乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)

乙肝五項、梅毒螺旋體抗體的檢測及應(yīng)用孕前優(yōu)生健康檢查臨床檢驗操作技術(shù)培訓(xùn)河南省人口和計劃生育科學(xué)技術(shù)研究院

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!免疫層析快速檢測技術(shù)乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!歷史：放射免疫測定1960酶免疫測定1970熒光免疫測定1980-1990化學(xué)發(fā)光免疫測定1990膜固相免疫測定1990乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!原理將特異的抗原（或抗體）先固定于固相膜的某一區(qū)帶，當(dāng)該干燥的固相膜一端浸入樣品后，由于毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當(dāng)移動至固定有經(jīng)過標記的抗體區(qū)域時，樣品中相應(yīng)的抗原即與該標記抗體發(fā)生特異性結(jié)合，抗原抗體復(fù)合物移動到特定區(qū)域被捕獲，使該區(qū)域顯示一定的顏色，從而實現(xiàn)特異性的免疫診斷。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!不足之處敏感度略低，價格略高（與ELISA比）不易制備定量、半定量試劑質(zhì)量控制困難乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!免疫層析快速檢測常用的結(jié)合物膠體金乳膠顆粒乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!固相膜種類玻璃纖維素膜尼龍膜聚偏氟乙稀膜硝酸纖維素膜固相NC膜乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!免疫層析快速檢測技術(shù)分類雙抗體夾心法測抗原間接法測抗體雙抗原夾心法測抗體競爭法測抗體乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!結(jié)果判斷夾心法結(jié)果判斷競爭法結(jié)果判斷乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!乙肝五項的檢測及應(yīng)用乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!乙肝五項

乙肝病毒表面抗原（HBsAg）乙肝病毒表面抗體（抗-HBs）乙肝病毒e抗原（HBeAg）乙肝病毒e抗體（抗-HBe）乙肝病毒核心抗體（抗-HBc）乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!HBV感染后絕大多數(shù)感染者外周血中可出現(xiàn)HBsAg.但有少部分HBV感染者血清HBsAg測定為陰性，如暴發(fā)性乙型肝炎。急性重癥乙型肝炎，肝細胞中以合成HBcAg為主，很少或不合成HBsAg，從而使外周血中無HBsAg。

目前國內(nèi)最常用的HBsAg免疫測定方法為酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，其次是放射免疫試驗(RIA)。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!血液里表面抗體能維持很長時間，直到老年期抗體水平才有所降低。以HBsAg作為疫苗免疫機體產(chǎn)生的抗HBs，對HBV的感染具有保護性免疫作用。乙肝疫苗接種者，體內(nèi)血循環(huán)中除了抗HBs外，不應(yīng)出現(xiàn)其它乙肝病毒感染血清免疫學(xué)標志物，如抗HBe、抗HBc等。一旦出現(xiàn)除抗HBs以外的標志物，則應(yīng)視為既往HBV感染。

一般情況下，血清中抗HBs和HBsAg不同時存在，若同時檢出，可能為抗HBs產(chǎn)生的早期，或?qū)儆诓煌瑏喰偷腍BV感染，或由HBV的S基因變異所致。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!HBeAg與病毒Dane顆粒、HBVDNA具有伴隨關(guān)系，是HBV復(fù)制活躍的血清學(xué)指標，血清HBeAg陽性說明傳染性強。急性乙肝病人血清HBeAg持續(xù)陽性3個月以上，則有疾病慢性化傾向。

有時臨床實驗室可見到HBsAg（－）、抗HBs（+）、HBeAg（+）的模式，則很有可能在病毒編碼HBsAg的基因區(qū)發(fā)生了突變。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!

