分子生物學(xué)檢測課件

福州艾迪康

PCR實(shí)驗(yàn)室

介紹

陳衍嬌福州艾迪康

聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)PCR發(fā)展簡史PCR基本概述PCR基本原理聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)PCR發(fā)展簡史PCR發(fā)展簡史1985年，美國PE-Cetus公司的Mullis等人發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）1993年，Higuchi等報(bào)道了實(shí)時PCR(real-timePCR)PCR發(fā)展簡史1985年，美國PE-Cetus公司的Mull

PCR基本概述

聚合酶鏈反應(yīng)(PolymeraseChainReaction)簡稱ＰＣＲ，是一項(xiàng)在短時間內(nèi)大量擴(kuò)增特定的ＤＮＡ片段的分子生物學(xué)技術(shù)。

PCR基本概述PCR基本原理PCR擴(kuò)增基本要素PCR擴(kuò)增過程PCR基本原理PCR擴(kuò)增基本要素PCR擴(kuò)增基本要素DNA引物DNA模板TaqDNA聚合酶dNTP緩沖液Mg2+PCR擴(kuò)增基本要素DNA引物DNA模板TaqDNA聚合酶dNPCR擴(kuò)增參數(shù)溫度與時間參數(shù)（1）變性溫度與時間（2）退火溫度與時間（3）延伸溫度與時間循環(huán)次數(shù)PCR擴(kuò)增參數(shù)溫度與時間參數(shù)PCR基本擴(kuò)增過程PCR基本擴(kuò)增過程實(shí)時定量熒光PCR技術(shù)實(shí)時熒光PCR基本原理Taqman實(shí)時熒光PCR基本原理雙雜交探針實(shí)時熒光PCR基本原理實(shí)時定量熒光PCR技術(shù)實(shí)時熒光PCR基本原理

Taqman實(shí)時熒光PCR基本原理

Taqman實(shí)時熒光PCR基本原理靶DNA5’3’TaqMan探針淬滅劑報(bào)告熒光引物PCR過程中,TaqMan探針和引物與靶序列退火5’5’3’3’靶DNA引物TaqMan探針報(bào)告熒光淬滅劑引物在Taq酶的聚合延伸下,其5’外切酶活性將水解探針,從而使熒光基團(tuán)脫離淬滅劑的作用而發(fā)出熒光靶DNA5’3’TaqMan淬滅劑報(bào)告熒光引物PCR過程中,

雙雜交探針實(shí)時熒光PCR基本原理

雙雜交探針實(shí)時熒光PCR基本原理

靶DNA供體熒光基團(tuán)5’5’3’3’受體熒光基團(tuán)5’3’靶DNA3’3’5’5’

靶DNA供體熒光基團(tuán)5’5’3’3’受體熒光基團(tuán)5’3’靶實(shí)時熒光定量PCR工作流程標(biāo)本的采集標(biāo)本的運(yùn)送標(biāo)本的處理基因擴(kuò)增擴(kuò)增產(chǎn)物分析實(shí)時熒光定量PCR工作流程標(biāo)本的采集標(biāo)本的采集標(biāo)本采集時間對擴(kuò)增檢測結(jié)果的影響標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備

標(biāo)本采集的類型和采集量采樣質(zhì)量的評價(jià)

采樣及運(yùn)輸容器標(biāo)本采集中的防污染標(biāo)本的采集標(biāo)本采集時間對擴(kuò)增檢測結(jié)果的影響PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置試劑準(zhǔn)備區(qū)(Ⅰ區(qū))標(biāo)本處理區(qū)(Ⅱ區(qū))擴(kuò)增分析區(qū)(Ⅲ區(qū))產(chǎn)物分析區(qū)(Ⅳ區(qū))PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置試劑準(zhǔn)備區(qū)(Ⅰ區(qū))實(shí)時熒光定量PCR的應(yīng)用

我們福州PCR主要檢測項(xiàng)目

1.乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)

2.人乳頭瘤病毒HPV23型、人乳頭瘤病毒6/11、人乳頭瘤病毒16/18

3.沙眼衣原體DNA、解脲支原體DNA、淋球菌DNA

4.丙型肝炎RNA實(shí)時熒光定量PCR的應(yīng)用

我們福州PCR主要檢測項(xiàng)目1.乙乙型肝炎病毒(HBV)PCR檢測乙型肝炎病毒(HBV)概述乙型肝炎病毒基因區(qū)乙型肝炎病毒臨床意義乙型肝炎病毒變異檢測乙型肝炎病毒(HBV)PCR檢測乙型肝炎病毒(HBV)概述乙型肝炎病毒(HBV)概述

乙肝病毒是已知最小的部分雙鏈的環(huán)形DNA病毒，長3.2kb，有高度重疊的4個基因區(qū)，編碼至少8種蛋白。即S基因編碼的大、中、小HBs；C基因的前C、HBc、HBe；P基因的聚合酶和X基因的HBx。

