轉(zhuǎn)基因食品檢測技術(shù)概要課件

轉(zhuǎn)基因食品檢測技術(shù)廈門食品科技研發(fā)檢測中心轉(zhuǎn)基因食品檢測技術(shù)廈門食品科技研發(fā)檢測中心黃金大米(右)與普通大米(左)的比較。黃金大米(英語:GoldenRice)是一種轉(zhuǎn)基因稻米品種，由美國先正達種子公司參與研發(fā)。1.關(guān)于轉(zhuǎn)基因作物安全性的爭論黃金大米(右)與普通大米(左)的比較。黃金大米(英語:Gol17日，在武漢舉行的全球轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物發(fā)展現(xiàn)狀和未來展望國際研討會上，來自中國、美國、巴西等10個國家的19位生物技術(shù)科學家聯(lián)名發(fā)表“八點共識”，支持轉(zhuǎn)基因技術(shù)用于農(nóng)作物種植以確保農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展，呼吁包括中國在內(nèi)的多個國家，依法推進轉(zhuǎn)基因作物的產(chǎn)業(yè)化。

2008年，美國塔夫茨大學研究人員在湖南省衡南縣江口鎮(zhèn)中心小學25名兒童中，開展了“黃金大米”烹制米飯的人體試驗。

央視記者武漢轉(zhuǎn)基因水稻調(diào)查：隨機買5袋米3袋有轉(zhuǎn)基因農(nóng)業(yè)部官員：18年來無一起轉(zhuǎn)基因食品安全問題中國暫停轉(zhuǎn)基因大豆進口審批因是接受度低1.1你會接受GMF嗎？？17日，在武漢舉行的全球轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物發(fā)展現(xiàn)狀和未來展望國際研2.主要的轉(zhuǎn)基因上市公司2.主要的轉(zhuǎn)基因上市公司4轉(zhuǎn)基因食品檢測技術(shù)概要課件5轉(zhuǎn)基因食品檢測技術(shù)概要課件63.

轉(zhuǎn)基因食品的檢測方法檢測主要從兩個方面入手一是核酸水平，即檢測遺傳物質(zhì)中是否含有插入的外源基因

二是蛋白質(zhì)水平，即通過插入外源基因表達的蛋白質(zhì)產(chǎn)物或其功能進行檢測，或者是檢測插入外源基因?qū)d體基因表達的影響

3.轉(zhuǎn)基因食品的檢測方法檢測主要從兩一是核酸水平，即檢測遺73.1核酸水平

此種方法主要檢測報告基因、啟動子和終止子，是當前轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測的重要手段。核酸水平檢測3.1.2定性檢測3.1.3定量檢測3.1核酸水平此種方法主要檢測報告基因、啟動子83.1.2定性檢測聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)

每一次實驗均需要設(shè)有陰性及陽性對照以確保實驗結(jié)果可靠性。在樣品采集及處理過程中也需要注意防止污染。以特定的基因片段(DNA片斷)為模板,利用人工合成的一對寡聚核苷酸為引物,以4種脫氧核苷酸(dNTP)為底物,在耐高溫聚合酶的作用下,通過DNA模板的變性、退火及引物的延伸3個階段的多次循環(huán),使模板擴增。轉(zhuǎn)基因細胞轉(zhuǎn)入的基因成分一般包括啟動子(Promotor)、報告基因(ReporterGene)、目的基因(TargetGene)、終止子(Terminator),其中啟動子和終止子為表達目的基因所必需的[13]。至今,轉(zhuǎn)基因植物常用的是花椰菜花葉病毒啟動子(CaMV35S)和根癌農(nóng)桿菌終止子(NOS)。通過PCR擴增這些特殊的啟動子和終止子序列,是目前最常用的鑒定食品中有無轉(zhuǎn)基因成分的方法。聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)

3.1.2定性檢測聚合酶鏈式每一次實驗均需要設(shè)有陰性及陽性對9核酸印記法(southernblot)

