DB54-T 0159-2018牛羊東畢吸蟲毛蚴孵化診斷方法

ICS11.220B41備案號：60763-2019

DB54西 藏 自 治 區(qū) 地 方 標 準DB54/T0159—2018牛羊東畢吸蟲毛蚴孵化診斷方法2018-07-20發(fā)布 2018-08-19實施西藏自治區(qū)市場監(jiān)督管理局 發(fā)布DB54/T0159—2018DB54/T0159—2018PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目??次前言 II范圍 1術語和定義 1牛羊東畢吸蟲病的診斷 1診斷結(jié)果 2附錄A（規(guī)范性附錄）實驗用品與試劑 3附錄B（規(guī)范性附錄）樣本采集、保存、送檢 4前??言本標準按照GB/T1.1的規(guī)則起草。本標準由西藏自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)標準化技術委員會提出并歸口。本標準由西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學院畜牧獸醫(yī)研究所，中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所負責起草。本標準主要起草人：劉建枝、劉金明、石斌、李浩、夏晨陽、陸珂、唐文強、朱傳剛、單曲拉姆。本標準為首次制定。DB54/T0159—2018DB54/T0159—2018PAGEPAGE4牛羊東畢吸蟲毛蚴孵化診斷方法范圍本標準規(guī)定了牛羊東畢吸蟲病及其流行區(qū)的定義、臨床診斷、實驗室診斷及結(jié)果判定等技術。本標準適用于西藏自治區(qū)境內(nèi)牛羊東畢吸蟲病的診斷、防治效果考核、檢疫和流行病學調(diào)查。術語和定義下列術語及定義適用于本標準。2.1牛羊東畢吸蟲病2.2東畢吸蟲病流行區(qū)存在東畢吸蟲的中間宿主，有牛和羊感染的地區(qū)。牛羊東畢吸蟲病的診斷臨床診斷來源于東畢吸蟲流行區(qū)的家畜，有以上癥狀者，列為疑似病例，但確診需進行實驗室診斷。實驗室診斷實驗步驟（只家畜的糞樣分別進行1250g，羊糞10g。羊糞加樣取羊糞10g加入長頸平底燒瓶并編號,往長頸平底燒瓶內(nèi)加入25℃水至瓶口下4cm～5cm處。牛糞加樣將50克牛糞放入銅篩中，銅篩置塑料量筒上部，加水淹沒糞樣，用竹筷攪拌至稀漿狀，撈出銅篩，瀝干后再次浸入，攪拌，如此3次。再將塑料量筒中的糞樣靜置沉淀15min～20min（室溫超過20℃時靜置時間不超過10min），棄上層清液，將沉淀物倒入長頸平底燒瓶，加水至瓶口下4cm～5cm。毛蚴孵化用玻璃棒將折疊好的1cm～1.5cm厚的松軟脫脂棉推入長頸平底燒瓶,使脫脂棉剛好浸入液面,補加水至液面高出脫脂棉2cm～3cm將裝好糞樣的長頸平底燒瓶放置于20℃～30℃環(huán)境中，在光照（日光或燈光）條件下進行孵育，避免陽光直射。如室溫低于20℃，可將長頸平底燒瓶放入25℃溫箱（內(nèi)加入日光燈）或水浴鍋中進行孵化。毛蚴觀察孵化（或在光線充足的地方結(jié)果判定東畢吸蟲毛蚴形態(tài)及運動特征毛蚴眼觀為針尖大小、灰白色、梭形，折光性強，在脫脂棉上層清液中作水平或斜向直線運動。陰性、陽性判定發(fā)現(xiàn)毛蚴，則判定為陽性；陰性樣本復查1次，如未發(fā)現(xiàn)毛蚴，則判定為陰性。診斷結(jié)果有流行病學接觸史的動物，出現(xiàn)本病臨床癥狀。確診糞便孵化發(fā)現(xiàn)毛蚴。附錄A（規(guī)范性附錄）實驗用品與試劑實驗用品孵育室（箱）室溫低于2020℃～25500mL(500ml)40目～80試劑水（瓶50L水加明礬3g～5g，充分攪拌，澄清。用NaOH或HCL調(diào)節(jié)pH值至6.8～7.2。自來水在盛器中存放去氯過程中需敞口，不能蓋蓋子。附錄B（規(guī)范性附錄）樣本采集、保存、送檢樣本采集20g～25g（只