新狼毒素 B 對(duì)化膿性感染治療作用的研究

新狼毒素B對(duì)化膿性感染治療作用的研究〔〕:

摘要：目的探究新狼毒素B對(duì)由金黃色葡萄球菌引起的小鼠皮膚化膿性感染的治療作用，觀察其能否有效治療局部皮膚化膿性感染，為臨床治療提供科學(xué)根據(jù)。方法選取40只清潔級(jí)6～7周齡昆明小鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，建立40只由金黃色葡萄球菌引起的小鼠局部皮膚化膿感染模型，然后隨機(jī)分為新狼毒素B組、紅霉素組、魚(yú)石脂膏組及對(duì)照組，將上述藥物外敷于小鼠皮膚局部化膿處，連續(xù)給藥1周、1次/d，可根據(jù)局部感染范圍決定外敷用量，觀察一周內(nèi)化膿部位的皮膚變化。結(jié)果新狼毒素B對(duì)小鼠皮膚化膿性感染的治療效果明顯優(yōu)于魚(yú)石脂膏組〔P＜0.01〕及對(duì)照〔P＜0.01〕，與紅霉素組比擬差異不明顯〔P＞0.05〕。結(jié)論新狼毒素B對(duì)皮膚化膿性感染具有明顯治療效果。

關(guān)鍵詞：新狼毒素B；金黃色葡萄球菌；化膿性感染

本文引用格式：張書(shū)琳,范旭童,何愛(ài)玲,等.新狼毒素B對(duì)化膿性感染治療作用的研究[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2022,19(80):21-22.

TherapeuticEffectofNeochamaejasmineBonSuppurativeinfection

ZHANGShu-lin1,FANXu-tong1,HeAi-ling2,LIUWen-wen1,LIMing1*

(1.ShandongFirstMedicalUniversity,Tai'anShandong;2.LaboratoryofTaishansanatorium,Tai'anShandong)

ABSTRACT:ObjectiveToexplorethetherapeuticeffectofNeochamaejasmineBonskinsuppurativeinfectioninmicecausedbyStaphylococcusaureus,andtoobservewhetheritcaneffectivelytreatlocalskinsuppurativeinfection,soastoprovidescienti?cbasisforclinicaltreatment.MethodsFortyKunmingmiceaged6-7weekswereselectedandfedadaptivelyforoneweek.FortymicewithlocalskinpurulentinfectioncausedbyStaphylococcusaureuswereestablished.ThentheywererandomLydividedintoNeochamaejasmineBgroup,erythromycingroup,ichthyolgroupandcontrolgroup.Theamountofexternalapplicationwasdeterminedandtheskinchangesatthesuppurativesiteswereobservedwithinaweek.ResultsThetherapeuticeffectofNeochamaejasmineBwasbetterthanerythromycingroup(P＜0.05),ichthyolgroup(P＜0.05)andcontrolgroup(P＜0.01).ConclusionNeochamaejasmineBhasobvioustherapeuticeffectonskinsuppurativeinfection.

KEYWORDS:NeochamaejasmineB;Staphylococcusaureus;Suppurativeinfection

0引言

金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是社區(qū)及醫(yī)院皮膚化膿性感染的主要致病菌，皮膚局部化膿性感染是指局部皮膚、皮下組織及肌肉筋膜的化膿性感染，其傳播途徑主要為細(xì)菌侵入破損皮膚、黏膜后引起的皮膚軟組織感染。金黃色葡萄球菌是需氧或兼性厭氧型革蘭陽(yáng)性球菌的一種，廣泛分布在自然界和醫(yī)院環(huán)境中，金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生足夠數(shù)量的凝固酶和外毒素，致病性強(qiáng)。由金黃色葡萄球菌所引起的局部皮膚軟組織化膿性感染一般比擬嚴(yán)重，主要有癤、癰、膿疙瘡、毛囊炎、傷口感染、褥瘡感染等，有的患者可出現(xiàn)葡萄球菌菌血癥并伴有局部損害。