以放射性或熒光標記的外源目的基因的同源序列作為探針與該食品原料農(nóng)產(chǎn)品的總DNA進行雜交。首先用限制酶消化受體總DNA，通過瓊脂糖凝膠電泳按大小分離所得的片斷，隨后使DNA在原位發(fā)生變性，并從凝膠轉(zhuǎn)移至一固相支持體上。DNA轉(zhuǎn)移至固相支持體的過程中，各個DNA片斷的相對位置保持不變，用放射性或熒光標記的探針與各個DNA片斷雜交，經(jīng)放射自顯影確定與探針互補的電泳條帶的位置。核酸印記法技術(shù)用于食品外源基因的檢測可檢測出外源基因與內(nèi)源基因有高度同源性的DNA片斷，且準確可靠，但對樣品的純度要求較高，費用也較高。核酸印記法(southernblot)以放射性或熒光標記103.1.3定量檢測定量檢測生物傳感器(Bio-sensor)技術(shù)基因芯片(Microar-ray)技術(shù)多重熒光PCR實時熒光定量PCR(Real-timeFluorescenceQuantitativePCR)

競爭性PCR

PCR—ELISA定量3.1.3定量檢測定量檢測生物傳感器(Bio基因芯片(Mic11基因芯片技術(shù)具有PCR方法的相同優(yōu)點，可以精確地進行GMO的定性檢測。不同之處為可在固體表面固定上千個特定的探針，能夠一次單獨分析樣品中的大量的不同種類的GMO，進行篩查、定性、定量，具有高通量、集成化和自動化的特點。此外，微陣列技術(shù)非常靈活，當有新的GMO出現(xiàn)時可以在陣列中增加布點，將新的基因序列包括在篩查程序中。

基因芯片技術(shù)具有PCR方法的相同優(yōu)點，可以精確地進行GMO12生物傳感器技術(shù)

生物傳感器(biosensor)對生物物質(zhì)敏感并將其濃度轉(zhuǎn)換為電信號進行檢測的儀器。是由固定化的生物敏感材料作識別元件（包括酶、抗體、抗原、微生物、細胞、組織、核酸等生物活性物質(zhì)）與適當?shù)睦砘瘬Q能器（如氧電極、光敏管、場效應(yīng)管、壓電晶體等等）及信號放大裝置構(gòu)成的分析工具或系統(tǒng)。生物傳感器具有接受器與轉(zhuǎn)換器的功能。生物傳感器技術(shù)生物傳感器(biosensor)對生物物質(zhì)敏133.2蛋白質(zhì)水平蛋白質(zhì)水平檢測蛋白質(zhì)印跡法(Westernblot):將電泳較高的分離能力、抗體的特異性和顯色酶反應(yīng)的靈敏性結(jié)合起來,是檢測復(fù)雜混合物中特異蛋白質(zhì)最有力的工具之一,普遍用于分離、檢測特異的目的蛋白質(zhì)

酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)試紙法：主要將特異的抗體交聯(lián)到試紙條上和有顏色的物質(zhì)上,當紙上抗體和特異抗原結(jié)合后,再和帶有顏色的特異抗體進行反應(yīng),就形成了帶有顏色的三明治機構(gòu),并且固定在試紙條上,如果沒有抗原,則沒有顏色。3.2蛋白質(zhì)水平蛋白質(zhì)水平檢測蛋白質(zhì)印跡法(Western143.2.1酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)3.2.1酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)153.2.2ELISA的各種試驗方法3.2.2ELISA的各種試驗方法163.2.3雙抗夾心法的試驗原理3.2.3雙抗夾心法的試驗原理174.發(fā)展趨勢（1）加工轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品DNA提取技術(shù)不成熟，缺乏檢驗機構(gòu)急需的成品試劑盒，因此真正切實可行的檢測體系并沒有建立起來；

（2）從事轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測的實驗室缺乏內(nèi)部質(zhì)量控制機制；

（3）與國際接軌、高靈敏度、低成本的檢驗方法尚未形成。目前應(yīng)用較多的兩種方法：PCR檢測技術(shù)和ELISA檢測技術(shù)。總結(jié)

