遺傳病的治療課件

醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)遺傳病的治療醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)遺傳病的治療藥物治療和飲食控制療法的原則基因治療的概念目的基因轉(zhuǎn)移的方法基因治療的應(yīng)用本章節(jié)重點、難點藥物治療和飲食控制療法的原則本章節(jié)重點、難點如果遺傳病發(fā)展到各種臨床癥狀都已顯現(xiàn)，尤其是器官組織已出現(xiàn)損傷，應(yīng)用外科手術(shù)對病損器官進(jìn)行切除、修補(bǔ)或替換，可以有效改善某些遺傳病的癥狀，減輕病痛。1.手術(shù)治療如果遺傳病發(fā)展到各種臨床癥狀都已顯現(xiàn)，尤其是器官組織已出現(xiàn)損矯正畸形是手術(shù)治療的主要手段，包括對遺傳病所產(chǎn)生的畸形進(jìn)行矯正、修補(bǔ)和切除。手術(shù)修補(bǔ)手術(shù)切除1.手術(shù)治療1.1.矯正畸形矯正畸形是手術(shù)治療的主要手段，包括對遺傳病所產(chǎn)生的畸形進(jìn)行矯腎移植骨髓移植胰島細(xì)胞移植肝移植1.手術(shù)治療1.2.組織和器官移植腎移植骨髓移植胰島細(xì)胞移植肝移植1.手術(shù)治療原則：補(bǔ)其所缺，去其所余出生前（產(chǎn)前）治療癥狀前治療現(xiàn)癥病人治療2.藥物治療原則：補(bǔ)其所缺，去其所余出生前（產(chǎn)前）治療癥狀前治療2.原則：禁其所忌針對因代謝過程紊亂而造成的底物或前體物質(zhì)堆積的情況，制定特殊的食譜或配以藥物，控制底物或前體物質(zhì)的攝入量，降低代謝物的堆積。3.飲食控制療法原則：禁其所忌針對因代謝過程紊亂而造成的底物或前體物質(zhì)堆積的苯丙酮尿癥“Shewasanidiotandunabletostand,walk,ortalk;sheshowednointerestinherfoodorsurroundings,andspenthertimegroaning,crying,andbangingherhead”.BickelH.ExpMedSurg.1954;12(1):114-1173.飲食控制療法苯丙酮尿癥“Shewasanidiotanduna遺傳病的治療課件苯丙氨酸水平檢測1歲以內(nèi)：每周一次1~12歲：每月兩次12歲以上：每月一次3.飲食控制療法苯丙酮尿癥苯丙氨酸水平檢測1歲以內(nèi)：每周一次3.飲食控制療法苯丙酮苯丙氨酸水平檢測3.飲食控制療法苯丙酮尿癥Guthrietest苯丙氨酸水平檢測3.飲食控制療法苯丙酮尿癥Guthrie苯丙氨酸水平檢測3.飲食控制療法苯丙酮尿癥Guthrietest苯丙氨酸水平檢測3.飲食控制療法苯丙酮尿癥Guthrie苯丙酮尿癥與懷孕婦女92%：智力低下73%：小頭畸形12%：先天性心臟病3.飲食控制療法苯丙酮尿癥苯丙酮尿癥與懷孕婦女92%：智力低下3.飲食控制療法苯丙基因治療（genetherapy）運用DNA重組技術(shù)設(shè)法修復(fù)患者細(xì)胞中有缺陷的基因，使細(xì)胞恢復(fù)正常功能而達(dá)到治療遺傳病的目的。4.基因治療基因治療（genetherapy）運用DNA重組技術(shù)設(shè)法修基因修正(genecorrection)：定點導(dǎo)入外源正?；颍嬗腥毕莸幕?，對靶細(xì)胞基因組無任何改變。屬直接治療?；蛱砑?geneaugmentation)：非定點導(dǎo)入外源正?；?，而沒有去除或修復(fù)有缺陷的基因。屬間接治療。4.基因治療4.1.基因治療的策略基因修正(genecorrection)：定點導(dǎo)入外源正?；蛑委煹幕痉绞襟w細(xì)胞基因治療：使患者癥狀消失或得到緩解，但有害基因仍能傳給后代。4.基因治療4.1.基因治療的策略基因治療的基本方式體細(xì)胞基因治療：使患者癥狀消失或得到緩解，4.基因治療4.1.基因治療的策略基因治療的基本方式生殖細(xì)胞基因治療：可根治遺傳病，使有害基因不再在人群中散布。4.基因治療基因治療的基本方式生殖細(xì)胞基因治療：可根治遺基因治療的關(guān)鍵外源基因的安全導(dǎo)入外源基因高效正確的表達(dá)4.基因治療4.1.基因治療的策略基因治療的關(guān)鍵外源基因的安全導(dǎo)入4.基因治療基因治療的條件疾病的發(fā)病機(jī)制及相應(yīng)基因的結(jié)構(gòu)功能清楚已克隆正?；?，明確該基因表達(dá)與調(diào)控機(jī)制導(dǎo)入基因具有合適的受體細(xì)胞，并能有效表達(dá)具有安全有效的轉(zhuǎn)運載體和方法4.基因治療4.1.基因治療的策略基因治療的條件疾病的發(fā)病機(jī)制及相應(yīng)基因的結(jié)構(gòu)功能清楚4.直接注射法物理方法4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移直接注射法物理方法4.基因治療電穿孔法微粒子轟擊法直接注射法物理方法4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移電穿孔法微粒子轟擊法直接注射法物理方法4.基因治療CaCl2共沉淀法化學(xué)方法4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移CaCl2共沉淀法化學(xué)方法4.基因治療膜融合法人工脂質(zhì)體紅細(xì)胞影泡微細(xì)胞原生質(zhì)球4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移膜融合法人工脂質(zhì)體4.基因治療受體載體轉(zhuǎn)移法4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移受體載體轉(zhuǎn)移法4.基因治療同源重組法（homologousrecombination）將外源性的目的基因定位導(dǎo)入受體細(xì)胞的染色體上，通過與該座位的同源序列交換，使外源性DNA片段取代原位點上的缺陷基因，達(dá)到修復(fù)缺陷基因的目的。4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移同源重組法（homologousrecombinationδβXbaIXbaIBstI11.1kbΔβXbaIBstIneo13.1kbBstIδΔβneoβXbaIBstIXbaI