近年來(lái),隨著廣譜抗生素和免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用，金黃色葡萄球菌的耐藥性日益嚴(yán)重，特別是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)引起的化膿性感染的發(fā)病率越來(lái)越高，導(dǎo)致治療困難。利用中藥成分治療金黃色葡萄球菌感染逐漸在臨床上開(kāi)始應(yīng)用，瑞香狼毒作為一種中醫(yī)普遍入藥抑菌的中草藥而受到了關(guān)注。新狼毒素B(NeochajasmineB)是一種存在于瑞香狼毒根中的天然雙黃酮化合物，具有抗菌譜廣、抗菌才能強(qiáng)和抗菌靶點(diǎn)新穎的特點(diǎn)，研究報(bào)道該化合物對(duì)多種植物病原菌和動(dòng)物病原菌均具有良好的抑菌活性[1-2]。因其提取自中草藥，故藥效溫和且不易產(chǎn)生耐藥性，是一種理想的天然廣譜抗菌物質(zhì)。有研究說(shuō)明，新狼毒素B在體外實(shí)驗(yàn)中具有良好的抑制金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)的作用，但目前體內(nèi)實(shí)驗(yàn)尚未進(jìn)展。本工程通過(guò)建立小鼠金黃色葡萄球菌皮膚化膿性感染模型，觀察新狼毒素B局部外敷給藥后的治療效果，以期進(jìn)一步討論新狼毒素B對(duì)金黃色葡萄球菌的抗感染作用。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

安康昆明小鼠40只，6～7周齡，體重20～25g，小鼠為SPF級(jí)，由本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。飼養(yǎng)于獨(dú)立通風(fēng)換氣籠中，置于標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)條件〔溫度：20～25℃，濕度：50%～70%〕中。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究遵循國(guó)家制定的有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)和使用的指南，并經(jīng)山東第一醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.1.2試驗(yàn)菌株

金黃色葡萄球菌USA300為山東第一醫(yī)科大學(xué)微生物免疫實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.3藥物

新狼毒素B購(gòu)自武漢天植生物技術(shù)，紅霉素軟膏購(gòu)自辰欣佛都藥業(yè)〔汶上〕消費(fèi)，魚(yú)石脂膏購(gòu)自合肥億城實(shí)驗(yàn)儀器。

1.1.4主要試劑

0.9%生理鹽水購(gòu)自泰安普天科技，75%酒精購(gòu)自新鄉(xiāng)市新興生物科技，戊巴比妥鈉南京皇泰醫(yī)藥科技，靜脈留置針貼膜(3MTegadermFilmREF:1624W,USA)；無(wú)菌紗布；無(wú)菌膠布；皮膚打孔器〔直徑15mm打孔器〕均購(gòu)自河南磊創(chuàng)醫(yī)療器械商貿(mào)。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1小鼠化膿性感染模型的建立

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前對(duì)小鼠進(jìn)展稱(chēng)重記錄，1%的戊巴比妥鈉〔10mg/kg小鼠體重〕腹腔注射行麻醉處理。用小動(dòng)物剃毛刀于麻醉后小鼠背部備皮處理，并用生理鹽水洗凈擦干小鼠背部皮膚，以便后續(xù)傷口處貼膜固定。在完成脫毛處理后將小鼠背部朝上妥善固定于小動(dòng)物試驗(yàn)臺(tái)上，用75%酒精對(duì)小鼠背部進(jìn)展消毒處理，準(zhǔn)備手術(shù)。將打孔器與皮膚接觸頭進(jìn)展消毒，后在小鼠背部行皮膚打孔處理，過(guò)程中保證無(wú)菌，打孔深度到達(dá)破壞肌肉層為止。用無(wú)菌紗布或者棉簽擦拭傷口部位，以到達(dá)對(duì)傷口止血和去除傷口處血液。向小鼠傷口處滴加108CFU/mL金黃色葡萄球菌菌液100L。用留置針貼膜妥善封閉傷口處，確保貼膜可以與皮膚嚴(yán)密貼附，貼膜周?chē)门R床無(wú)菌膠布再次固定，確保細(xì)菌可以足夠時(shí)間的與傷口處組織接觸[3-4]。待小鼠麻醉清醒后將每只小鼠單獨(dú)置于獨(dú)立通氣飼養(yǎng)籠(IVC)中飼養(yǎng)，飼養(yǎng)過(guò)程中對(duì)小鼠的生存狀態(tài)、傷口感染變化情況等進(jìn)展觀察拍照記錄，直至傷口處明顯感染灶形成。

1.2.2試驗(yàn)分組

把制備的皮膚化膿性感染小鼠模型常規(guī)飼養(yǎng)，48h傷口處出現(xiàn)明顯化膿灶顯示造模成功。將40只小鼠局部化膿感染模型隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為新狼毒素B組、紅霉素組、魚(yú)石脂膏組及不用任何藥物的對(duì)照組。

1.2.3給藥方法

因新狼毒素B的水溶性差，為使其能很好的分散在外敷敷料中，選用DMSO做助溶劑。將新狼毒素B、紅霉素與魚(yú)石脂膏外敷于小鼠背部局部化膿感染處，根據(jù)局部感染范圍決定外敷藥量，連續(xù)給藥1周、1次/d。為防止小鼠舔舐，用藥后用透氣敷料保護(hù)傷口。