轉(zhuǎn)基因食品的檢測方法多種多樣，各有其優(yōu)缺點。在實際的檢測中，并非任何一種檢測方法對某種轉(zhuǎn)基因食品的檢測都行之有效。應(yīng)該根據(jù)食品種類和加工類型的不同，以及食品中可能含有的轉(zhuǎn)基因片段的不同，選擇最有效的檢測方法。同時，現(xiàn)有的檢測方法也在不斷的改進中，隨著各國有關(guān)轉(zhuǎn)基因成分標簽法的建立和不斷完善，對轉(zhuǎn)基因成分的準確定量檢測顯得日趨重要。這就要求，轉(zhuǎn)基因食品的檢測方法向著高質(zhì)量、高靈敏度、高準確性、自動化和低成本的方向發(fā)展。4.發(fā)展趨勢（1）加工轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品DNA提取技術(shù)不成熟，缺乏18謝謝謝謝轉(zhuǎn)基因食品檢測技術(shù)廈門食品科技研發(fā)檢測中心轉(zhuǎn)基因食品檢測技術(shù)廈門食品科技研發(fā)檢測中心黃金大米(右)與普通大米(左)的比較。黃金大米(英語:GoldenRice)是一種轉(zhuǎn)基因稻米品種，由美國先正達種子公司參與研發(fā)。1.關(guān)于轉(zhuǎn)基因作物安全性的爭論黃金大米(右)與普通大米(左)的比較。黃金大米(英語:Gol17日，在武漢舉行的全球轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物發(fā)展現(xiàn)狀和未來展望國際研討會上，來自中國、美國、巴西等10個國家的19位生物技術(shù)科學家聯(lián)名發(fā)表“八點共識”，支持轉(zhuǎn)基因技術(shù)用于農(nóng)作物種植以確保農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展，呼吁包括中國在內(nèi)的多個國家，依法推進轉(zhuǎn)基因作物的產(chǎn)業(yè)化。

2008年，美國塔夫茨大學研究人員在湖南省衡南縣江口鎮(zhèn)中心小學25名兒童中，開展了“黃金大米”烹制米飯的人體試驗。

央視記者武漢轉(zhuǎn)基因水稻調(diào)查：隨機買5袋米3袋有轉(zhuǎn)基因農(nóng)業(yè)部官員：18年來無一起轉(zhuǎn)基因食品安全問題中國暫停轉(zhuǎn)基因大豆進口審批因是接受度低1.1你會接受GMF嗎？？17日，在武漢舉行的全球轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物發(fā)展現(xiàn)狀和未來展望國際研2.主要的轉(zhuǎn)基因上市公司2.主要的轉(zhuǎn)基因上市公司23轉(zhuǎn)基因食品檢測技術(shù)概要課件24轉(zhuǎn)基因食品檢測技術(shù)概要課件253.

轉(zhuǎn)基因食品的檢測方法檢測主要從兩個方面入手一是核酸水平，即檢測遺傳物質(zhì)中是否含有插入的外源基因

二是蛋白質(zhì)水平，即通過插入外源基因表達的蛋白質(zhì)產(chǎn)物或其功能進行檢測，或者是檢測插入外源基因?qū)d體基因表達的影響

3.轉(zhuǎn)基因食品的檢測方法檢測主要從兩一是核酸水平，即檢測遺263.1核酸水平

此種方法主要檢測報告基因、啟動子和終止子，是當前轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測的重要手段。核酸水平檢測3.1.2定性檢測3.1.3定量檢測3.1核酸水平此種方法主要檢測報告基因、啟動子273.1.2定性檢測聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)