BstIXbaI16.5kb7.7kb4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移同源重組法（homologousrecombination）δβXbaIXbaIBstI11.1kbΔβXba病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)移法以病毒為載體，將外源性目的基因通過基因重組技術(shù)，組裝到病毒載體上，并使重組病毒感染受體宿主細(xì)胞，完成基因轉(zhuǎn)移。4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)移法以病毒為載體，將外源性目的基因通過基因重組技術(shù)逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrovirus）

優(yōu)點能高效轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，轉(zhuǎn)染率可達(dá)100％宿主范圍廣泛可轉(zhuǎn)染大量細(xì)胞并長期停留，病毒基因和所載的外源基因都能表達(dá)4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrovirus）優(yōu)點能高效轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，

缺點病毒容量有限（7kb）隨機(jī)插入有致癌作用4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrovirus）缺點病毒容量有限（7kb）4.基因治療逆轉(zhuǎn)錄病毒（r小鼠白血病病毒（Mo-MLV）5

LTRLTR3U3RU5U3RU5gagpolenvExogenousgene4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrovirus）小鼠白血病病毒（Mo-MLV）5LTR逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的包裝4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrovirus）逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的包裝4.基因治療逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrov腺病毒（Adenovirus,AV）

優(yōu)點宿主范圍廣；插入DNA片段較長病毒顆粒穩(wěn)定，易于濃縮和純化不整合，減少插入突變的潛在危險4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移腺病毒（Adenovirus,AV）優(yōu)點宿主范圍廣；插入