5．抗-HBc

核心抗體是乙型肝炎核心抗體的簡稱，可簡寫為抗-HBc。核心抗原雖然在血清中查不出來（它在血中很快被裂解），但是它具有抗原性，能刺激身體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生出特性抗體，即核心抗體，故檢測抗-HBc可以了解人體是否有過核心抗原的刺激，也就是說是否有過乙肝病毒的感染。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!乙肝五項各項的臨床意義HBsAg陽性：血清HBsAg陽性，表示受檢查處于HBV的感染狀態(tài)，HBsAg也可從許多乙肝患者體液和分泌物中測出，如唾液、精液、乳汁、陰道分泌物等。HBsAb陽性：多見于乙型肝炎處于恢復(fù)期，或既往曾感染過HBV，現(xiàn)在已恢復(fù)，而且對HBV有一定的免疫力；同時，HBsAb陽性是對接種乙肝疫苗后產(chǎn)生效果，即接種免疫成功的指標。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!HBeAb陽性：多見于HBeAg轉(zhuǎn)陰的患者，意味著HBV部分被清除或抑制，病毒復(fù)制減少，傳染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者可檢出HBeAb；在HBsAg和HBsAb陰性時，如能檢出HBeAb和HBcAb，也能確診為乙型肝炎近期感染。HBcAb陽性：是診斷急性乙型肝炎和判斷病毒復(fù)制活躍的指標，并提示患者血液有效強傳染性。同時，HBcAb陽性還見于慢性活動性乙型肝炎。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!乙肝五項檢測的影響因素樣本采集與處理的影響

1.1標本嚴溶血及混有紅細胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣的活性，催化底物顯色造成假陽性，嚴重溶血標本禁用。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!1.3標本凝固不全，正常血液采集后1/2~2h開始凝固，18~24h血塊完全收縮。在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/p>

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!3、操作技術(shù)的影響

3.1加樣吸嘴的潔凈與否和吸量的準確性，直接影響檢測結(jié)果。由于吸嘴構(gòu)造特殊，導(dǎo)致清洗困難，加大了交叉污染的機會。建議用一次性吸嘴。加樣器也要經(jīng)常清洗，定期校準。

3.2溫浴影響，96孔酶標板結(jié)構(gòu)特別；易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，抗原抗體結(jié)合及酶促反應(yīng)對溫度有嚴格要求，酶標板周圍與內(nèi)部孔升降溫速率不同，造成周邊與內(nèi)部孔結(jié)果差異；干浴與水浴存在明顯的差異，盡可能使用水浴，并要求固相板放入水中，減少受熱不均，貼密封膜，防止污物浸入。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!4、HooK效應(yīng)影響

隨著ELISA一步法的應(yīng)用，一些標本中抗原含量過高，產(chǎn)生HooK效應(yīng)。影響檢測結(jié)果，采用同步稀釋測定或使用線性范圍高的兩對半定量法可以減HooK反應(yīng)的發(fā)生。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!6、藥物的影響