乙肝病毒結(jié)構(gòu)圖

乙型肝炎病毒(HBV)概述乙肝病毒結(jié)構(gòu)圖乙型肝炎病毒基因區(qū)S區(qū)

C區(qū)

P區(qū)

X區(qū)乙型肝炎病毒基因區(qū)S區(qū)乙型肝炎病毒臨床意義判斷肝病的病情、預(yù)后和傳染性預(yù)測抗病毒治療的效果監(jiān)測和評價(jià)抗病毒藥物的療效乙型肝炎病毒臨床意義判斷肝病的病情、預(yù)后和傳染性乙型肝炎病毒YMDD變異

YMDD:酪氨酸蛋氨酸天冬氨酸天冬氨酸YIDD突變：蛋氨酸

異亮氨酸YVDD突變：蛋氨酸

纈氨酸乙型肝炎病毒YMDD變異YMDD:酪氨酸蛋氨酸天冬氨人乳頭瘤病毒（HPV）PCR檢測人乳頭瘤病毒的概述人乳頭瘤病毒的型別與分布人乳頭瘤的致癌機(jī)理人乳頭瘤病毒檢測的臨床意義人乳頭瘤病毒感染與宮頸癌的關(guān)系理想的宮頸癌篩查人乳頭瘤病毒（HPV）PCR檢測人乳頭瘤病毒的概述人乳頭瘤病毒的概述

雙鏈DNA無包膜病毒環(huán)狀DNA，約8Kb；病毒顆粒直徑為50～55nm；依靠宿主細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯。游離在細(xì)胞內(nèi)，持續(xù)存在，不引起任何病變，或引起良性病變和低度病變，如尖銳濕疣或輕度不典型增生等。而癌變則與病毒DNA整合入染色體密切相關(guān)。HPV感染是否發(fā)病取決于被感染的細(xì)胞是否進(jìn)行成熟分化。HPV病毒電鏡圖人乳頭瘤病毒的概述雙鏈DNA無包膜病毒HPV病毒電人乳頭瘤的型別與分布型別已發(fā)現(xiàn)100多種不同的亞型，其中超過40種可以感染人類的生殖器官，約30種與腫瘤有關(guān)。依據(jù)不同型別HPV與腫瘤發(fā)生的危險(xiǎn)性高低可分1）低危型：宮頸上皮內(nèi)低度病變，引起外生殖器濕疣等良性性病（HPV6、11、42等）2）高危型：宮頸上皮內(nèi)高度病變，與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)（HPV16、18、31、33、35、39

、45、51、52、53、56、58、59、66及68等）分布有些亞型和地區(qū)、宮頸癌的病理類型有關(guān)。

HPV45在非洲西部很常見，HPV39和59在美洲中部和南部常見，HPV52，58在中國常見。在宮頸鱗狀上皮細(xì)胞癌中以HPV16（占51％），在腺癌和腺鱗癌中HPV18分別占56％和39％。人乳頭瘤的型別與分布型別人乳頭瘤病毒的致癌機(jī)理HPV的基因結(jié)構(gòu)人乳頭瘤病毒HPV的基因結(jié)構(gòu)按功能可分為早期區(qū)（E區(qū)）、晚期區(qū)（L區(qū)）和非編碼區(qū)（LCR）三個區(qū)域HPV的致癌機(jī)理人乳頭瘤病毒的致癌機(jī)理HPV的基因結(jié)構(gòu)人乳頭瘤病毒檢測的臨床意義低危型1）預(yù)防和提示外生殖器濕疣等良性性病。2）可用于臨床可疑尖銳濕疣患者的確診，及HPV感染的早期診斷。高危型1）女性常規(guī)體檢，評估宮頸癌發(fā)生的可能性。2）跟進(jìn)宮頸癌的療效，評估宮頸癌復(fù)發(fā)的可能性。人乳頭瘤病毒檢測的臨床意義低危型人乳頭瘤病毒和宮頸癌的關(guān)系早在十九世紀(jì)四十年代，一位意大利醫(yī)生RegoniStern最早提出結(jié)婚與否與宮頸癌的發(fā)生可能有關(guān)。1977年Laverty在電鏡中觀察到宮頸癌活檢組織中存在人乳頭狀瘤病毒（Humanpapillomavirus，HPV）顆粒。至89年左右，約翰.霍普金斯大學(xué)教授KeertiShah證實(shí)子宮頸癌與HPV感染有直接關(guān)系。1995年世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究所（IARC）專題討論會認(rèn)為：HPV感染是宮頸癌發(fā)生的主要病因。人乳頭瘤病毒和宮頸癌的關(guān)系早在十九世紀(jì)四十年代，一位意大利醫(yī)理想的宮頸癌篩查