缺點需反復(fù)給藥具有免疫原性4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移腺病毒（Adenovirus,AV）缺點需反復(fù)給藥4.基因治療腺病毒（Adenovirus4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.2.靶細(xì)胞的選擇4.基因治療易于取材便于體外培養(yǎng)便于進(jìn)行遺傳技術(shù)操作安全回輸4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.2.靶細(xì)胞的選擇易于取材便于體外培養(yǎng)4.基因治療骨髓干細(xì)胞外周血Ｔ淋巴細(xì)胞皮膚成纖維細(xì)胞4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.2.靶細(xì)胞的選擇骨髓干細(xì)胞4.基因治療應(yīng)用DNA和RNA的堿基互補(bǔ)可形成同源或異源雙鏈的原理，人工合成反義RNA(或DNA)，和mRNA互補(bǔ)，使其滅活，阻止其翻譯成蛋白質(zhì)，達(dá)到治療疾病的目的。4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.1.反義寡核苷酸技術(shù)應(yīng)用DNA和RNA的堿基互補(bǔ)可形成同源或異源雙鏈的原理，人工DNAmRNAAntisenseRNA4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.1.反義寡核苷酸技術(shù)DNAmRNAAntisenseRNA4.基因治療反義RNA表達(dá)載體反義RNA(或DNA)的體外顯微注射用脂質(zhì)體運送反義RNA其它方法：CaCl2法；細(xì)胞打孔法；逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.1.反義寡核苷酸技術(shù)反義RNA表達(dá)載體4.基因治療自殺基因（suicidegene）所編碼的酶可將一種無害的藥物（前藥物）轉(zhuǎn)化成有毒性的底物，使細(xì)胞DNA不能復(fù)制而死亡。4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.2.“自殺基因”療法自殺基因（suicidegene）所編碼的酶可將一種無害的單純皰疹病毒胸腺嘧啶激酶（HSV1TK）4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.2.“自殺基因”療法單純皰疹病毒胸腺嘧啶激酶（HSV1TK）4.基因治療4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.2.“自殺基因”療法4.基因治療4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.2.“自殺基因”療法4.基因治療旁觀者效應(yīng)（by-standereffect）由前藥物轉(zhuǎn)變的毒性物質(zhì)向四周擴(kuò)散并殺死周圍腫瘤細(xì)胞的現(xiàn)象。4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.2.“自殺基因”療法旁觀者效應(yīng)（by-standereffect）由前藥物轉(zhuǎn)變4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.2.“自殺基因”療法旁觀者效應(yīng)（by-standereffect）4.基因治療旁觀者效應(yīng)（by-standereffec4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.2.“自殺基因”療法旁觀者效應(yīng)（by-standereffect）4.利用基因重組技術(shù)，將已被克隆的多抗藥性（MDR）基因?qū)朐煅杉?xì)胞，使其衍生的白細(xì)胞對化療藥物的耐受性增強(qiáng)，從而加大化療藥物劑量或延長化療藥物使用時間達(dá)到治療腫瘤的目的。4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.3.多抗藥基因療法利用基因重組技術(shù)，將已被克隆的多抗藥性（MDR）基因?qū)朐煅?.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.3.多抗藥基因療法4.基因治療4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.3.多抗藥基因療法基因替代療法野生型抑癌基因的失活和腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，將野生型抑癌基因?qū)肽[瘤細(xì)胞，替代和補(bǔ)償有缺陷的抑癌基因，以抑制腫瘤的生長或逆轉(zhuǎn)其表型。4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.4.