多聚酶鏈式反應(yīng)擴增DNA課件全解 人教課標版

課題2多聚酶鏈式反應(yīng)擴增DNA片段課題21自學(xué)提綱：知識回顧：1.DNA分子的結(jié)構(gòu)（外側(cè)、內(nèi)側(cè)、基本單位）；2.DNA復(fù)制過程和特點；3.PCR技術(shù)概念及應(yīng)用?；靖拍睿鹤冃浴?fù)性、TaqDNA聚合酶、引物理解PCR技術(shù)的原理掌握PCR技術(shù)的全過程比較PCR技術(shù)和體內(nèi)DNA復(fù)制的異同點。自學(xué)提綱：知識回顧：21、DNA分子的3’端與5’端-OH端為3’;磷酸基團的末端為5’。2、DNA分子由兩條反向平行的脫氧核苷酸鏈根據(jù)堿基互補配對原則形成氫鍵連接而成。1、DNA分子的3’端與5’端3解旋酶DNA母鏈4種脫氧核苷酸DNA聚合酶引物（RNA）打開DNA雙鏈模板合成子鏈原料催化子鏈合成使DNA聚合酶能從引物3’端開始連接脫氧核苷酸

思考：3、體內(nèi)DNA復(fù)制的條件是什么？體外擴增DNA如何提供相似環(huán)境？變性（80-100℃

）Taq聚合酶（耐高溫）15—30個核苷酸構(gòu)成DNA或RNA解旋酶DNA母鏈4種脫氧核苷酸DNA聚合酶引物（RNA）打4DNA雙鏈單鏈變性（加熱80-100℃

）復(fù)性（緩慢冷卻）4、DNA分子的熱變性原理：變性的目的：復(fù)性的目的：解開雙鏈有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ與兩條單鏈的結(jié)合DNA雙鏈單鏈變性（加熱80-100℃）復(fù)性（緩慢冷卻）45一、PCR技術(shù)的原理利用DNA分子的熱變性原理，通過控制溫度來控制雙鏈的解聚與結(jié)合，從而完成體外DAN分子的擴增。體外DNA復(fù)制的條件：

四種脫氧核苷酸、耐高溫的聚合酶、引物、模板；緩沖溶液和嚴格控制溫度的溫控設(shè)備。復(fù)制的方向：子鏈的5’端向3’端延伸。一、PCR技術(shù)的原理利用DNA分子的熱變性原理，通過控6二、PCR的反應(yīng)過程每個循環(huán)包括：變性——復(fù)性——延伸

從第二輪循環(huán)開始，上一次循環(huán)的產(chǎn)物也可以作為模板參與反應(yīng)，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA單鏈會與引物Ⅱ結(jié)合，進行DNA的延伸，這樣，DNA聚合酶只能特異性地復(fù)制處于兩個引物之間的DNA序列，使這段固定長度的序列呈指數(shù)擴增。二、PCR的反應(yīng)過程每個循環(huán)包括：變性——復(fù)性——延伸7三、實驗步驟：準備好PCR反應(yīng)體系的配方用微量移液器按配方在往微量離心管中加入各組分蓋嚴蓋子，用手指輕輕彈擊管壁混合反應(yīng)液離心10分鐘將離心管放入PCR儀上，設(shè)置好循環(huán)程序進行反應(yīng)三、實驗步驟：準備好PCR反應(yīng)體系的配方用微量移液器按配方在8注意事項：詳見操作提示