臨床提示，從HPV的持續(xù)感染到一般的宮頸癌前病變并最終發(fā)展為宮頸癌大約需要5-10年。因此，必須采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防和篩查措施，才能夠阻止宮頸癌的發(fā)生并有望最終根治。

美國腫瘤臨床指導(dǎo)：性行為開始三年左右，不晚于21歲開始。每年篩一次。若2～3次HPV和細(xì)胞學(xué)篩查均為正常者，可延長篩查時間至5-8年。大于70歲，在10年內(nèi)已有3次以上滿意的細(xì)胞學(xué)檢查和HPV檢查正常者，可停止篩查。良性子宮切除患者不需要檢查，否則，連續(xù)3年檢查，可終止。

中國：篩查起始年齡可考慮為25-30歲，65歲以上可停止篩查。理想的宮頸癌篩查臨床提示，從HPV的持續(xù)感染到一般的附：中國癌癥研究基金會（CCRF）篩查和早診早治指南基本方案：肉眼觀察＋冰醋酸試驗(yàn)（碘液試驗(yàn)）一般方案：papsmear+HPV檢測最佳方案：TCT+HPV檢測附：基本方案：肉眼觀察＋冰醋酸試驗(yàn)（碘液試驗(yàn)）附：

理想的宮頸癌篩查方案

HPV檢測（－）＋細(xì)胞學(xué)檢查（－）↓5—8年復(fù)查

HPV檢測（＋）＋細(xì)胞學(xué)檢查（＋）HPV檢測（－）＋細(xì)胞學(xué)檢查（＋）↓↓陰道鏡檢查每年復(fù)查↓↑組織學(xué)檢查HPV檢測（＋）＋細(xì)胞學(xué)檢查（－）

附：

理想的宮頸癌篩查方丙型肝炎病毒PCR檢測丙型肝炎病毒的概述丙型肝炎病毒RNA檢測的臨床意義丙型肝炎病毒PCR檢測丙型肝炎病毒的概述丙型肝炎病毒的概述丙肝病毒是一種直徑不到80納米，有包膜的單股正鏈核糖核酸（RNA）病毒，屬于黃病毒科家系。丙型肝炎病毒有6個基因型，其中以Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型最為常見。丙肝病毒不能自己合成蛋白，所以感染人體后常“借用”人體細(xì)胞的蛋白合成機(jī)制來合成病毒的蛋白。丙肝病毒在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制時，不僅利用人體細(xì)胞的蛋白合成機(jī)制，而且常引起肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能改變或干擾肝細(xì)胞蛋白合成，造成肝細(xì)胞變性壞死。

丙肝病毒的核心蛋白與致癌有關(guān)。

丙肝病毒結(jié)構(gòu)圖

丙型肝炎病毒的概述丙肝病毒是一種直丙型肝炎病毒RNA檢測的臨床意義

判斷肝病的病情、預(yù)后和傳染性預(yù)測抗病毒治療的效果監(jiān)測和評價(jià)抗病毒藥物的療效丙型肝炎病毒RNA檢測的臨床意義

判斷肝病的病情、預(yù)后和傳染人類巨細(xì)胞病毒PCR檢測人類巨細(xì)胞病毒概述人類巨細(xì)胞病毒PCR檢測的臨床意義人類巨細(xì)胞病毒PCR檢測人類巨細(xì)胞病毒概述人類巨細(xì)胞（CMV）病毒的概述

CMV又稱為涎病毒，屬于皰疹病毒亞科，是人類皰疹病毒組中最大的一種病毒。由分子量約為150X106的線狀雙股DNA所組成。其形最大由162個殼粒（capsomer），正20面體構(gòu)成。有典型的皰疹病毒結(jié)構(gòu)。形態(tài)與單純皰疹病毒及水痘-帶狀皰疹病毒非常相似，不易區(qū)別。

CMV只能在人纖維母細(xì)胞的組織培養(yǎng)中增殖，而不能在其他動物細(xì)胞中生長，增殖非常緩慢，其復(fù)制周期為36-48小時，比單純皰疹病毒復(fù)制周期8小時要長得多。初次分離需一個多月才能出現(xiàn)特殊的細(xì)胞；細(xì)胞變園，膨脹，細(xì)胞及核巨大化，核周圍出現(xiàn)一輪“暈”的大型嗜酸性包涵體。在活體中的靶細(xì)胞主要是上皮細(xì)胞。人類CMV各株之間有廣泛交叉反應(yīng)。