抑癌基因療法基因替代療法野生型抑癌基因的失活和腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，將野生基因替代療法4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.4.抑癌基因療法基因替代療法4.基因治療ADA缺乏癥為AR致死性疾病，患者由于腺苷酸脫氨酶（ADA）缺乏，導(dǎo)致脫氨腺苷酸增多，改變甲基化能力，產(chǎn)生毒性效應(yīng)，使Ｔ淋巴細(xì)胞受損，機(jī)體可出現(xiàn)反復(fù)感染等癥狀。4.基因治療4.4.基因治療的臨床應(yīng)用4.4.1.ADA缺乏癥ADA缺乏癥為AR致死性疾病，患者由于腺苷酸脫氨酶（ADA）FrenchAnderson(NIH)September14,1990Retrovirus(Mo-MLV)LTRADASV40neoLTR4.基因治療4.4.基因治療的臨床應(yīng)用4.4.1.ADA缺乏癥FrenchAnderson(NIH)SeptemberAshantideSilvaInjectionsrepeated7timesinfirst10.5monthsADA:1%25%4.基因治療4.4.基因治療的臨床應(yīng)用4.4.1.ADA缺乏癥AshantideSilvaInjectionsrepXR，患者凝血因子Ⅸ缺乏Ⅸ因子基因定位在Xq26.3-q27.2臨床表現(xiàn)：易出血，凝血時間長，輕傷、小手術(shù)后常出血不止發(fā)病率為1/300004.基因治療4.4.基因治療的臨床應(yīng)用4.4.2.乙型血友病XR，患者凝血因子Ⅸ缺乏4.基因治療薛京倫（復(fù)旦大學(xué)）1991，逆轉(zhuǎn)錄病毒LTRFⅨSV40neoLTR4.基因治療4.4.基因治療的臨床應(yīng)用4.4.2.乙型血友病薛京倫（復(fù)旦大學(xué)）1991，逆轉(zhuǎn)錄病毒LTRFⅨSV40ne2003，rAAV2-hF.IX重組AAV-2人凝血因子Ⅸ注射液4.基因治療4.4.基因治療的臨床應(yīng)用4.4.2.乙型血友病薛京倫（復(fù)旦大學(xué)）1991，逆轉(zhuǎn)錄病毒2003，rAAV2-hF.IX重組AAV-2人凝血因子Ⅸ注細(xì)胞因子1984~1987，淋巴激活的殺傷細(xì)胞(LAK)1986，腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(TIL)結(jié)合IL-21991，腫瘤壞死因子(TNF)治療黑色素瘤4.基因治療4.4.基因治療的臨床應(yīng)用4.4.3.腫瘤的基因治療細(xì)胞因子1984~1987，淋巴激活的殺傷細(xì)胞(LAK)19“自殺基因”1992，HSV-TK和GCV4.基因治療4.4.基因治療的臨床應(yīng)用4.4.3.腫瘤的基因治療“自殺基因”1992，HSV-TK和GCV4.基因治pRB，p53，p16，p21，p27腫瘤抑制基因4.基因治療4.4.基因治療的臨床應(yīng)用4.4.3.腫瘤的基因治療pRB，p53，p16，p21，p27腫瘤抑制基因4.基導(dǎo)入基因的持續(xù)表達(dá)導(dǎo)入基因的高效表達(dá)安全性問題JesseGelsinger:18yr-oldfromArizona,diedon9/17/1999,4dayaftergenetransferinPennOTCDtrial.4.基因治療4.5.基因治療存在的問題及解決方法導(dǎo)入基因的持續(xù)表達(dá)JesseGelsinger:18y藥物治療和飲食控制療法的原則基因治療的概念目的基因轉(zhuǎn)移的方法基因治療的應(yīng)用本章節(jié)重點、難點藥物治療和飲食控制療法的原則本章節(jié)重點、難點醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)遺傳病的治療醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)遺傳病的治療藥物治療和飲食控制療法的原則基因治療的概念目的基因轉(zhuǎn)移的方法基因治療的應(yīng)用本章節(jié)重點、難點藥物治療和飲食控制療法的原則本章節(jié)重點、難點如果遺傳病發(fā)展到各種臨床癥狀都已顯現(xiàn)，尤其是器官組織已出現(xiàn)損傷，應(yīng)用外科手術(shù)對病損器官進(jìn)行切除、修補(bǔ)或替換，可以有效改善某些遺傳病的癥狀，減輕病痛。1.手術(shù)治療如果遺傳病發(fā)展到各種臨床癥狀都已顯現(xiàn)，尤其是器官組織已出現(xiàn)損矯正畸形是手術(shù)治療的主要手段，包括對遺傳病所產(chǎn)生的畸形進(jìn)行矯正、修補(bǔ)和切除。手術(shù)修補(bǔ)手術(shù)切除1.手術(shù)治療1.1.矯正畸形矯正畸形是手術(shù)治療的主要手段，包括對遺傳病所產(chǎn)生的畸形進(jìn)行矯腎移植骨髓移植胰島細(xì)胞移植肝移植1.手術(shù)治療1.2.組織和器官移植腎移植骨髓移植胰島細(xì)胞移植肝移植1.