四、結(jié)果分析與評價DNA含量的測定：稀釋→對照調(diào)零→測定→計算（公式見P63）波長260nm處讀數(shù)蒸餾水做對照50倍注意事項：詳見操作提示四、結(jié)果分析與評價DNA含量的測定9PCR技術(shù)與體內(nèi)DNA復(fù)制的區(qū)別：1.PCR不需要解旋酶；體內(nèi)DNA復(fù)制需要；2.PCR需要耐熱的DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶），而生物體內(nèi)的聚合酶在高溫時會變性；3.PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，而生物體內(nèi)DNA復(fù)制需要生物體自身的復(fù)制。PCR技術(shù)與體內(nèi)DNA復(fù)制的區(qū)別：1.PCR不需10練習(xí)鞏固1、關(guān)于PCR技術(shù)的應(yīng)用，錯誤的一項是A古生物學(xué)、刑偵破案、DNA序列測定B診斷遺傳疾病、基因克隆、古生物學(xué)CDNA序列測定、基因克隆、刑偵破案‘D診斷遺傳疾病、合成核苷酸、DNA序列測定練習(xí)鞏固1、關(guān)于PCR技術(shù)的應(yīng)用，錯誤的一項是112、DNA的合成方向總是從子鏈的哪一端向哪一端延伸？3、PCR技術(shù)最突出的優(yōu)點是A原理簡單B原料易找CTaqDNA聚合酶有耐熱性D快速、高效、靈活、易于操作2、DNA的合成方向總是從子鏈的哪一端向哪一端延伸？3、PC124、做PCR使用的微量離心管、槍頭、緩沖液及蒸餾水使用前必須進行的關(guān)鍵步驟是A反復(fù)洗滌B不怕外源DNA污染C高壓滅菌D在—20℃儲存4、做PCR使用的微量離心管、槍頭、緩沖液及蒸餾水使用前必須133.下列關(guān)于“觀察洋蔥根尖細胞有絲分裂”實驗的敘述，正確的是A.通過觀察細胞內(nèi)染色體的行為判斷細胞所處的時期B.裝片的制作流程是：解離染色→漂洗→制片C.顯微鏡下觀察到處于有絲分裂中期的細胞最多D.顯微鏡下觀察到的分生區(qū)細胞呈正方形，細胞繼續(xù)分裂【答案】A【解析】有絲分裂不同時期，染色體的行為不同，所以可以通過觀察細胞內(nèi)染色體的行為判斷細胞所處的時期，A正確；觀察洋蔥根尖細胞有絲分裂過程中，裝片的制作過程為：解離、漂洗、染色、制片，B錯誤；有絲分裂過程中，分裂間期占有的時間最長，所以顯微鏡下觀察到處于有絲分裂間期的細胞最多，C錯誤；觀察洋蔥根尖細胞有絲分裂實驗中，解離步驟細胞已經(jīng)被殺死，所以不可能看見細胞繼續(xù)分裂，D錯誤。4.下列關(guān)于“細胞大小與物質(zhì)運輸?shù)年P(guān)系”實驗的敘述，錯誤的是A.實驗的材料和試劑可用馬鈴薯小方塊和藍墨水替代B.NaOH在體積不同的瓊脂塊內(nèi)擴散的速率相同C.瓊脂塊的表面積與體積之比隨著瓊脂塊的增大而增大D.NaOH擴散的體積與整個瓊脂塊的體積之比隨著瓊脂塊的增大而減小【答案】C【解析】在“細胞大小與物質(zhì)運輸?shù)年P(guān)系”實驗中，可以用藍墨水代表進入細胞的物質(zhì)，馬鈴薯小方塊代表細胞，A正確；NaOH在體積不同的瓊脂塊內(nèi)擴散的速率相同，B正確；瓊脂塊的表面積與體積之比隨著瓊脂塊的增大而減小，C錯誤；由于NaOH在瓊脂塊中的擴散速度是一定的，因此NaOH擴散的體積與整個瓊脂塊的體積之比，隨著瓊脂塊的增大而減小，D正確。5.下列關(guān)于細胞分化、衰老、凋亡和癌變的敘述，正確的是A.存在血紅蛋白的細胞一定是已經(jīng)分化的細胞B.衰老細胞內(nèi)酶的活性都降低，細胞核的體積減小C.細胞凋亡是各種不利因素引起的細胞損傷和死亡D.細胞癌變是致癌因子誘發(fā)正常基因突變成原癌基因和抑癌基因【答案】A【解析】血紅蛋白存在于哺乳動物成熟的紅細胞中，該細胞已經(jīng)高度分化，A正確；衰老細胞內(nèi)大多數(shù)酶的活性都降低，細胞核的體積增大，B錯誤；細胞凋亡是基因控制的程序性死亡，而各種不利因素引起的細胞損傷和死亡屬于細胞壞死，C錯誤；細胞癌變是致癌因子誘導(dǎo)原癌基因和抑癌基因發(fā)生基因突變的結(jié)果，D錯誤。6.下列關(guān)于細胞全能性的敘述，錯誤的是3.下列關(guān)于“觀察洋蔥根尖細胞有絲分裂”實驗的敘述，正確的14課題2多聚酶鏈式反應(yīng)擴增DNA片段課題215自學(xué)提綱：知識回顧：1.DNA分子的結(jié)構(gòu)（外側(cè)、內(nèi)側(cè)、基本單位）；2.DNA復(fù)制過程和特點；3.PCR技術(shù)概念及應(yīng)用。基本概念：變性、復(fù)性、TaqDNA聚合酶、引物理解PCR技術(shù)的原理掌握PCR技術(shù)的全過程比較PCR技術(shù)和體內(nèi)DNA復(fù)制的異同點。自學(xué)提綱：知識回顧：161、DNA分子的3’端與5’端-OH端為3’;磷酸基團的末端為5’。2、DNA分子由兩條反向平行的脫氧核苷酸鏈根據(jù)堿基互補配對原則形成氫鍵連接而成。1、DNA分子的3’端與5’端17解旋酶DNA母鏈4種脫氧核苷酸DNA聚合酶引物（RNA）打開DNA雙鏈模板合成子鏈原料催化子鏈合成使DNA聚合酶能從引物3’端開始連接脫氧核苷酸