巨細(xì)胞病毒顯微鏡下圖片

人類巨細(xì)胞（CMV）病毒的概述C人類巨細(xì)胞病毒PCR檢測臨床意義預(yù)防胎兒畸形的可能性用于人巨細(xì)胞病毒感染的輔助診斷和人巨細(xì)胞病毒感染病人藥物治療的療效監(jiān)控。人類巨細(xì)胞病毒PCR檢測臨床意義預(yù)防胎兒畸形的可能性結(jié)核分支桿菌PCR檢測結(jié)核分支桿菌概述結(jié)核分支桿菌PCR檢測臨床意義結(jié)核分支桿菌PCR檢測結(jié)核分支桿菌概述結(jié)核分支桿菌概述結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長略帶彎曲的桿菌，大小1～4X0.4?m。牛分枝桿菌則比較粗短。分枝桿菌屬的細(xì)菌細(xì)胞壁脂質(zhì)含量較高，約占干重的60%，特別是有大量分枝菌酸(mycolicacid)包圍在肽聚糖層的外面，可影響染料的穿入。分枝桿菌一般用齊尼（Ziehl-Neelsen)抗酸染色法，以5%石炭酸復(fù)紅加溫染色后可以染上，但用3%鹽酸乙醇不易脫色。若再加用美藍(lán)復(fù)染，則分枝桿菌呈紅色，而其他細(xì)菌和背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。

抗酸染色后的結(jié)核桿菌

結(jié)核分支桿菌概述結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長略結(jié)核分支桿菌PCR檢測臨床意義為結(jié)核病的早期輔助診斷以及結(jié)核病高危人群的初篩等提供分子生物學(xué)上的參考依據(jù)。結(jié)核分支桿菌PCR檢測臨床意義其他性病PCR檢測沙眼衣原體PCR檢測解脲支原體PCR檢測單純皰疹病毒Ⅱ型PCR檢測淋球菌PCR檢測其他性病PCR檢測沙眼衣原體PCR檢測沙眼衣原體PCR檢測沙眼衣原體的概述沙眼衣原體PCR檢測的臨床意義沙眼衣原體PCR檢測沙眼衣原體的概述沙眼衣原體概述沙眼衣原體是一類在細(xì)胞內(nèi)寄生的微生物，大小約250-450nm。分為3個生物型，小鼠生物型、沙眼生物型和性病淋巴肉芽腫生物型（LGV型）。后二者與人類疾病有關(guān)。用間接微量免疫熒光試驗(yàn)，沙眼生物型又分A、B、Ba、C、D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、K14個血清型，LGV生物型又有L1、L2、L2a、L34個血清型。

沙眼衣原體包涵體圖片沙眼衣原體概述沙眼衣原體是一類在細(xì)胞內(nèi)寄生的微生沙眼衣原體PCR檢測臨床意義為沙眼衣原體的早期輔助診斷以及沙眼衣原體高危人群的初篩等提供分子生物學(xué)上的參考依據(jù)。沙眼衣原體PCR檢測臨床意義解脲支原體PCR檢測解脲支原體的概述解脲支原體PCR檢測的臨床意義解脲支原體PCR檢測解脲支原體的概述解脲支原體的概述解脲支原體（M.urealyticum）為脲原體屬中唯一的一個種，因生長需要尿素而得名。菌落微小，直徑僅有15～25um，須在低倍顯微鏡下觀察，故舊稱T株(tinystrain)。菌落表面有粗糙顆粒，在合適條件下可轉(zhuǎn)成典型的荷包蛋樣菌落。生長需要膽固醇和尿素，分解尿素為其代謝特征，產(chǎn)生氨氮，使培養(yǎng)基pH上升，患者小便往往帶有臊腥味。低倍顯微鏡下觀察解脲支原體

解脲支原體的概述解脲支原體（M.ure解脲支原體PCR檢測臨床意義

為解脲脲原體的早期輔助診斷以及解脲脲原體高危人群的初篩等提供分子生物學(xué)上的參考依據(jù)。解脲支原體PCR檢測臨床意義單純皰疹病毒PCR檢測單純皰疹病毒的概述單純皰疹病毒PCR檢測的臨床意義單純皰疹病毒PCR檢測單純皰疹病毒的概述單純皰疹病毒概述單純皰疹病毒（

herpessimplexvirus）屬于皰疹病毒科a病毒亞科，病毒質(zhì)粒大小約180納米。根據(jù)抗原性的差別目前把該病毒分為1型和2型。1型主要由口唇病灶獲得，2型可從生殖器病灶分離到。感染是由于人與人的接觸。從發(fā)生后四個月到數(shù)年被感染的人數(shù)可達(dá)人口總數(shù)的50—90%，是最易侵犯人的一種病毒，但在臨床僅有一部份發(fā)病。此病可分為：口唇性皰疹、皰疹性角膜炎、皰疹性皮膚炎、陰部皰疹、卡波西病等，有時也是腦膜炎、腦炎的病因?？诖讲堪捳钜话爿^易診斷，同時因日曬、發(fā)熱等種種的刺激因素而引起復(fù)發(fā)。該病毒可在雞胚絨毛尿囊膜上及人、猴、雞等的動物培養(yǎng)細(xì)胞中大量地增殖。另外，2型病毒對田鼠細(xì)胞等有轉(zhuǎn)化作用。還懷疑皰疹病毒與人類的宮頸癌有關(guān)。染色后的單純皰疹病毒

