DB15T 2504-2022羊胃腸道線蟲耐驅(qū)蟲藥的測定-糞便蟲卵減少試驗

ICS65.020.30CCSICS65.020.30CCSB41內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)DB15/T2504—2022羊胃腸道線蟲耐驅(qū)蟲藥的測定——糞便蟲卵減少試驗TestmethodofanthelminticresistanceingastrointestinalTestmethodofanthelminticresistanceingastrointestinalnematodesofsheepandgoat（faecaleggcountreductiontest）2022-01-252022-02-25內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)布前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由內(nèi)蒙古畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（SAM/TC19）歸口。羊胃腸道線蟲耐驅(qū)蟲藥的測定--糞便蟲卵減少試驗范圍本文件規(guī)定了臨床檢測和評價羊胃腸道線蟲對驅(qū)蟲藥耐藥性的糞便蟲卵減少試驗。本文件適用于臨床檢測和評價不同飼養(yǎng)條件下羊胃腸道線蟲對驅(qū)蟲藥的耐藥性。（GB/T19526羊寄生蟲病防治技術(shù)規(guī)范胃腸道線蟲gastrointestinalnematode寄生于羊胃腸道內(nèi)的線蟲。驅(qū)蟲藥anthelmintics用于防治羊胃腸道寄生線蟲感染所使用的化學(xué)制劑或藥物。胃腸道線蟲gastrointestinalnematode寄生于羊胃腸道內(nèi)的線蟲。驅(qū)蟲藥anthelmintics用于防治羊胃腸道寄生線蟲感染所使用的化學(xué)制劑或藥物。敏感sensitivity寄生蟲種群對某一驅(qū)蟲藥物的耐受量低于常規(guī)劑量。中介intermediary寄生蟲種群中部分群體對某一驅(qū)蟲藥物的耐受量超過了常規(guī)劑量。耐藥resistance寄生蟲種群對某一驅(qū)蟲藥物的耐受量超過了常規(guī)劑量，且可以遺傳。糞便蟲卵減少試驗faecaleggcountreductiontest通過檢測用藥前后動物糞便中寄生蟲蟲卵數(shù)來評價胃腸道線蟲對某一驅(qū)蟲藥耐藥性的試驗?？思S便蟲卵數(shù)eggspergramoffeces（EPG）1g糞便中某種寄生蟲蟲卵的數(shù)目，是用來表示感染強(qiáng)度的指標(biāo)。原理95%置信域綜試驗動物及分組8周內(nèi)未驅(qū)蟲且EPG不小于300的羊只。依據(jù)糞便蟲卵數(shù)或者隨機(jī)將試驗動物分成對照組和不同藥物試驗組，每組15只羊。試驗藥品GB/T19526相應(yīng)部分的規(guī)定執(zhí)行。5g0A7dEB斯特蟲卵計數(shù)法按照附錄CEPG。采用EXCELEPG95敏感試驗組糞便蟲卵減少率大于95%且95%的置信域下限大于90%。中介以下兩種情況視為羊胃腸道線蟲對驅(qū)蟲藥存在疑似耐藥，即中介。959590%。959590%。耐藥試驗組糞便蟲卵減少率小于95%且95%的置信域下限小于90%。附錄A（規(guī)范性）不同類驅(qū)蟲藥第二次采樣時間常用驅(qū)蟲藥類型及耐藥性檢測中第二次采樣時間見表A.1。表A.1常用驅(qū)蟲藥類型及耐藥性檢測中第二次采樣時間驅(qū)蟲藥類型有效成份劑量第二次采樣時間咪唑并噻唑類鹽酸左旋咪唑7.5mg/kg；內(nèi)服3d～7d苯并咪唑類阿苯達(dá)唑10-15mg/kg；內(nèi)服8d～10d大環(huán)內(nèi)酯類伊維菌素0.2mg/kg；皮下注射10d～14d水楊酸類氯氰碘柳胺鈉5-10mg/kg；皮下或肌肉3d～7d附錄B（）40向沸水中加入蔗糖顆粒并不斷攪拌，直至不再溶解。冷卻后，加入適量石炭酸以阻止霉菌生長。取2mL甲醛溶于98mL純凈水中。