思考：3、體內(nèi)DNA復(fù)制的條件是什么？體外擴增DNA如何提供相似環(huán)境？變性（80-100℃

）Taq聚合酶（耐高溫）15—30個核苷酸構(gòu)成DNA或RNA解旋酶DNA母鏈4種脫氧核苷酸DNA聚合酶引物（RNA）打18DNA雙鏈單鏈變性（加熱80-100℃

）復(fù)性（緩慢冷卻）4、DNA分子的熱變性原理：變性的目的：復(fù)性的目的：解開雙鏈有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ與兩條單鏈的結(jié)合DNA雙鏈單鏈變性（加熱80-100℃）復(fù)性（緩慢冷卻）419一、PCR技術(shù)的原理利用DNA分子的熱變性原理，通過控制溫度來控制雙鏈的解聚與結(jié)合，從而完成體外DAN分子的擴增。體外DNA復(fù)制的條件：

四種脫氧核苷酸、耐高溫的聚合酶、引物、模板；緩沖溶液和嚴格控制溫度的溫控設(shè)備。復(fù)制的方向：子鏈的5’端向3’端延伸。一、PCR技術(shù)的原理利用DNA分子的熱變性原理，通過控20二、PCR的反應(yīng)過程每個循環(huán)包括：變性——復(fù)性——延伸

從第二輪循環(huán)開始，上一次循環(huán)的產(chǎn)物也可以作為模板參與反應(yīng)，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA單鏈會與引物Ⅱ結(jié)合，進行DNA的延伸，這樣，DNA聚合酶只能特異性地復(fù)制處于兩個引物之間的DNA序列，使這段固定長度的序列呈指數(shù)擴增。二、PCR的反應(yīng)過程每個循環(huán)包括：變性——復(fù)性——延伸21三、實驗步驟：準備好PCR反應(yīng)體系的配方用微量移液器按配方在往微量離心管中加入各組分蓋嚴蓋子，用手指輕輕彈擊管壁混合反應(yīng)液離心10分鐘將離心管放入PCR儀上，設(shè)置好循環(huán)程序進行反應(yīng)三、實驗步驟：準備好PCR反應(yīng)體系的配方用微量移液器按配方在22注意事項：詳見操作提示