單純皰疹病毒概述單純皰疹病毒（he單純皰疹病毒PCR檢測臨床意義用于單純皰疹病毒感染的輔助診斷及其感染病人的藥物治療的療效監(jiān)控。單純皰疹病毒PCR檢測臨床意義淋球菌病毒PCR檢測淋球菌病毒的概述淋球菌病毒PCR檢測的臨床意義淋球菌病毒PCR檢測淋球菌病毒的概述淋球菌概述淋球菌（gonococcus）有嚴(yán)格的人類寄生性，屬于奈瑟菌屬，為革蘭陰性雙球菌，常成對排列，鄰近面扁平或稍凹陷，形成氧化酶陽性的菌落，其致病性可能與細(xì)菌表面物質(zhì)即粘附因子和菌毛的作用有關(guān)。帶菌毛的細(xì)菌具有毒力，可引起感染，無菌毛的細(xì)菌無毒力，不產(chǎn)生炎癥。菌毛可粘附于各種上皮細(xì)胞，并抑制中性粒細(xì)胞的吞噬作用。菌毛的抗原變異可允許淋球菌迅速的適應(yīng)于附著在不同的上皮表面，從而逃避宿主對菌毛的抗體反應(yīng)。內(nèi)毒素在致病中有一定作用，但非主要因素。淋球菌有多種耐藥菌型：產(chǎn)青霉素酶淋球菌（ppng）對青霉素、氨芐西林等耐藥，質(zhì)粒介導(dǎo)的耐四環(huán)素淋球菌（trng）為高度耐藥株，經(jīng)染色體介導(dǎo)的耐藥菌（cmrng）耐多種藥物。此菌對外界抵抗力較弱，干燥、濕熱中易殺滅。放置室溫中1～2天內(nèi)死亡。

染色后顯微鏡下的淋球菌

淋球菌概述淋球菌（gonococ淋球菌PCR檢測臨床意義用于淋球菌感染的輔助診斷及其感染病人藥物治療的療效監(jiān)控淋球菌PCR檢測臨床意義謝謝謝謝

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PCR實(shí)驗(yàn)室

介紹

陳衍嬌福州艾迪康

聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)PCR發(fā)展簡史PCR基本概述PCR基本原理聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)PCR發(fā)展簡史PCR發(fā)展簡史1985年，美國PE-Cetus公司的Mullis等人發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）1993年，Higuchi等報(bào)道了實(shí)時PCR(real-timePCR)PCR發(fā)展簡史1985年，美國PE-Cetus公司的Mull

PCR基本概述

聚合酶鏈反應(yīng)(PolymeraseChainReaction)簡稱ＰＣＲ，是一項(xiàng)在短時間內(nèi)大量擴(kuò)增特定的ＤＮＡ片段的分子生物學(xué)技術(shù)。

PCR基本概述PCR基本原理PCR擴(kuò)增基本要素PCR擴(kuò)增過程PCR基本原理PCR擴(kuò)增基本要素PCR擴(kuò)增基本要素DNA引物DNA模板TaqDNA聚合酶dNTP緩沖液Mg2+PCR擴(kuò)增基本要素DNA引物DNA模板TaqDNA聚合酶dNPCR擴(kuò)增參數(shù)溫度與時間參數(shù)（1）變性溫度與時間（2）退火溫度與時間（3）延伸溫度與時間循環(huán)次數(shù)PCR擴(kuò)增參數(shù)溫度與時間參數(shù)PCR基本擴(kuò)增過程PCR基本擴(kuò)增過程實(shí)時定量熒光PCR技術(shù)實(shí)時熒光PCR基本原理Taqman實(shí)時熒光PCR基本原理雙雜交探針實(shí)時熒光PCR基本原理實(shí)時定量熒光PCR技術(shù)實(shí)時熒光PCR基本原理

Taqman實(shí)時熒光PCR基本原理

Taqman實(shí)時熒光PCR基本原理靶DNA5’3’TaqMan探針淬滅劑報(bào)告熒光引物PCR過程中,TaqMan探針和引物與靶序列退火5’5’3’3’靶DNA引物TaqMan探針報(bào)告熒光淬滅劑引物在Taq酶的聚合延伸下,其5’外切酶活性將水解探針,從而使熒光基團(tuán)脫離淬滅劑的作用而發(fā)出熒光靶DNA5’3’TaqMan淬滅劑報(bào)告熒光引物PCR過程中,

