二、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(上傳)課件

歡迎您的光臨！植物細(xì)胞雜交技術(shù)

的過(guò)程是怎樣的？提問(wèn)？植物體細(xì)胞雜交過(guò)程示意圖植物A細(xì)胞植物B細(xì)胞去壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合融合體再生壁雜種細(xì)胞愈傷組織雜種植株細(xì)胞融合植物組織培養(yǎng)1.為什么滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑？

2.不滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑嗎？思考題：滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程：滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面

滅活的病毒使細(xì)胞膜上蛋白質(zhì)和脂質(zhì)重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)被融合細(xì)胞的細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞

滅活的病毒使細(xì)胞膜上蛋白質(zhì)和脂質(zhì)重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)生物種類(lèi)細(xì)胞來(lái)源成功年代酵母菌—雞原生質(zhì)體—血紅細(xì)胞1975年人—胡蘿卜腹水癌細(xì)胞—原生質(zhì)體1976年人—小鼠纖維肉瘤細(xì)胞—畸胎瘤細(xì)胞1978年動(dòng)物細(xì)胞融合已成功的實(shí)例思考題：

1.傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方法及缺陷是什么？

2.B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體有何特點(diǎn)？要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的B淋巴細(xì)胞結(jié)論：探索原因：動(dòng)物體內(nèi)經(jīng)免疫反應(yīng)產(chǎn)生的抗體可多達(dá)百萬(wàn)種以上每一個(gè)B細(xì)胞只分泌一種特異性抗體新難題：在體外培養(yǎng)條件下，一個(gè)B淋巴細(xì)胞是不可能無(wú)限增殖的制備單克隆抗體的技術(shù)獲新技術(shù)：將淋巴B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，進(jìn)而獲得大量特異性強(qiáng)的抗體奇思妙想：難題：醫(yī)療實(shí)踐中遇到的難題抗體的特異性差獲得大量抗體困難純度低制備單克隆抗體新技術(shù)的獲得過(guò)程：制備單克隆抗體流程圖獲取B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選

雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)、篩選產(chǎn)生特定抗體雜交瘤細(xì)胞大量單克隆抗體生產(chǎn)抗體步驟：

怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞？

怎樣獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞？選擇培養(yǎng)基篩選法：

1.HAT培養(yǎng)基：H（Hypoxanthine）:次黃嘌呤。A（Aminopterin）：氨基喋呤；葉酸拮抗物，阻斷DNA合成主要途徑。T(Thymidine)：胸腺嘧啶核苷；“核苷酸前體”，供細(xì)胞通過(guò)替代途徑合成DNA。2.HAT選擇作用：

淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞：不能生長(zhǎng)，都會(huì)死亡。

雜交瘤細(xì)胞:不會(huì)死亡、都能生長(zhǎng)。

常用“有限稀釋法”來(lái)選擇：將雜交瘤細(xì)胞稀釋?zhuān)枚嗫准?xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每個(gè)孔細(xì)胞不超過(guò)一個(gè)，通過(guò)培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體，那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔。陽(yáng)性孔中的細(xì)胞還不能保證是來(lái)自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽(yáng)性孔中的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋?zhuān)敝链_信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。

怎樣利用雜交瘤細(xì)胞來(lái)生產(chǎn)抗體？制備單克隆抗體流程動(dòng)物免疫分離脾細(xì)胞制備骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合HAT培養(yǎng)基選擇雜交瘤細(xì)胞陽(yáng)性孔克隆化并擴(kuò)大培養(yǎng)再次克隆克隆擴(kuò)大培養(yǎng)擴(kuò)大培養(yǎng)收集上清液動(dòng)物接種收集腹水單克隆抗體純化保存ELISA測(cè)血清單克隆抗體的概念：

通過(guò)用單個(gè)的雜交瘤細(xì)胞克隆形成細(xì)胞群，由這些細(xì)胞產(chǎn)生出化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體，即為單克隆抗體。單克隆抗體的有關(guān)應(yīng)用

⑴作為診斷試劑：

準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)，與抗原的特異性結(jié)合具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的特點(diǎn)。⑵用于治療疾病和運(yùn)載藥物：

主要用于治療癌癥。單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。二、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體（一）動(dòng)物細(xì)胞融合（二）單克隆抗體1.概念