四、結(jié)果分析與評價DNA含量的測定：稀釋→對照調(diào)零→測定→計算（公式見P63）波長260nm處讀數(shù)蒸餾水做對照50倍注意事項：詳見操作提示四、結(jié)果分析與評價DNA含量的測定23PCR技術(shù)與體內(nèi)DNA復(fù)制的區(qū)別：1.PCR不需要解旋酶；體內(nèi)DNA復(fù)制需要；2.PCR需要耐熱的DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶），而生物體內(nèi)的聚合酶在高溫時會變性；3.PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，而生物體內(nèi)DNA復(fù)制需要生物體自身的復(fù)制。PCR技術(shù)與體內(nèi)DNA復(fù)制的區(qū)別：1.PCR不需24練習(xí)鞏固1、關(guān)于PCR技術(shù)的應(yīng)用，錯誤的一項是A古生物學(xué)、刑偵破案、DNA序列測定B診斷遺傳疾病、基因克隆、古生物學(xué)CDNA序列測定、基因克隆、刑偵破案‘D診斷遺傳疾病、合成核苷酸、DNA序列測定練習(xí)鞏固1、關(guān)于PCR技術(shù)的應(yīng)用，錯誤的一項是252、DNA的合成方向總是從子鏈的哪一端向哪一端延伸？3、PCR技術(shù)最突出的優(yōu)點是A原理簡單B原料易找CTaqDNA聚合酶有耐熱性D快速、高效、靈活、易于操作2、DNA的合成方向總是從子鏈的哪一端向哪一端延伸？3、PC264、做PCR使用的微量離心管、槍頭、緩沖液及蒸餾水使用前必須進行的關(guān)鍵步驟是A反復(fù)洗滌B不怕外源DNA污染C高壓滅菌D在—20℃儲存4、做PCR使用的微量離心管、槍頭、緩沖液及蒸餾水使用前必須273.下列關(guān)于“觀察洋蔥根尖細胞有絲分裂”實驗的敘述，正確的是A.通過觀察細胞內(nèi)染色體的行為判斷細胞所處的時期B.裝片的制作流程是：解離染色→漂洗→制片C.顯微鏡下觀察到處于有絲分裂中期的細胞最多D.顯微鏡下觀察到的分生區(qū)細胞呈正方形，細胞繼續(xù)分裂【答案】A【解析】有絲分裂不同時期，染色體的行為不同，所以可以通過觀察細胞內(nèi)染色體的行為判斷細胞所處的時期，A正確；觀察洋蔥根尖細胞有絲分裂過程中，裝片的制作過程為：解離、漂洗、染色、制片，B錯誤；有絲分裂過程中，分裂間期占有的時間最長，所以顯微鏡下觀察到處于有絲分裂間期的細胞最多，C錯誤；觀察洋蔥根尖細胞有絲分裂實驗中，解離步驟細胞已經(jīng)被殺死，所以不可能看見細胞繼續(xù)分裂，D錯誤。4.下列關(guān)于“細胞大小與物質(zhì)運輸?shù)年P(guān)系”實驗的敘述，錯誤的是A.實驗的材料和試劑可用馬鈴薯小方塊和藍墨水替代B.NaOH在體積不同的瓊脂塊內(nèi)擴散的速率相同C.瓊脂塊的表面積與體積之比隨著瓊脂塊的增大而增大D.NaOH擴散的體積與整個瓊脂塊的體積之比隨著瓊脂塊的增大而減小【答案】C【解析】在“細胞大小與物質(zhì)運輸?shù)年P(guān)系”實驗中，可以用藍墨水代表進入細胞的物質(zhì)，馬鈴薯小方塊代表細胞，A正確；NaOH在體積不同的瓊脂塊內(nèi)擴散的速率相同，B正確；瓊脂塊的表面積與體積之比隨著瓊脂塊的增大而減小，C錯誤；由于NaOH在瓊脂塊中的擴散速度是一定的，因此NaOH擴散的體積與整個瓊脂塊的體積之比，隨著瓊脂塊的增大而減小，D正確。5.下列關(guān)于細胞分化、衰老、凋亡和癌變的敘述，正確的是A.存在血紅蛋白的細胞一定是已經(jīng)分化的細胞B.衰老細