動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)與模擬腫瘤接種

《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)》實(shí)驗(yàn)課實(shí)驗(yàn)一大、小鼠給藥、采血、麻醉和解剖實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握大小鼠常用給藥方法和采血技術(shù)2.掌握大小鼠的麻醉方法和解剖步驟3.熟悉大小鼠的解剖結(jié)構(gòu)一、小鼠的抓取和固定抓取小鼠時(shí)動(dòng)作要迅速，要輕防止被小鼠轉(zhuǎn)過(guò)頭咬，抓其頸后皮膚要多如果被咬，應(yīng)立即擠

液，清水沖洗二、大鼠的抓取與固定三、小鼠灌胃（給藥方法之一）將實(shí)驗(yàn)小鼠徒手固定灌胃針從嘴角處 腔內(nèi)，緊貼咽后壁

食道（1ml注射器，深度大約為3cm）推動(dòng)針管給藥（生理鹽水）注意不要

氣管，不要抓的太緊以致小鼠窒息最大灌胃量：小鼠1ml;大鼠：8ml!四、小鼠尾靜脈注射（給藥方法之二）固定器固定小鼠尾部，擴(kuò)張血管，左右兩側(cè)的靜脈將尾巴成一個(gè)適宜注射的角度，1ml注射器平行向心方向刺入靜脈血管干棉球

止血注意排除氣泡注射點(diǎn)由尾部遠(yuǎn)端尾靜脈六、大小鼠手術(shù)麻醉腹腔麻醉：進(jìn)針點(diǎn)為右下腹腔，進(jìn)針角度為與身體成45度，深度約1cm。麻醉劑：

為3.5%水合氯醛，劑量按小鼠體重0.1ml/10g，20g的小鼠為0.2ml。七、大、小鼠心臟采血右下腹腔麻醉（ 為3.5%水合氯醛，劑量按0.1ml/10g)待其麻醉后，仰臥位固定在解剖板上胸骨左側(cè)，腋窩平行線(xiàn)下2-3肋骨間，小鼠心搏動(dòng)最強(qiáng)處斜行刺入（1ml注射器）緩慢 針管采血取血量多時(shí)采用（同樣適用于大鼠）安全采血量：小鼠1ml;大鼠：8ml!大鼠心臟采血八、大體解剖觀察及繪圖按0.1ml/10g體重，將SD大鼠用3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉。腹部朝上固定于解剖板。用10cm剪刀從下腹部向上剪開(kāi)皮膚，打開(kāi)腹腔，觀察腹腔內(nèi)臟器，觀察大鼠肝臟時(shí)特別注意大鼠無(wú)膽囊。用14cm剪刀打開(kāi)胸腔，觀察胸腔臟器。根據(jù)大體解剖所見(jiàn)，繪圖。解剖觀察操作項(xiàng)目小鼠：灌胃、尾靜脈注射、眼底靜脈叢采血；心臟采血*、麻醉后解剖觀察*。大鼠：灌胃*、腹腔注射麻醉、心臟采血、麻醉后解剖觀察?！夺t(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)》實(shí)驗(yàn)課實(shí)驗(yàn)二模擬腫瘤（組織塊）移植鼠與正常小鼠免疫 的比較一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私?小鼠和KM小鼠的胸腔結(jié)構(gòu)了解正常的胸腺結(jié)構(gòu)與不增殖胸腺基的形態(tài)掌握正確的胸腺摘除方式掌握組織塊（腫瘤）皮下移植的基本技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理哺乳動(dòng)物的胸腺是T淋巴細(xì)胞分化成 場(chǎng)所，而T淋巴細(xì)胞是參與宿主對(duì)異體的組織或細(xì)胞排斥的主要成分，發(fā)育，因此，鼠胸腺的原基從第三咽囊起不能鼠囊狀很小的胸腺殘基保持

。胸腺的不增殖導(dǎo)致成

T淋巴細(xì)胞數(shù)大量減少，其結(jié)果是 鼠機(jī)體不能排斥同種異體和異種間的組織 移植。人類(lèi)的腫瘤能在 鼠的體內(nèi)生長(zhǎng)，使 鼠作為一種疾病模型的載體，廣泛地運(yùn)用于研究人類(lèi)移植性腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。三、影響被移植的動(dòng)物組織或細(xì)胞成活的因素組織的相容性宿主對(duì)移植物的供體組織或細(xì)胞的活性其他因素四、模擬移植物的選擇較好、

較強(qiáng)腎臟組織——是哺乳動(dòng)物中的組織五、實(shí)驗(yàn)步驟

1(麻醉解剖小鼠）鼠和KM小鼠腹腔按0.1ml/10g體重分別對(duì)注射3.5%水合氯醛。待小鼠麻醉后，腹部朝上固定于小鼠固定板上。以3%碘酒棉球和75%

棉球?qū)M小鼠進(jìn)行皮膚 ；同時(shí)，對(duì)

鼠腋部進(jìn)行

。用直頭剪刀于KM小鼠生殖口上端切一小口，沿腹部?jī)蓚?cè)作弧型切開(kāi)，直至胸膈肌根部。小鼠的抓取和固定實(shí)驗(yàn)步驟2(觀察胸腺)觀察膈肌形狀后，于兩側(cè)根部分別切一小口，將膈肌橫向切開(kāi)，絞斷肋骨，直至鎖骨，然后掀起胸骨，

整個(gè)胸腔。直視心臟，在心臟的上部，主動(dòng)脈弓處，有兩片乳白色蝴蝶狀的小片，即為胸腺。實(shí)驗(yàn)步驟3（臟組織）用圓頭鑷將腸道撥

側(cè)，

腎臟。用眼科剪刀取下腎臟，剝?nèi)ツI包膜，放入盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中。用剪刀將腎臟分解為若干2×3mm組織小塊，取邊緣整齊、色澤紅潤(rùn)為佳。將一小塊腎組織放入套筒針內(nèi)備用。實(shí)驗(yàn)步驟4（組織移植）選取組織的目標(biāo)區(qū)域，常用區(qū)域?yàn)槔邆?cè)（近腋窩處）。實(shí)驗(yàn)步驟4（組織移植）在離目標(biāo)區(qū)域中心點(diǎn)1-2cm處，用眼科小剪刀作一2-3mm切口。實(shí)驗(yàn)步驟4（組織移植）用套筒針在切口處刺入皮下直至目標(biāo)中心區(qū)域，將組織塊推入，并迅速拔出。實(shí)驗(yàn)步驟5鼠，與KM鼠比較胸腺的麻醉、解剖區(qū)別鼠胸腺只剩殘

本上看不到解剖觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求