細(xì)胞融合和單克隆抗體制備

關(guān)于細(xì)胞融合和單克隆抗體制備第1頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五考綱要求2.2.2細(xì)胞融合與單克隆抗體

細(xì)胞融合與單克隆抗體

ⅡⅠ：對所列知識點要知道其含義，能夠在試題所給予的相對簡單的情境中識別和使用它們。Ⅱ：理解所列知識和其他相關(guān)知識之間的聯(lián)系和區(qū)別，并能在較復(fù)雜的情境中綜合運用其進(jìn)行分析、判斷、推理和評價。第2頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五回顧：1、抗體的化學(xué)本質(zhì)？2、抗體由什么細(xì)胞產(chǎn)生？

抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。B淋巴細(xì)胞（漿細(xì)胞）產(chǎn)生抗體。第3頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五小資料：2010年全球治療用單克隆抗體藥物的銷售總額達(dá)到440億美元，如果加上100億美元的單抗診斷和研究試劑，單抗藥物的市場總量達(dá)到550億美元。2011年單抗藥物的市場總量已經(jīng)達(dá)到628億美元。到2015年，全球單克隆抗體藥銷售額達(dá)980億美元。我國的單克隆抗體藥物從無到有，并且在我國醫(yī)藥市場發(fā)揮越來越重要的作用。目前我國單抗市場規(guī)模每年以50%以上的速度遞增。

準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)，并與特異性結(jié)合，可以起到診斷、治療疾病的效果。第4頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五—把某種抗原反復(fù)注射到動物體內(nèi)，然后從動物血清中分離出所需抗體。漿細(xì)胞—產(chǎn)量低，純度低，且抗體的特異性差?；仡欝w液免疫過程思考1：傳統(tǒng)的生產(chǎn)抗體方法是？思考2：用該方法生產(chǎn)抗體有什么缺點？第5頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五1個B細(xì)胞

B細(xì)胞群

大量專一抗體1.克隆單一的B淋巴細(xì)胞，形成B細(xì)胞群，需要用到什么技術(shù)？2.對B細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)可行嗎？為什么？3.哪種細(xì)胞可以大量增殖呢？4.如何獲得既能產(chǎn)生專一抗體，又能無限增殖的細(xì)胞呢？如何制備純度高、特異性強的抗體呢？只能分泌一種特異性抗體設(shè)計方案1：單克隆抗體：由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度專一、僅針對某一特定抗原的抗體。

第6頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)誘導(dǎo)細(xì)胞融合需要什么技術(shù)？骨髓瘤細(xì)胞

+一種特定B細(xì)胞大量的化學(xué)性質(zhì)單一的抗體設(shè)計方案2：既能分泌抗體又能無限增殖第7頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五細(xì)胞膜的流動性滅活病毒、PEG、電激等誘導(dǎo)的手段？原理？動物細(xì)胞融合融合成功的標(biāo)志：細(xì)胞核融合第8頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合的比較比較項目植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合融合原理融合的方法誘導(dǎo)方法用途細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性去壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒獲得雜種植株制備單克隆抗體第9頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五單克隆抗體的制備第10頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五注射抗原B細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合注射抗原的目的是什么？單克隆抗體的制備誘導(dǎo)產(chǎn)生相應(yīng)的效應(yīng)B細(xì)胞第11頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五誘導(dǎo)細(xì)胞融合后，培養(yǎng)基中有幾類細(xì)胞？B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞—B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞—骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞—骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞（雜交瘤細(xì)胞）單克隆抗體的制備注射抗原B細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合第12頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五雜交瘤細(xì)胞資料分析1：細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。B淋巴細(xì)胞中有這兩條DNA合成途徑，但體外培養(yǎng)時一般不會分裂增殖。鼠骨髓瘤細(xì)胞中沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。多種雜交瘤細(xì)胞思考：請根據(jù)資料設(shè)計方案選出雜交瘤細(xì)胞。選出雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生同一種抗體嗎？為什么？方案：選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)（即加入氨基嘌呤）

