實驗四 微生物平板菌落計數(shù)法_第1頁
實驗四 微生物平板菌落計數(shù)法_第2頁
實驗四 微生物平板菌落計數(shù)法_第3頁
實驗四 微生物平板菌落計數(shù)法_第4頁
實驗四 微生物平板菌落計數(shù)法_第5頁
已閱讀5頁,還剩4頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

實驗四微生物平板菌落計數(shù)法實驗四微生物平板菌落計數(shù)法實驗四微生物平板菌落計數(shù)法V:1.0精細整理,僅供參考實驗四微生物平板菌落計數(shù)法日期:20xx年X月實驗四微生物平板菌落計數(shù)法一、實驗目的學習并掌握平板菌落計數(shù)的基本原理和方法。二、實驗原理平板菌落計數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當稀釋之后,其中的微生物充分分散成單個細胞,取一定量的稀釋樣液接種到平板上,經(jīng)過培養(yǎng),由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落,即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞。統(tǒng)計菌落數(shù),根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。但是,由于待測樣品往往不易完全分散成單個細胞,所以,長成的一個單菌落也可能來自樣品中的2~3或更多個細胞。因此平板菌落計數(shù)的結果往往偏低,為了清楚地闡述平板菌落計數(shù)的結果,現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(cfu)而不以絕對菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量。平板菌落計數(shù)法雖然操作較繁,結果需要培養(yǎng)一段時間才能取得,而且測定結果易受多種因素的影響,但是該計數(shù)方法的最大優(yōu)點是可以獲得活菌的信息,所以被廣泛用于生物制品檢驗(如活菌制劑),以及食品、飲料和水(包括水源水)等的含菌指數(shù)或污染程度的檢測。三、實驗器材1.菌種:酵母菌。2.培養(yǎng)基:YEB培養(yǎng)基。3.儀器或其他用具:1ml無菌吸管,無菌平皿,盛有4.5ml無菌水的試管,試管架,恒溫培養(yǎng)箱等。四、實驗步驟1.編號取無菌平皿9套,分別用記號筆標明10-4、10-5、10-6(稀釋度)各2套,另取6支盛有4.5ml無菌水的試管,依次標是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。2.稀釋用1ml無菌吸管吸取1ml已充分混勻的大腸桿菌菌懸液(待測樣品),精確地放0.5ml至10-1的試管中,此即為10倍稀釋。將多余的菌液放回原菌液中。將10-1試管置試管振蕩器上振蕩,使菌液充分混勻。另取一支1ml吸管插入10-1試管中來回吹吸菌懸液三次,進一步將菌體分散、混勻。吹吸菌液時不要太猛太快,吸時吸管伸入管底,吹時離開液面,以免將吸管中的過濾棉花浸濕或使試管內液體外溢。用此吸管吸取10-1菌液1ml,精確地放0.5ml至10-2試管中,此即為100倍稀釋?!ぁぁぁぁぁて溆嘁来晤愅?。放菌液時吸管不要碰到液面,即每一支吸管只能接觸一個稀釋度的菌懸液,否則稀釋不精確,結果誤差較大。3.倒平板法:1)取樣。用三支1ml無菌吸管分別吸取10-4、10-5和10-6的稀釋菌懸液各1ml,對號放入編好號的無菌平皿中,每個平皿放0.2ml。不要用1ml吸管每次只靠吸管尖部吸0.2ml稀釋菌液放入平皿中,這樣容易加大同一稀釋度幾個重復平板間的操作誤差。2)倒平板。盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45℃左右的LB培養(yǎng)基約15毫升/平皿,置水平位置迅速旋動平皿,使培養(yǎng)基與菌液混合均勻,而又不使培養(yǎng)基蕩出平皿或濺到平皿蓋上。由于細菌易吸附到玻璃器皿表面,所以菌液加入到培養(yǎng)皿后,應盡快倒入融化并已冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基,立即搖勻,否則細菌將不易分散或長成的菌落連在一起,影響計數(shù)。3)待培養(yǎng)基凝固后,將平板倒置于4.涂布法:涂抹平板計數(shù)法與倒平板法基本相同,所不同的是先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無菌平板中,待凝固后編號,然后用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上(每個編號設三個重復)。再用無菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻(圖22-3),每個稀釋度用一個滅菌刮鏟,更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度涂抹時,也可以不更換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上20—30min,使菌液滲透入培養(yǎng)基內,然后將平板倒轉,保溫培養(yǎng),至長出菌落后即可計數(shù)。5.計數(shù)培養(yǎng)48h后,取出培養(yǎng)平板,算出同一稀釋度三個平板上的菌落平均數(shù),并按下列公式進行計算:每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×5一般選擇每個平板上長有30~300個菌落的稀釋度計算每毫升的含菌量較為合適,同一稀釋度的三個重復對照的菌落數(shù)不應相差很大,否則表示試驗不精確。實際工作中同一稀釋度重復三個對照平板不能少于三個,這樣便于數(shù)據(jù)統(tǒng)計,減少誤差。由10-4、10-5和10-6三個稀釋度計算出的每毫升菌液中菌落形成單位數(shù)也不應相差太大。平板菌落計數(shù)法,所選擇倒平板的稀釋度是很重要的,一般三個連續(xù)稀釋度中的第二個稀釋度倒平板培養(yǎng)后,所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個左右為好,否則要適當增加或減少稀釋度加以調整。五、實驗結果將培養(yǎng)后菌落計數(shù)結果填入下表:稀釋度10-410-510-6123平均123平均123平均Cfu數(shù)/平板

每毫升中的cfu數(shù)

六、思考題(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃(2)要使平板菌落計數(shù)準確,需要掌握哪幾個關鍵為什么

(3)試比較平板菌落計數(shù)

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論