。（取草酸鉀6g，氟化鈉4g，加水溶解至100ml，吸取0.1ml到試管內(nèi)，在80℃以下烤干使用，可使2到3ml血液在3到4天內(nèi)不凝固并抑制糖分解）（3）嚴重黃疸，溶血及乳糜樣血清應先制備無蛋白血濾液，然后在進行測定。（4