結(jié)果：雜交瘤細(xì)胞第13頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五24孔板資料分析2：（1）多孔細(xì)胞培養(yǎng)板：將細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋后，轉(zhuǎn)移到多孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，使每孔細(xì)胞不超過一個，通過培養(yǎng)讓其增殖。（2）抗體能夠特異性識別抗原并與之結(jié)合。思考：請根據(jù)資料設(shè)計方案選出能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞。方法：克隆化培養(yǎng)+抗體檢測結(jié)果：能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞第14頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五多種雜交瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基

篩選1專一抗體檢驗陽性克隆化培養(yǎng)

篩選2單克隆抗體的制備產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞歸納提升：制備單克隆抗體過程中兩次篩選的方法、目的？第15頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五多種雜交瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基

篩選1專一抗體檢驗陽性克隆化培養(yǎng)單克隆抗體

篩選2培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的方法有哪兩種？單克隆抗體的制備特異性強，靈敏度高，并可大量制備。產(chǎn)生專一性抗體的雜交瘤細(xì)胞第16頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五1、作為診斷試劑2、用于治療疾病和運載藥物準(zhǔn)確、高效、簡易、快速把抗癌細(xì)胞的單克隆抗體與藥物相結(jié)合，制成“生物導(dǎo)彈”。應(yīng)用主要有：單克隆抗體的制備“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物（如同位素標(biāo)記單克隆抗體，可診斷腫瘤、心血管畸形等）第17頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五構(gòu)建概念模型1.完成學(xué)案中單克隆抗體的制備過程流程圖分組展示第18頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五1.背誦記憶以下問題，同位間相互檢測（1）為何要給小鼠注射抗原？獲取的B淋巴細(xì)胞只有一種嗎？（2）制備單克隆抗體時，為什么要選用B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？（3）如何誘導(dǎo)誘導(dǎo)細(xì)胞融合？細(xì)胞融合后，培養(yǎng)基中有幾類細(xì)胞？（4）單克隆抗體的制備過程中兩次篩選方法、目的分別是什么

？（5）雜交瘤細(xì)胞的特點？單克隆抗體的優(yōu)點？（6）雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)方法有哪兩種？（7）制備過程采用了哪些動物細(xì)胞工程技術(shù)手段？（8）單克隆抗體的應(yīng)用？記憶整合第19頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五思考：1.本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理2.為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？

雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體3.兩次篩選的方法和目的？（1）用選擇性培養(yǎng)基，選出多種雜交瘤細(xì)胞；（2）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，選出能產(chǎn)生特定（單一或相應(yīng)）抗體的雜交瘤細(xì)胞。4.單克隆抗體的優(yōu)點特異性強，靈敏度高、可以大量制備第20頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五鞏固訓(xùn)練1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是A.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞

C.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞D.沒經(jīng)過免疫的Ｂ淋巴細(xì)胞A2.動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是A.誘導(dǎo)融合的方法完全相同B.所用的技術(shù)手段基本相同C.操作步驟基本相同D.都能形成雜種細(xì)胞D3.單克隆抗體制備過程中培育的雜交細(xì)胞是A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合B.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成C.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成D.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成D第21頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五變式訓(xùn)練1、完成步步高243頁第2題2.單克隆抗體的特點是特異性強、靈敏度高、可以大量制備，已被廣泛應(yīng)用于疾病的診斷和治療。用H7N9病毒制備單克隆抗體的流程如下圖所示：第22頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五2014?新課標(biāo)Ⅰ，40某研究者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測定各小鼠血清抗體的效價(能檢測出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù))，結(jié)果如下圖所示。若要制備雜交瘤細(xì)胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞(染色體數(shù)目為40條)，并將該細(xì)胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞(染色體數(shù)目為60條)按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞。體驗高考1、完成步步高244頁第3題第23頁，共26頁，2022年，5月20日，19點17分，星期五回答下列問題：(1)制備融合所需的B淋巴細(xì)胞時，所用免疫小鼠的血清抗體效價需達(dá)到16000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過___次免疫后才能有符合要求的。達(dá)到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細(xì)胞的是__小鼠，理由是______。(2)細(xì)胞融合實驗完成后，融合體系中除含有未融合的細(xì)胞和雜交廇細(xì)胞外，還含有_____________________________，體系中出現(xiàn)多種類型細(xì)胞的原因是___________。(3)雜交瘤細(xì)胞中有__個細(xì)胞核，染色體數(shù)目最多是____條。(4)未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是_____________。第24頁，共26頁，2022年，5月20日，19