6.1、高效價的乙肝免疫球蛋白會與HBsAg形成復(fù)合物，影響HBsAg的檢出，所以一些HBsAg陽性患者注射乙肝免疫球蛋白后，HBsAg檢測會呈陰性反應(yīng)，導(dǎo)致乙肝兩對半少見模式的出現(xiàn)。如我們常遇到乙肝大三陽的孕婦，為阻斷乙肝母嬰垂直傳播時，在孕第8、9、10月常規(guī)注射乙肝免疫球蛋白，不僅影響孕婦HBsAg的檢出；而且其所生產(chǎn)的新生兒也常出現(xiàn)HBsAg陰性，HBeAg陽性和HBcAb陽性等少見模式。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!乙型五項檢測標準化操作HBsAg取出反應(yīng)板條,設(shè)空白對照1孔（不加任何樣品）、同時設(shè)陰性對照及陽性對照各2孔（分別加入陰性對照及陽性對照各75μL）.其余空加入待測樣品75μL，37℃孵育60分鐘。然后每孔加入酶結(jié)合物1滴（50μL）（空白對照孔不加）,充分混勻,用不干膠片封板,置37℃反應(yīng)30分鐘。棄去各孔內(nèi)液體,用洗液注滿各孔,靜置10秒鐘（洗板機洗板靜置60秒鐘）,甩干,重復(fù)5次,拍干。每孔加顯色劑A.顯色劑B各1滴（50μL）,置37℃反應(yīng)30分鐘。每孔加終止液1滴（50μL）。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!HBcAb1.取出反應(yīng)板條,設(shè)空白對照1孔（不加任何樣品）、同時設(shè)陰性對照及陽性對照各2孔（分別加入陰性對照及陽性對照各50μL）。其余孔加生理鹽水1：30稀釋之待測樣品50μL（檢測結(jié)果為臨床意義）。然后每孔加入酶結(jié)合物1滴（50μL）（空白對照孔不加）,充分混勻,用不干膠片封板,置37℃反應(yīng)30分鐘。2.棄去各孔內(nèi)液體,用洗液注滿各孔,靜置10秒鐘（洗板60秒鐘）,甩干,重復(fù)5次拍干。3.每孔加顯色劑A.顯色劑B各1滴（50μL）,置37℃反應(yīng)15分鐘。4.每孔加終止液1滴（50μL）。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁!假陽性原因：操作及儀器因素：加樣、洗板、自動化加樣系統(tǒng)的標本間“交叉污染”。標本因素：RF、補體、異嗜性抗體、動物抗體、溶血、細菌污染、標本貯存時間過長、標本凝固不全。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁!梅毒螺旋體抗體檢測乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁!梅毒梅毒是由梅毒螺旋體引起的慢性感染性疾病。梅毒螺旋體可以通過性接觸和胎盤等方式傳播。梅毒螺旋體不能夠在體外培養(yǎng)，也不能用常規(guī)方法染色。實驗室常用的檢測方法包括典型潰瘍處查找梅毒螺旋體和檢測血清中抗體的存在。不同的感染階段應(yīng)選用不同的實驗方法，潰瘍并不是出現(xiàn)于疾病任何階段，而抗體一般在潰瘍形成后1-4周出現(xiàn)。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁!操作1.TRUST試劑和待測血清置室溫.（18-25℃）平衡10min。2.將待測血清（無需滅活處理）、陰性對照和陽性對照分別加至反應(yīng)卡的樣本圈內(nèi)，每圈1滴（50uL）。3.輕輕搖勻抗原試劑，垂直滴加1滴抗原于樣本圈內(nèi)。4.旋轉(zhuǎn)搖動卡片8分鐘，立即肉眼觀察結(jié)果。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁!注意事項1.試驗需在室溫中操作，結(jié)果穩(wěn)定性、重復(fù)性好。待測血清需新鮮無污染，否則可能出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果。2.在規(guī)定時間內(nèi)及時觀察結(jié)果。檢樣及廢棄物應(yīng)視為生物危險品。3.本法僅為非特異性血清學(xué)過篩試驗，陽性結(jié)果需進一步做抗梅毒螺旋體抗體試驗確認（TPPA）。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁!操作1.將試劑盒平衡恢復(fù)至室溫（18-25℃），取出所需條板。分別加入待測血清、陽性對照或陰性對照至已包被TP抗原的反應(yīng)孔中。每孔100ul，37℃孵育1小時。洗滌反應(yīng)板5次，每孔再加入酶標記TP抗原100微升?；靹?，37℃孵育30分鐘。3.甩凈孔內(nèi)液體，用洗滌液洗孔5遍，在吸水紙上拍干。4.每孔加顯色劑A液、顯色劑B液各50ul，混勻，37℃孵育30分鐘。加終止液50ul。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁!梅毒螺旋體抗體檢測的臨床意義患梅毒的孕婦可通過胎盤感染胎兒，早期可導(dǎo)致胎兒流產(chǎn)、早產(chǎn)，晚期感染的成活胎兒可患先天梅毒。梅毒血清學(xué)試驗陽性，只提示所測標本中有抗內(nèi)酯抗體或抗TP抗體存在，不能作為患者感染梅毒螺旋體的絕對依據(jù)，陰性結(jié)果也不能排出梅毒螺旋體感染，檢測結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床綜合分析。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁!特點：快速簡便可單份檢測穩(wěn)定性好檢測種類多可測定物質(zhì)范圍廣乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁!免疫層析快速檢測試劑結(jié)構(gòu)圖乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁!膠體金也稱金溶膠，是由金鹽還原形成的金顆粒懸液。由一個基礎(chǔ)金核及包圍在外的離子層構(gòu)成。呈球形（小顆粒）或橢圓形（大顆粒）。對電解質(zhì)敏感，對試驗有影響。呈色性：膠體金的光散射性與溶膠顆粒的大小密切相關(guān)，一旦顆粒大小發(fā)生變化，光散射也隨之發(fā)生變異，產(chǎn)生肉眼可見的顯著的顏色變化。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁!固相膜特點多孔性毛細管作用非共價鍵高度吸附高度敏感性抗原或抗體易于漂洗操作簡便乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁!操作步驟試劑盒先恢復(fù)室溫，從原包裝鋁箔袋中取出試劑盒，在1小時內(nèi)盡快地使用。將試劑盒置于干凈平坦的臺面上，用塑料吸管垂直滴加3滴（100微升）無氣泡的血清/血漿于試劑盒的加樣孔內(nèi)。等待紫紅色條帶的出現(xiàn)，測試結(jié)果應(yīng)在15分鐘內(nèi)讀取。20分鐘后判斷無效。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁!質(zhì)量控制應(yīng)避免樣品溶血。溶血、粘稠及高脂標本可能會導(dǎo)致檢測結(jié)果不穩(wěn)定。實驗環(huán)境應(yīng)保持一定溫度，避風(fēng)。避免在過高溫度下進行實驗。試劑從包裝中取出后，應(yīng)盡快進行實驗，避免放置于空氣中過長時間，導(dǎo)致受潮。試劑若為室溫應(yīng)注意防潮；若低溫下保存應(yīng)平衡至室溫方可使用。滴加試劑時，應(yīng)先搖勻，并棄去1~2滴，垂直滴加。此方法為初篩，因此陽性結(jié)果須用其他方法（如EIA）進一步確認。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第38頁!1.乙肝五項的各項簡述2.乙肝五項各項的臨床意義3.乙肝五項32種可能組合4.乙肝五項檢測的影響因素5.乙肝五項檢測標準化操作乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第39頁!乙肝五項的各項簡述1．HBsAg