1.2.4觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

造模后觀察感染灶情況及小鼠精神狀況、進(jìn)食情況、反響速度等。療效斷定標(biāo)準(zhǔn)：1周內(nèi)膿栓脫落，膿液排出，傷口結(jié)痂，紅腫等炎癥完全消退為顯效；1周內(nèi)紅腫范圍縮小，仍有小膿栓，傷口未完全枯燥，炎癥未全消退為有效；1周內(nèi)病灶無(wú)明顯變化為無(wú)效。

1.2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)量資料采用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差〔s〕表示；使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)展統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料比擬采用方差分析(P＜0.05)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1皮膚化膿性感染模型的建立

于小鼠傷口處滴加108CFU/mL金黃色葡萄球菌懸液100L，造模成功率可達(dá)100%。建模24h后，小鼠精神狀態(tài)明顯變差，反響較慢，進(jìn)食和飲水減少。傷口在24h左右初步形成淡黃色膿胎，48h可以看到明顯的黃色膿胎形成，且感染傷口處較潮濕，局部小鼠傷口有黃色膿液流出。

2.2新狼毒素B的治療效果

新狼毒素B組顯效9只〔90%〕，有效1只〔10%〕，總有效率100%；紅霉素組顯效6只〔60%〕，有效3只〔30%〕，總有效率90%；魚(yú)石脂膏組顯效3只〔30%〕，有效4只〔40%〕，總有效率70%；對(duì)照組顯效0只〔0%〕，有效2只〔20%〕，總有效率20%，見(jiàn)表1。

3討論

皮膚局部化膿性感染是指局部皮膚、皮下組織及肌肉筋膜的化膿性感染，感染的起因常是機(jī)體自身防御才能遭破壞，病原菌由破損的皮膚、黏膜侵入所致，感染處皮膚紅腫、皮溫增高、壓痛、硬結(jié)、硬塊或向心性蔓延的紅痛條狀物，膿腫形成時(shí)局部有波動(dòng)感，甚至出現(xiàn)壞死、潰瘍及功能障礙【5】。金黃色葡萄球菌是引起局部化膿性感染最常見(jiàn)的細(xì)菌,金黃色葡萄球菌引起的感染也一直是我國(guó)醫(yī)院感染和社區(qū)感染的主要病原菌【6】。

近年來(lái),由于各種抗菌藥物的不合理使用，MRSA的檢出率逐年增加并呈現(xiàn)多重耐藥的趨勢(shì),給臨床治療帶來(lái)了極大的困難。利用中藥成分治療該菌感染可視為解決這一問(wèn)題的有效方法。瑞香狼毒,多年生草本植物,瑞香科,狼毒屬,生長(zhǎng)于溫帶地區(qū)【7】。瑞香狼毒化學(xué)成分復(fù)雜,目前研究的主要是該植物的黃酮類(lèi)、木脂素、香豆素、二萜等成分。瑞香狼毒具有多種藥理活性,如抗腫瘤活性、抗病毒活性、抗驚厥、抗癲癇活性以及抗菌活性等[8-9]?？赡芘c其散結(jié)逐瘀之成效有關(guān)，中醫(yī)普遍以狼毒入藥抑菌。新狼毒素B是一種存在于瑞香狼毒根中的天然雙黃酮化合物，有試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明該化合物對(duì)多種植物病原菌和動(dòng)物病原菌具有良好的抑菌活性，其抗菌譜廣、抗菌才能強(qiáng)和抗菌靶點(diǎn)新穎，是一種理想的天然廣譜抗菌物質(zhì)。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用新狼毒素B治療小鼠局部皮膚化膿感染獲得了明顯效果。我們采用皮膚局部化膿性感染最常見(jiàn)的致病菌金黃色葡萄球菌作為致病菌，建立小鼠皮膚局部化膿性感染模型，將新狼毒素B外敷用藥，證實(shí)新狼毒素B對(duì)皮膚化膿性感染具有良好的治療效果。結(jié)果說(shuō)明新狼毒素B治療效果明顯優(yōu)于魚(yú)石脂膏組〔P＜0.01〕及對(duì)照組〔P＜0.01〕，與紅霉素組比擬差異不明顯〔P＞0.05)說(shuō)明新狼毒素B能有效地控制皮膚化膿性感染，可作為治療皮膚化膿性感染的有效藥物之一，臨床可以試用[10]。

參考文獻(xiàn)

【1】李福華.新狼毒素B的抑菌活性構(gòu)效關(guān)系研究IV[D].陜西:西北農(nóng)林科技大學(xué),2022.

【2】李曉惠,項(xiàng)勛,唐曉萍,等.瑞香狼毒研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,202