八膽紅素測(cè)定(范玉平)課件

實(shí)驗(yàn)八膽紅素測(cè)定(改良J–G法)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

掌握總膽紅素和直接膽紅素(改良J-G法)的測(cè)定原理，參考值范圍，注意事項(xiàng)。膽紅素測(cè)定作用反映肝臟的分泌與排泄功能。膽紅素的分類（1）未結(jié)合膽紅素(Bu)：未與葡萄糖醛酸基結(jié)合，具親脂性，須加入加速劑破壞分子內(nèi)部的氫鍵后才能與重氮試劑反應(yīng)，又稱間接膽紅素。占總膽紅素的4/5。膽紅素的分類（2）結(jié)合膽紅素(Bc)：與葡萄糖醛酸基結(jié)合，具親水性，與重氮試劑直接反應(yīng)，又稱直接膽紅素。占總膽紅素的1/5。黃疸分類根據(jù)總膽紅素的濃度隱性黃疸:總膽紅素17.1~34.2μmol/L。顯性黃疸:總膽紅素大于34.2μmol/L。注：TB17.1μmol/L(2mg/dL)黃疸分類根據(jù)造成黃疸的原因(1)溶血性黃疸(2)肝細(xì)胞性黃疸(3)阻塞性黃疸測(cè)定方法重氮鹽法膽紅素氧化酶（BOD)法高效液相色譜法（HPLC)導(dǎo)數(shù)分光光度法直接分光光度法釩酸鹽法TB測(cè)定原理(改良J-G法)

血清中的結(jié)合膽紅素在強(qiáng)酸環(huán)境中與重氮對(duì)氨基苯磺酸反應(yīng),生成有色偶氮膽紅素,非結(jié)合膽紅素在表面活性劑的作用下,也能進(jìn)行這樣的反應(yīng),通過550nm比色,計(jì)算其含量。強(qiáng)調(diào)兩項(xiàng)目分開測(cè)定，利于時(shí)間控制。DBi操作

空白管標(biāo)準(zhǔn)管樣本管工作試劑(ml）2.52.52.537℃孵育5分鐘蒸餾水(ml）0.05----標(biāo)準(zhǔn)液(ml）--0.05--樣本(ml)----0.05混勻，37℃孵育5分鐘，550nm,空白管調(diào)0，讀取標(biāo)準(zhǔn)管和樣本管的吸光度。TB操作

空白管標(biāo)準(zhǔn)管樣本管工作試劑(ml）2.52.52.537℃孵育5分鐘蒸餾水(ml）0.05----標(biāo)準(zhǔn)液(ml）--0.05--樣本(ml)----0.05混勻，37℃孵育10分鐘，550nm,空白管調(diào)0，讀取標(biāo)準(zhǔn)管和樣本管的吸光度。

計(jì)算方法

DBi濃度（umol/L)=A樣/A標(biāo)×DBi標(biāo)準(zhǔn)液濃度

TB濃度（umol/L)=A樣/A標(biāo)×TB標(biāo)準(zhǔn)液濃度國(guó)際單位換算：umol/L×0.0585=mg/dL參考范圍

成人直接膽紅素：0—6umol/L(0--0.3mg/dL)成人總膽紅素：2--20umol/L(0.1—1.2mg/dL)新生兒總膽紅素：20--200umol/L(1.2—12mg/dL)方法評(píng)價(jià)在重氮試劑法中，改良J-G法有好的靈敏度，抗干擾能力較好。臨床意義（1）黃疸及鑒別DBi/TB比值<20%溶血性黃疸比值40%~60%肝細(xì)胞性