手術(shù)治療原則：補(bǔ)其所缺，去其所余出生前（產(chǎn)前）治療癥狀前治療現(xiàn)癥病人治療2.藥物治療原則：補(bǔ)其所缺，去其所余出生前（產(chǎn)前）治療癥狀前治療2.原則：禁其所忌針對因代謝過程紊亂而造成的底物或前體物質(zhì)堆積的情況，制定特殊的食譜或配以藥物，控制底物或前體物質(zhì)的攝入量，降低代謝物的堆積。3.飲食控制療法原則：禁其所忌針對因代謝過程紊亂而造成的底物或前體物質(zhì)堆積的苯丙酮尿癥“Shewasanidiotandunabletostand,walk,ortalk;sheshowednointerestinherfoodorsurroundings,andspenthertimegroaning,crying,andbangingherhead”.BickelH.ExpMedSurg.1954;12(1):114-1173.飲食控制療法苯丙酮尿癥“Shewasanidiotanduna遺傳病的治療課件苯丙氨酸水平檢測1歲以內(nèi)：每周一次1~12歲：每月兩次12歲以上：每月一次3.飲食控制療法苯丙酮尿癥苯丙氨酸水平檢測1歲以內(nèi)：每周一次3.飲食控制療法苯丙酮苯丙氨酸水平檢測3.飲食控制療法苯丙酮尿癥Guthrietest苯丙氨酸水平檢測3.飲食控制療法苯丙酮尿癥Guthrie苯丙氨酸水平檢測3.飲食控制療法苯丙酮尿癥Guthrietest苯丙氨酸水平檢測3.飲食控制療法苯丙酮尿癥Guthrie苯丙酮尿癥與懷孕婦女92%：智力低下73%：小頭畸形12%：先天性心臟病3.飲食控制療法苯丙酮尿癥苯丙酮尿癥與懷孕婦女92%：智力低下3.飲食控制療法苯丙基因治療（genetherapy）運用DNA重組技術(shù)設(shè)法修復(fù)患者細(xì)胞中有缺陷的基因，使細(xì)胞恢復(fù)正常功能而達(dá)到治療遺傳病的目的。4.基因治療基因治療（genetherapy）運用DNA重組技術(shù)設(shè)法修基因修正(genecorrection)：定點導(dǎo)入外源正常基因，代替有缺陷的基因，對靶細(xì)胞基因組無任何改變。屬直接治療?；蛱砑?geneaugmentation)：非定點導(dǎo)入外源正常基因，而沒有去除或修復(fù)有缺陷的基因。屬間接治療。4.基因治療4.1.基因治療的策略基因修正(genecorrection)：定點導(dǎo)入外源正?；蛑委煹幕痉绞襟w細(xì)胞基因治療：使患者癥狀消失或得到緩解，但有害基因仍能傳給后代。4.基因治療4.1.基因治療的策略基因治療的基本方式體細(xì)胞基因治療：使患者癥狀消失或得到緩解，4.基因治療4.1.基因治療的策略基因治療的基本方式生殖細(xì)胞基因治療：可根治遺傳病，使有害基因不再在人群中散布。4.基因治療基因治療的基本方式生殖細(xì)胞基因治療：可根治遺基因治療的關(guān)鍵外源基因的安全導(dǎo)入外源基因高效正確的表達(dá)4.基因治療4.1.基因治療的策略基因治療的關(guān)鍵外源基因的安全導(dǎo)入4.基因治療基因治療的條件疾病的發(fā)病機(jī)制及相應(yīng)基因的結(jié)構(gòu)功能清楚已克隆正常基因，明確該基因表達(dá)與調(diào)控機(jī)制導(dǎo)入基因具有合適的受體細(xì)胞，并能有效表達(dá)具有安全有效的轉(zhuǎn)運載體和方法4.基因治療4.1.基因治療的策略基因治療的條件疾病的發(fā)病機(jī)制及相應(yīng)基因的結(jié)構(gòu)功能清楚4.直接注射法物理方法4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移直接注射法物理方法4.基因治療電穿孔法微粒子轟擊法直接注射法物理方法4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移電穿孔法微粒子轟擊法直接注射法物理方法4.基因治療CaCl2共沉淀法化學(xué)方法4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移CaCl2共沉淀法化學(xué)方法4.基因治療膜融合法人工脂質(zhì)體紅細(xì)胞影泡微細(xì)胞原生質(zhì)球4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移膜融合法人工脂質(zhì)體4.基因治療受體載體轉(zhuǎn)移法4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移受體載體轉(zhuǎn)移法4.基因治療同源重組法（homologousrecombination）將外源性的目的基因定位導(dǎo)入受體細(xì)胞的染色體上，通過與該座位的同源序列交換，使外源性DNA片段取代原位點上的缺陷基因，達(dá)到修復(fù)缺陷基因的目的。4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移同源重組法（homologousrecombinationδβXbaIXbaIBstI11.1kbΔβXbaIBstIneo13.1kbBstIδΔβneoβXbaIBstIXbaI