雙雜交探針實(shí)時熒光PCR基本原理

雙雜交探針實(shí)時熒光PCR基本原理

靶DNA供體熒光基團(tuán)5’5’3’3’受體熒光基團(tuán)5’3’靶DNA3’3’5’5’

靶DNA供體熒光基團(tuán)5’5’3’3’受體熒光基團(tuán)5’3’靶實(shí)時熒光定量PCR工作流程標(biāo)本的采集標(biāo)本的運(yùn)送標(biāo)本的處理基因擴(kuò)增擴(kuò)增產(chǎn)物分析實(shí)時熒光定量PCR工作流程標(biāo)本的采集標(biāo)本的采集標(biāo)本采集時間對擴(kuò)增檢測結(jié)果的影響標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備

標(biāo)本采集的類型和采集量采樣質(zhì)量的評價(jià)

采樣及運(yùn)輸容器標(biāo)本采集中的防污染標(biāo)本的采集標(biāo)本采集時間對擴(kuò)增檢測結(jié)果的影響PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置試劑準(zhǔn)備區(qū)(Ⅰ區(qū))標(biāo)本處理區(qū)(Ⅱ區(qū))擴(kuò)增分析區(qū)(Ⅲ區(qū))產(chǎn)物分析區(qū)(Ⅳ區(qū))PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置試劑準(zhǔn)備區(qū)(Ⅰ區(qū))實(shí)時熒光定量PCR的應(yīng)用

我們福州PCR主要檢測項(xiàng)目

1.乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)

2.人乳頭瘤病毒HPV23型、人乳頭瘤病毒6/11、人乳頭瘤病毒16/18

3.沙眼衣原體DNA、解脲支原體DNA、淋球菌DNA

4.丙型肝炎RNA實(shí)時熒光定量PCR的應(yīng)用

我們福州PCR主要檢測項(xiàng)目1.乙乙型肝炎病毒(HBV)PCR檢測乙型肝炎病毒(HBV)概述乙型肝炎病毒基因區(qū)乙型肝炎病毒臨床意義乙型肝炎病毒變異檢測乙型肝炎病毒(HBV)PCR檢測乙型肝炎病毒(HBV)概述乙型肝炎病毒(HBV)概述

乙肝病毒是已知最小的部分雙鏈的環(huán)形DNA病毒，長3.2kb，有高度重疊的4個基因區(qū)，編碼至少8種蛋白。即S基因編碼的大、中、小HBs；C基因的前C、HBc、HBe；P基因的聚合酶和X基因的HBx。

乙肝病毒結(jié)構(gòu)圖

乙型肝炎病毒(HBV)概述乙肝病毒結(jié)構(gòu)圖乙型肝炎病毒基因區(qū)S區(qū)

C區(qū)

P區(qū)

X區(qū)乙型肝炎病毒基因區(qū)S區(qū)乙型肝炎病毒臨床意義判斷肝病的病情、預(yù)后和傳染性預(yù)測抗病毒治療的效果監(jiān)測和評價(jià)抗病毒藥物的療效乙型肝炎病毒臨床意義判斷肝病的病情、預(yù)后和傳染性乙型肝炎病毒YMDD變異

YMDD:酪氨酸蛋氨酸天冬氨酸天冬氨酸YIDD突變：蛋氨酸

異亮氨酸YVDD突變：蛋氨酸

纈氨酸乙型肝炎病毒YMDD變異YMDD:酪氨酸蛋氨酸天冬氨人乳頭瘤病毒（HPV）PCR檢測人乳頭瘤病毒的概述人乳頭瘤病毒的型別與分布人乳頭瘤的致癌機(jī)理人乳頭瘤病毒檢測的臨床意義人乳頭瘤病毒感染與宮頸癌的關(guān)系理想的宮頸癌篩查人乳頭瘤病毒（HPV）PCR檢測人乳頭瘤病毒的概述人乳頭瘤病毒的概述

雙鏈DNA無包膜病毒環(huán)狀DNA，約8Kb；病毒顆粒直徑為50～55nm；依靠宿主細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯。游離在細(xì)胞內(nèi)，持續(xù)存在，不引起任何病變，或引起良性病變和低度病變，如尖銳濕疣或輕度不典型增生等。而癌變則與病毒DNA整合入染色體密切相關(guān)。HPV感染是否發(fā)病取決于被感染的細(xì)胞是否進(jìn)行成熟分化。HPV病毒電鏡圖人乳頭瘤病毒的概述雙鏈DNA無包膜病毒HPV病毒電人乳頭瘤的型別與分布型別已發(fā)現(xiàn)100多種不同的亞型，其中超過40種可以感染人類的生殖器官，約30種與腫瘤有關(guān)。依據(jù)不同型別HPV與腫瘤發(fā)生的危險(xiǎn)性高低可分1）低危型：宮頸上皮內(nèi)低度病變，引起外生殖器濕疣等良性性?。℉PV6、11、42等）2）高危型：宮頸上皮內(nèi)高度病變，與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)（HPV16、18、31、33、35、39