血清中檢出HBsAg是乙型肝炎的早期診斷指標之一，出現(xiàn)于患者血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT)升高前2—8周，至恢復(fù)期HBsAg滴度逐步降低乃至消失，抗HBs出現(xiàn)。有部分患者HBsAg在血清中可持續(xù)存在,是因肝細胞仍在不斷地復(fù)制HBsAg。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第40頁!

2．抗HBs

當(dāng)乙型肝炎病毒侵入人體后，刺激人的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫反應(yīng)，這種特異的免疫球蛋白G，就是表面抗體。它可以和表面抗原特異地結(jié)合，然后在體內(nèi)與人體的其他免疫功能共同作用下，可以把病毒清除掉，保護人體不再受乙肝病毒的感染，故稱表面抗體為保護性抗體。一般成人期感染乙型肝炎病毒，可以發(fā)生急性乙型肝炎，也可沒有癥狀，絕大多數(shù)在3～6個月以后才出現(xiàn)表面抗體。檢查出抗-HBs陽性，疾病即已逐漸恢復(fù)。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第41頁!3．HBeAg

HBeAg一般通稱e抗原，它來源于乙型肝炎病毒的核心。其在血清中的出現(xiàn)時間稍后于HBsAg，一般血清HBeAg陽性者，HBsAg亦為陽性。有研究表明，當(dāng)乙肝病毒的前核心區(qū)發(fā)生點突變時，可使得HBeAg無法表達，表現(xiàn)為血清HBeAg或抗HBe測定持續(xù)為陰性，但血清HBsAg或HBVDNA可表現(xiàn)為陽性。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第42頁!4．抗HBe

e抗體是乙型肝炎e抗體的簡稱（抗-HBe），它是由e抗原刺激人體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生出來的特異性抗體，當(dāng)血清HBeAg轉(zhuǎn)陰后，可出現(xiàn)抗HBe，兩者同時陽性較少見。但抗-HBe和抗-HBs不同，e抗體不是保護性抗體，不代表患者有了免疫力。有時雖然檢查出e抗體陽性，但肝細胞內(nèi)仍然可以查出乙型肝炎病毒DNA，表明病毒仍然存在。e抗體出現(xiàn)陽性是病毒復(fù)制降低并且傳染減少的標志，這時病毒顆粒有可能已經(jīng)很少，但并不表示病毒已被消除了。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第43頁!抗HBc可以說是機體感染HBV后在血液中最早出現(xiàn)的特異抗體，在乙型肝炎的急性期呈高滴度，是判斷急性乙型肝炎的重要指標。隨著急性乙肝的恢復(fù)，抗HBcIgM滴度降低乃至消失。如持續(xù)高滴度，則常表明病人乙肝有慢性化傾向。抗HBc不是保護性抗體。抗HBc在血中呈低滴度且與抗HBs同時存在，是既往感染的標志。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第44頁!HBeAg陽性：見于HBV感染的早期，表示血液中含有較多的病毒顆粒，提示肝細胞有進行性損害和高度傳染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于預(yù)測肝炎病情，HBeAg持續(xù)陽性，易轉(zhuǎn)為慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAg均為陽性的孕婦，可以將乙型肝炎病毒傳播給新生兒，其感染的陽性率為70%-90%。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第45頁!乙肝五項的32種組合乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第46頁!乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第47頁!1.2塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。最好使用一次性玻璃試管或真空管采血管；并使用非抗凝標本，肝素抗凝血漿會增加OD值，可能與高濃度肝素具有強大的負電荷能吸附酶標記物不易洗脫有關(guān)；EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第48頁!2、試劑的影響