BstIXbaI16.5kb7.7kb4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移同源重組法（homologousrecombination）δβXbaIXbaIBstI11.1kbΔβXba病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)移法以病毒為載體，將外源性目的基因通過基因重組技術(shù)，組裝到病毒載體上，并使重組病毒感染受體宿主細(xì)胞，完成基因轉(zhuǎn)移。4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)移法以病毒為載體，將外源性目的基因通過基因重組技術(shù)逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrovirus）

優(yōu)點能高效轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，轉(zhuǎn)染率可達(dá)100％宿主范圍廣泛可轉(zhuǎn)染大量細(xì)胞并長期停留，病毒基因和所載的外源基因都能表達(dá)4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrovirus）優(yōu)點能高效轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，

缺點病毒容量有限（7kb）隨機(jī)插入有致癌作用4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrovirus）缺點病毒容量有限（7kb）4.基因治療逆轉(zhuǎn)錄病毒（r小鼠白血病病毒（Mo-MLV）5

LTRLTR3U3RU5U3RU5gagpolenvExogenousgene4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrovirus）小鼠白血病病毒（Mo-MLV）5LTR逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的包裝4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrovirus）逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的包裝4.基因治療逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrov腺病毒（Adenovirus,AV）

優(yōu)點宿主范圍廣；插入DNA片段較長病毒顆粒穩(wěn)定，易于濃縮和純化不整合，減少插入突變的潛在危險4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移腺病毒（Adenovirus,AV）優(yōu)點宿主范圍廣；插入

