微囊藻毒素MC酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書

微囊藻毒素(MC)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。使用目的：本試劑盒用于測定相關(guān)液體樣本中微囊藻毒素(MC)的含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競爭法測定標(biāo)本中微囊藻毒素(MC)水平。用純化的微囊藻毒素(MC)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入微囊藻毒素(MC)，和HRP標(biāo)記的微囊藻毒素(MC)抗原，使它們競爭結(jié)合，，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的微囊藻毒素(MC)的含量呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中微囊藻毒素(MC)的含量。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品S1（800ng/L）0.5ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶標(biāo)準(zhǔn)品S2（400ng/L）0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條標(biāo)準(zhǔn)品S3（200ng/L）0.5ml×1瓶4顯色劑A液6ml×1瓶標(biāo)準(zhǔn)品S4（100ng/L）0.5ml×1瓶5顯色劑B液6ml×1瓶標(biāo)準(zhǔn)品S5（50ng/L）0.5ml×1瓶6終止液6ml×1/瓶9說明書1份7樣品稀釋液6ml×1/瓶10封板膜2張標(biāo)本要求1．標(biāo)本處理：（1）水樣采集后經(jīng)-20℃反復(fù)凍融三次，再經(jīng)玻璃纖維過濾后，備查（2）組織樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70V：V：V)抽提，或按相關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，備查2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。微囊藻毒素(MC)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書操作步驟1.加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加50微升，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。2.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色215分鐘.7.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。8.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請(qǐng)避光保存。7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。