2.1乙肝兩對半試劑廠家較多；不同廠家出產(chǎn)的試劑靈敏度與特異性存在一定的差別，有的廠家酶標板孔間A值差大于15%；標記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定比較差。使用質(zhì)劣的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽性或假陰性。因此。選擇高質(zhì)量的試劑是保證結(jié)果準確的關(guān)鍵之一。

2.2不同方法學(xué)的檢測試劑，會使兩對半結(jié)果出現(xiàn)一些不同。例如：在實際工作中常用ELISA檢測HBsAg結(jié)果為陰性，而電化學(xué)發(fā)光檢測為陽性。除方法學(xué)的靈敏度外；還存在使用單抗或多克隆抗體試劑的差別。單抗對變異抗原或亞型乙肝標志物檢測存在差異。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第49頁!3.3冼滌是ELISA操作的重要環(huán)節(jié)，手冼條件一致性較差，對結(jié)果影響較大，半自動與全自動冼板機使用不當(dāng)也會影響結(jié)果，血清中殘留的的纖維蛋白絲或洗滌液析出的結(jié)晶易使洗板機針小孔全阻塞或半阻塞狀態(tài)，造成未結(jié)合標記酶洗脫不徹底，導(dǎo)致“花板”造成假陽性或假陰性；所以操作洗板機過程中要不時觀察洗板機針孔內(nèi)洗液的通暢狀況，及時糾正，洗板機不用時應(yīng)用去離子水清冼幾遍。

3.4肉眼判斷結(jié)果時，顯色淺不易觀察，影響結(jié)果的準確性，必須使用酶標儀檢測，以保結(jié)果一致性。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第50頁!5、干擾物質(zhì)的影響

有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。采用56℃30分鐘滅活補體可降低假陽性率，高濃度的AFP（如孕婦），在儲存過程中可能形成二聚體會導(dǎo)致本底過深影響檢測結(jié)果。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第51頁!6.2、為預(yù)防乙肝，部分HBsAg陰性人群在接種乙肝疫苗后的1—2周內(nèi)，血清中可檢出HBsAg成份，形成一過性HBsAg陽性，這可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg.，有方法能夠把它檢出；如電化學(xué)發(fā)光法，建議接種乙肝疫苗后1個月內(nèi)不應(yīng)作HBsAg檢測。

乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第52頁!HBsAb、HBeAg、HBeAb1.取出反應(yīng)板條,設(shè)空白對照1孔（不加任何樣品）、同時設(shè)陰性對照及陽性對照各2孔（分別加入陰性對照及陽性對照各50μL）.其余空加入待測樣品50μL.然后每孔加入酶結(jié)合物1滴（50μL）（空白對照孔不加）,充分混勻,用不干膠片封板,置37℃孵育30分鐘。2.棄去各孔內(nèi)液體,用洗液注滿各孔,靜置10秒鐘（洗板機洗板靜置60秒鐘）,甩干,重復(fù)5次,拍干。3.每孔加顯色劑A，顯色劑B各1滴（50μL）,置37℃反應(yīng)15分鐘。4.每孔加終止液1滴（50μL）。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第53頁!假陰性的原因在HBsAg的測定中，最大的問題是（1）HBsAg含量低于所用方法的測定下限之下。如感染的“窗口期”、急性期后或恢復(fù)期、自限性感染末期的攜帶者等。（2）HBsAg基因的突變。（3）HCV重疊感染對HBV復(fù)制或HBsAg的表達的抑制作用。（4）測定方法所用抗體對HBV不同基因型檢測敏感性的不同。(5)“帶現(xiàn)象”。乙肝五項、梅毒的檢測及應(yīng)用(精減)共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第54頁!

注意事項1.從冷藏環(huán)境中取出反應(yīng)板條,應(yīng)置室溫平衡后方可使用。剩余板條應(yīng)裝入含干燥劑的塑料袋內(nèi)封口。2.封片不能重復(fù)使用。3.不同批號試劑不