、45、51、52、53、56、58、59、66及68等）分布有些亞型和地區(qū)、宮頸癌的病理類型有關(guān)。

HPV45在非洲西部很常見，HPV39和59在美洲中部和南部常見，HPV52，58在中國常見。在宮頸鱗狀上皮細(xì)胞癌中以HPV16（占51％），在腺癌和腺鱗癌中HPV18分別占56％和39％。人乳頭瘤的型別與分布型別人乳頭瘤病毒的致癌機(jī)理HPV的基因結(jié)構(gòu)人乳頭瘤病毒HPV的基因結(jié)構(gòu)按功能可分為早期區(qū)（E區(qū)）、晚期區(qū)（L區(qū)）和非編碼區(qū)（LCR）三個區(qū)域HPV的致癌機(jī)理人乳頭瘤病毒的致癌機(jī)理HPV的基因結(jié)構(gòu)人乳頭瘤病毒檢測的臨床意義低危型1）預(yù)防和提示外生殖器濕疣等良性性病。2）可用于臨床可疑尖銳濕疣患者的確診，及HPV感染的早期診斷。高危型1）女性常規(guī)體檢，評估宮頸癌發(fā)生的可能性。2）跟進(jìn)宮頸癌的療效，評估宮頸癌復(fù)發(fā)的可能性。人乳頭瘤病毒檢測的臨床意義低危型人乳頭瘤病毒和宮頸癌的關(guān)系早在十九世紀(jì)四十年代，一位意大利醫(yī)生RegoniStern最早提出結(jié)婚與否與宮頸癌的發(fā)生可能有關(guān)。1977年Laverty在電鏡中觀察到宮頸癌活檢組織中存在人乳頭狀瘤病毒（Humanpapillomavirus，HPV）顆粒。至89年左右，約翰.霍普金斯大學(xué)教授KeertiShah證實(shí)子宮頸癌與HPV感染有直接關(guān)系。1995年世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究所（IARC）專題討論會認(rèn)為：HPV感染是宮頸癌發(fā)生的主要病因。人乳頭瘤病毒和宮頸癌的關(guān)系早在十九世紀(jì)四十年代，一位意大利醫(yī)理想的宮頸癌篩查

臨床提示，從HPV的持續(xù)感染到一般的宮頸癌前病變并最終發(fā)展為宮頸癌大約需要5-10年。因此，必須采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防和篩查措施，才能夠阻止宮頸癌的發(fā)生并有望最終根治。

美國腫瘤臨床指導(dǎo)：性行為開始三年左右，不晚于21歲開始。每年篩一次。若2～3次HPV和細(xì)胞學(xué)篩查均為正常者，可延長篩查時間至5-8年。大于70歲，在10年內(nèi)已有3次以上滿意的細(xì)胞學(xué)檢查和HPV檢查正常者，可停止篩查。良性子宮切除患者不需要檢查，否則，連續(xù)3年檢查，可終止。

中國：篩查起始年齡可考慮為25-30歲，65歲以上可停止篩查。理想的宮頸癌篩查臨床提示，從HPV的持續(xù)感染到一般的附：中國癌癥研究基金會（CCRF）篩查和早診早治指南基本方案：肉眼觀察＋冰醋酸試驗(yàn)（碘液試驗(yàn)）一般方案：papsmear+HPV檢測最佳方案：TCT+HPV檢測附：基本方案：肉眼觀察＋冰醋酸試驗(yàn)（碘液試驗(yàn)）附：

理想的宮頸癌篩查方案

HPV檢測（－）＋細(xì)胞學(xué)檢查（－）↓5—8年復(fù)查

HPV檢測（＋）＋細(xì)胞學(xué)檢查（＋）HPV檢測（－）＋細(xì)胞學(xué)檢查（＋）↓↓陰道鏡檢查每年復(fù)查↓↑組織學(xué)檢查HPV檢測（＋）＋細(xì)胞學(xué)檢查（－）

附：

理想的宮頸癌篩查方丙型肝炎病毒PCR檢測丙型肝炎病毒的概述丙型肝炎病毒RNA檢測的臨床意義丙型肝炎病毒PCR檢測丙型肝炎病毒的概述丙型肝炎病毒的概述丙肝病毒是一種直徑不到80納米，有包膜的單股正鏈核糖核酸（RNA）病毒，屬于黃病毒科家系。丙型肝炎病毒有6個基因型，其中以Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型最為常見。丙肝病毒不能自己合成蛋白，所以感染人體后?！敖栌谩比梭w細(xì)胞的蛋白合成機(jī)制來合成病毒的蛋白。丙肝病毒在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制時，不僅利用人體細(xì)胞的蛋白合成機(jī)制，而且常引起肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能改變或干擾肝細(xì)胞蛋白合成，造成肝細(xì)胞變性壞死。