mL與等體積飽和蔗糖水混勻于凹玻片中，同時加蓋蓋玻片，做兩個重復(fù)。觀察靜置15min后，通過顯微鏡計數(shù)兩個室內(nèi)的蟲卵（注意計數(shù)位于暗區(qū)邊緣的蟲卵），并記錄。統(tǒng)計將兩個計數(shù)室的蟲卵數(shù)取平均值，乘以100，可得到EPG。2于100mL30mL（115mL）mL與等體積飽和蔗糖水混勻于凹玻片中，同時加蓋蓋玻片，做兩個重復(fù)。觀察靜置15min后，通過顯微鏡計數(shù)兩個室內(nèi)的蟲卵（注意計數(shù)位于暗區(qū)邊緣的蟲卵），并記錄。統(tǒng)計將兩個計數(shù)室的蟲卵數(shù)取平均值，乘以100，可得到EPG。附錄C（規(guī)范性）改良麥克馬斯特蟲卵計數(shù)法普通光學(xué)顯微鏡、麥克馬斯特蟲卵計數(shù)板、天平、燒杯、鑷子、量筒、40目篩網(wǎng)、吸管、熱水壺、食用鹽、純凈水。取400g食用鹽溶于1000mL煮沸的純凈水中，充分?jǐn)嚢瑁鋮s后使用。取新鮮糞便樣品2g于100mL燒杯中，加入58mL飽和食鹽水并用鑷子將糞便壓碎、攪拌均勻，用40目篩網(wǎng)過濾，將濾液攪拌混勻后，用吸管立即吸取中心處的液體于麥克馬斯特蟲卵計數(shù)板的計數(shù)室內(nèi)。觀察：靜置2min后，通過顯微鏡計數(shù)兩個計數(shù)室內(nèi)的蟲卵，并記錄。C.3.3統(tǒng)計：C.3.3統(tǒng)計：將兩個計數(shù)室的蟲卵數(shù)取平均值，乘以200，可得到EPG。附錄D（）FECRR(Xt/Xc)]% （D.1）式中：FECRR——試驗組驅(qū)蟲后糞便蟲卵減少率；Xt ——Xc ——（） S2[ X2( X)2/n]/(n i j ij j ij i i （D.2）式中：iS2——（）；ij——組內(nèi)每一只羊；Xij——對照組或試驗組驅(qū)蟲后，組內(nèi)每只羊的克糞便蟲卵數(shù)（EPG）；ni——試驗組或?qū)φ战M組內(nèi)動物數(shù)。Y2Y2 2 2 2 2St/(ntXt)Sc/(ncXc) （D.3）式中：Y2——（nt——各試驗組組內(nèi)試驗動物數(shù)；nc——對照組組內(nèi)動物數(shù)。95……（D.4）式中：Xt——Xc——Y2——試驗組驅(qū)蟲后克糞便平均蟲卵數(shù)減少的方差（對數(shù)級別）。附錄E（資料性）羊常見胃腸道線蟲蟲卵特征羊常見胃腸道線蟲蟲卵特征見表E.1。表E.1羊常見胃腸道線蟲蟲卵特征蟲種名稱寄生部位蟲體大小(mm)蟲卵圖譜形態(tài)描述長徑(μm)輻徑(μm)綿羊毛首線蟲Trichurisovis盲腸♂50.0～80.0♀35.0～70.0蟲卵腰鼓形，黃褐色，兩端具塞。70～8030～40奧利春細(xì)頸線蟲Nematodirusoiratianus小腸♂9.0～12.0♀12.0～16.0蟲卵很大，卵內(nèi)細(xì)胞色黑較大。255～272119～153蒙古馬歇爾線蟲Marshallagiamongolica皺胃♂10.7～14.0♀12.3～16.8集。182～21783～115捻轉(zhuǎn)血矛線蟲Hcemonchuscontortus皺胃♂18.0～22.0♀18.0～30.0蟲卵橢圓形，卵殼略帶黃色。66～9543～46環(huán)紋奧斯特線蟲Ostertagiacircumcincta皺胃♂7.5～12.0♀10.3～12.8型的圓線蟲類蟲卵。89～9546～59表E.1羊常見胃腸道線蟲蟲卵特征（續(xù)）蟲種名稱寄生部位蟲體大小(mm)蟲卵圖譜形態(tài)描述長徑(μm)輻徑(μm)葉氏古柏線蟲Cooperiaerschovi皺胃小腸胰臟♂4.7～11.1♀8.8～11.4蟲卵橢圓形。67～7322～41蛇形毛圓線蟲Trichostrongyluscolubriformis小腸♂4.5～5.0♀5.0～6.0蟲卵橢圓形。73～7640～43羊仰口線蟲Bunostomumtrigonocephalum小腸♂12.0～17.0♀19.0～26.0顆粒。82～9747～57哥倫比亞食道口線蟲Oesophagostomumcolumb