每一次實驗均需要設(shè)有陰性及陽性對照以確保實驗結(jié)果可靠性。在樣品采集及處理過程中也需要注意防止污染。以特定的基因片段(DNA片斷)為模板,利用人工合成的一對寡聚核苷酸為引物,以4種脫氧核苷酸(dNTP)為底物,在耐高溫聚合酶的作用下,通過DNA模板的變性、退火及引物的延伸3個階段的多次循環(huán),使模板擴增。轉(zhuǎn)基因細胞轉(zhuǎn)入的基因成分一般包括啟動子(Promotor)、報告基因(ReporterGene)、目的基因(TargetGene)、終止子(Terminator),其中啟動子和終止子為表達目的基因所必需的[13]。至今,轉(zhuǎn)基因植物常用的是花椰菜花葉病毒啟動子(CaMV35S)和根癌農(nóng)桿菌終止子(NOS)。通過PCR擴增這些特殊的啟動子和終止子序列,是目前最常用的鑒定食品中有無轉(zhuǎn)基因成分的方法。聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)

3.1.2定性檢測聚合酶鏈式每一次實驗均需要設(shè)有陰性及陽性對28核酸印記法(southernblot)

以放射性或熒光標記的外源目的基因的同源序列作為探針與該食品原料農(nóng)產(chǎn)品的總DNA進行雜交。首先用限制酶消化受體總DNA，通過瓊脂糖凝膠電泳按大小分離所得的片斷，隨后使DNA在原位發(fā)生變性，并從凝膠轉(zhuǎn)移至一固相支持體上。DNA轉(zhuǎn)移至固相支持體的過程中，各個DNA片斷的相對位置保持不變，用放射性或熒光標記的探針與各個DNA片斷雜交，經(jīng)放射自顯影確定與探針互補的電泳條帶的位置。核酸印記法技術(shù)用于食品外源基因的檢測可檢測出外源基因與內(nèi)源基因有高度同源性的DNA片斷，且準確可靠，但對樣品的純度要求較高，費用也較高。核酸印記法(southernblot)以放射性或熒光標記293.1.3定量檢測定量檢測生物傳感器(Bio-sensor)技術(shù)基因芯片(Microar-ray)技術(shù)多重熒光PCR實時熒光定量PCR(Real-timeFluorescenceQuantitativePCR)

競爭性PCR

PCR—ELISA定量3.1.3定量檢測定量檢測生物傳感器(Bio基因芯片(Mic30基因芯片技術(shù)具有PCR方法的相同優(yōu)點，可以精確地進行GMO的定性檢測。不同之處為可在固體表面固定上千個特定的探針，能夠一次單獨分析樣品中的大量的不同種類的GMO，進行篩查、定性、定量，具有高通量、集成化和自動化的特點。此外，微陣列技術(shù)非常靈活，當有新的GMO出現(xiàn)時可以在陣列中增加布點，將新的基因序列包括在篩查程序中。

基因芯片技術(shù)具有PCR方法的相同優(yōu)點，可以精確地進行GMO31生物傳感器技術(shù)

生物傳感器(biosensor)對生物物質(zhì)敏感并將其濃度轉(zhuǎn)換為電信號進行檢測的儀器。是由固定化的生物敏感材料作識別元件（包括酶、抗體、抗原、微生物、細胞、組織、核酸等生物活性物質(zhì)）與適當?shù)睦砘瘬Q能器（如氧電極、光敏管、場效應(yīng)管、壓電晶體等等）及信號放大裝置構(gòu)成的分析工具或系統(tǒng)。生物傳感器具有接受器與轉(zhuǎn)換器的功能。生物傳感器技術(shù)生物傳感器(biosensor)對生物物質(zhì)敏323.2蛋白質(zhì)水平蛋白質(zhì)水平檢測蛋白質(zhì)印跡法(Westernblot):將電泳較高的分離能力、抗體的特異性和顯色酶反應(yīng)的靈敏性結(jié)合起來,是檢測復(fù)雜混合物中特異蛋白質(zhì)最有力的工具之一,普遍用于分離、檢測特異的目的蛋白質(zhì)

酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)試紙法：主要將特異的抗體交聯(lián)到試紙條上和有顏色的物質(zhì)上,當紙上抗體和特異抗原結(jié)合后,再和帶有顏色的特異抗體進行反應(yīng),就形成了帶有顏