丙肝病毒的核心蛋白與致癌有關(guān)。

丙肝病毒結(jié)構(gòu)圖

丙型肝炎病毒的概述丙肝病毒是一種直丙型肝炎病毒RNA檢測的臨床意義

判斷肝病的病情、預(yù)后和傳染性預(yù)測抗病毒治療的效果監(jiān)測和評價(jià)抗病毒藥物的療效丙型肝炎病毒RNA檢測的臨床意義

判斷肝病的病情、預(yù)后和傳染人類巨細(xì)胞病毒PCR檢測人類巨細(xì)胞病毒概述人類巨細(xì)胞病毒PCR檢測的臨床意義人類巨細(xì)胞病毒PCR檢測人類巨細(xì)胞病毒概述人類巨細(xì)胞（CMV）病毒的概述

CMV又稱為涎病毒，屬于皰疹病毒亞科，是人類皰疹病毒組中最大的一種病毒。由分子量約為150X106的線狀雙股DNA所組成。其形最大由162個殼粒（capsomer），正20面體構(gòu)成。有典型的皰疹病毒結(jié)構(gòu)。形態(tài)與單純皰疹病毒及水痘-帶狀皰疹病毒非常相似，不易區(qū)別。

CMV只能在人纖維母細(xì)胞的組織培養(yǎng)中增殖，而不能在其他動物細(xì)胞中生長，增殖非常緩慢，其復(fù)制周期為36-48小時，比單純皰疹病毒復(fù)制周期8小時要長得多。初次分離需一個多月才能出現(xiàn)特殊的細(xì)胞；細(xì)胞變園，膨脹，細(xì)胞及核巨大化，核周圍出現(xiàn)一輪“暈”的大型嗜酸性包涵體。在活體中的靶細(xì)胞主要是上皮細(xì)胞。人類CMV各株之間有廣泛交叉反應(yīng)。

巨細(xì)胞病毒顯微鏡下圖片

人類巨細(xì)胞（CMV）病毒的概述C人類巨細(xì)胞病毒PCR檢測臨床意義預(yù)防胎兒畸形的可能性用于人巨細(xì)胞病毒感染的輔助診斷和人巨細(xì)胞病毒感染病人藥物治療的療效監(jiān)控。人類巨細(xì)胞病毒PCR檢測臨床意義預(yù)防胎兒畸形的可能性結(jié)核分支桿菌PCR檢測結(jié)核分支桿菌概述結(jié)核分支桿菌PCR檢測臨床意義結(jié)核分支桿菌PCR檢測結(jié)核分支桿菌概述結(jié)核分支桿菌概述結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長略帶彎曲的桿菌，大小1～4X0.4?m。牛分枝桿菌則比較粗短。分枝桿菌屬的細(xì)菌細(xì)胞壁脂質(zhì)含量較高，約占干重的60%，特別是有大量分枝菌酸(mycolicacid)包圍在肽聚糖層的外面，可影響染料的穿入。分枝桿菌一般用齊尼（Ziehl-Neelsen)抗酸染色法，以5%石炭酸復(fù)紅加溫染色后可以染上，但用3%鹽酸乙醇不易脫色。若再加用美藍(lán)復(fù)染，則分枝桿菌呈紅色，而其他細(xì)菌和背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。

抗酸染色后的結(jié)核桿菌

結(jié)核分支桿菌概述結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長略結(jié)核分支桿菌PCR檢測臨床意義為結(jié)核病的早期輔助診斷以及結(jié)核病高危人群的初篩等提供分子生物學(xué)上的參考依據(jù)。結(jié)核分支桿菌PCR檢測臨床意義其他性病PCR檢測沙眼衣原體PCR檢測解脲支原體PCR檢測單純皰疹病毒Ⅱ型PCR檢測淋球菌PCR檢測其他性病PCR檢測沙眼衣原體PCR檢測沙眼衣原體PCR檢測沙眼衣原體的概述沙眼衣原體PCR檢測的臨床意義沙眼衣原體PCR檢測沙眼衣原體的概述沙眼衣原體概述沙眼衣原體是一類在細(xì)胞內(nèi)寄生的微生物，大小約250-450nm。分為3個生物型，小鼠生物型、沙眼生物型和性病淋巴肉芽腫生物型（LGV型）。后二者與人類疾病有關(guān)。用間接微量免疫熒光試驗(yàn)，沙眼生物型又分A、B、Ba、C、D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、K14個血清型，LGV生物型又有L1、L2、L2a、L34個血清型。