缺點需反復(fù)給藥具有免疫原性4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.1.目的基因的轉(zhuǎn)移腺病毒（Adenovirus,AV）缺點需反復(fù)給藥4.基因治療腺病毒（Adenovirus4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.2.靶細(xì)胞的選擇4.基因治療易于取材便于體外培養(yǎng)便于進(jìn)行遺傳技術(shù)操作安全回輸4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.2.靶細(xì)胞的選擇易于取材便于體外培養(yǎng)4.基因治療骨髓干細(xì)胞外周血Ｔ淋巴細(xì)胞皮膚成纖維細(xì)胞4.基因治療4.2.轉(zhuǎn)移的方法4.2.2.靶細(xì)胞的選擇骨髓干細(xì)胞4.基因治療應(yīng)用DNA和RNA的堿基互補(bǔ)可形成同源或異源雙鏈的原理，人工合成反義RNA(或DNA)，和mRNA互補(bǔ)，使其滅活，阻止其翻譯成蛋白質(zhì)，達(dá)到治療疾病的目的。4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.1.反義寡核苷酸技術(shù)應(yīng)用DNA和RNA的堿基互補(bǔ)可形成同源或異源雙鏈的原理，人工DNAmRNAAntisenseRNA4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.1.反義寡核苷酸技術(shù)DNAmRNAAntisenseRNA4.基因治療反義RNA表達(dá)載體反義RNA(或DNA)的體外顯微注射用脂質(zhì)體運送反義RNA其它方法：CaCl2法；細(xì)胞打孔法；逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.1.反義寡核苷酸技術(shù)反義RNA表達(dá)載體4.基因治療自殺基因（suicidegene）所編碼的酶可將一種無害的藥物（前藥物）轉(zhuǎn)化成有毒性的底物，使細(xì)胞DNA不能復(fù)制而死亡。4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.2.“自殺基因”療法自殺基因（suicidegene）所編碼的酶可將一種無害的單純皰疹病毒胸腺嘧啶激酶（HSV1TK）4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.2.“自殺基因”療法單純皰疹病毒胸腺嘧啶激酶（HSV1TK）4.基因治療4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.2.“自殺基因”療法4.基因治療4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.2.“自殺基因”療法4.基因治療旁觀者效應(yīng)（by-standereffect）由前藥物轉(zhuǎn)變的毒性物質(zhì)向四周擴(kuò)散并殺死周圍腫瘤細(xì)胞的現(xiàn)象。4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.2.“自殺基因”療法旁觀者效應(yīng)（by-standereffect）由前藥物轉(zhuǎn)變4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.2.“自殺基因”療法旁觀者效應(yīng)（by-standereffect）4.基因治療旁觀者效應(yīng)（by-standereffec4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.2.“自殺基因”療法旁觀者效應(yīng)（by-standereffect）4.利用基因重組技術(shù)，將已被克隆的多抗藥性（MDR）基因?qū)朐煅杉?xì)胞，使其衍生的白細(xì)胞對化療藥物的耐受性增強(qiáng)，從而加大化療藥物劑量或延長化療藥物使用時間達(dá)到治療腫瘤的目的。4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.3.多抗藥基因療法利用基因重組技術(shù)，將已被克隆的多抗藥性（MDR）基因?qū)朐煅?.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.3.多抗藥基因療法4.基因治療4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.3.多抗藥基因療法基因替代療法野生型抑癌基因的失活和腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，將野生型抑癌基因?qū)肽[瘤細(xì)胞，替代和補(bǔ)償有缺陷的抑癌基因，以抑制腫瘤的生長或逆轉(zhuǎn)其表型。4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.4.抑癌基因療法基因替代療法野生型抑癌基因的失活和腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，將野生基因替代療法4.基因治療4.3.基因治療的方法4.3.4.抑癌基因療法基因替代療法4.基因治療ADA缺乏癥為AR致死性疾病，患者由于腺苷酸脫氨酶（