藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制課件

藥品生產(chǎn)企業(yè)

微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制

藥品生產(chǎn)企業(yè)

微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)

內(nèi)容微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范的控制微生物檢驗(yàn)方法的控制內(nèi)容微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范的控制

相關(guān)法規(guī)要求GMP(2010年修訂版)中國藥典2010版《藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則》中國藥典2010版《微生物限度檢查法》中國藥典2010版《無菌檢查法》中國藥典2010版《微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則》中國藥典2010版《藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則》相關(guān)法規(guī)要求GMP(2010年修訂版)

應(yīng)用范圍藥品生產(chǎn)所使用的原料及制劑都必須遵守法規(guī)要求藥品生產(chǎn)及銷售都必須符合法律要求。微生物質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)可能會因地域及應(yīng)用方式的不同而不同。各國藥典中都有相應(yīng)微生物試驗(yàn)的詳細(xì)要求。應(yīng)用范圍藥品生產(chǎn)所使用的原料及制劑都必須遵守法規(guī)要求

原則必須使用經(jīng)驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法嚴(yán)格按照藥品微生物試驗(yàn)室規(guī)范要求進(jìn)行試驗(yàn)(實(shí)驗(yàn)室控制系統(tǒng)GMP實(shí)施指南）原則必須使用經(jīng)驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法2010版GMP第六十四條第六十六條 第六十九條 第二百二十六條 第二百三十三條 2010版GMP第六十四條

藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范包括以下幾個方面：人員培養(yǎng)基菌種實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行設(shè)備、文件、實(shí)驗(yàn)記錄，結(jié)果的判斷等

藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范包括以下幾個方

人員人員資質(zhì)培訓(xùn)要求人員人員資質(zhì)實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行具有良好微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范和實(shí)驗(yàn)室安全的要求。既要最大可能防止微生物的污染，又要防止檢驗(yàn)過程對環(huán)境和人員造成危害。合適的規(guī)劃及活動區(qū)域的合理區(qū)分將提高微生物實(shí)驗(yàn)室操作的可靠性。實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行具有良好微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范和實(shí)驗(yàn)室安全的實(shí)驗(yàn)室的布局檢驗(yàn)潔凈區(qū)菌種處理、微生物鑒別、陽性對照實(shí)驗(yàn)室（P2實(shí)驗(yàn)室）培養(yǎng)室實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察區(qū)培養(yǎng)基及實(shí)驗(yàn)用具準(zhǔn)備（包括滅菌）區(qū)樣品接收和儲藏區(qū)標(biāo)準(zhǔn)菌株儲藏區(qū)污染物處理區(qū)文檔處理區(qū)等輔助區(qū)域?qū)嶒?yàn)室的布局

實(shí)驗(yàn)室的運(yùn)行人流物流水系統(tǒng)潔凈裝修實(shí)驗(yàn)室管理：環(huán)境監(jiān)測、清潔消毒、制度及標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的制定實(shí)驗(yàn)室的運(yùn)行人流

實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行總結(jié)實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行總結(jié)

設(shè)備實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備與檢驗(yàn)?zāi)芰凸ぷ髁肯噙m應(yīng)的的儀器設(shè)備。完成相應(yīng)的檢定，校準(zhǔn)，驗(yàn)證，確認(rèn)。形成相應(yīng)的操作，維護(hù)和保養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。使用要有記錄。設(shè)備實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備與檢驗(yàn)?zāi)芰凸ぷ髁肯噙m應(yīng)的的儀器設(shè)備。

設(shè)備無菌隔離器（如使用）、生物安全柜實(shí)驗(yàn)室用層流臺培養(yǎng)箱蒸汽滅菌柜、干熱滅菌柜空調(diào)高效過濾器其他滅菌消毒方式設(shè)備無菌隔離器（如使用）、生物安全柜

設(shè)備

重要的儀器設(shè)備，應(yīng)由專人負(fù)責(zé)對于培養(yǎng)箱、冰箱、高壓滅菌鍋對關(guān)鍵參數(shù)（如溫度、壓力）和記錄（有條件的情況下盡量使用自動記錄裝置），如果發(fā)生偏差，應(yīng)評估對以前的檢測結(jié)果造成的影響并采取必要的糾正措施。設(shè)備重要的儀器設(shè)備，應(yīng)由專人負(fù)責(zé)

設(shè)備

容易污染微生物的儀器設(shè)備如水浴鍋、培養(yǎng)箱、冰箱和生物安全柜等應(yīng)定期進(jìn)行清潔和消毒。對試驗(yàn)需用的無菌器具應(yīng)有明確標(biāo)識，實(shí)施正確的清洗、滅菌措施，并形成相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。設(shè)備容易污染微生物的儀器設(shè)備如水浴鍋、

培養(yǎng)基培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。培養(yǎng)基培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。

培養(yǎng)基培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的儲藏質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基培養(yǎng)基的制備

菌種

微生物實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)菌株可能是最敏感的，因?yàn)樗鼈兊纳锘钚院吞匦砸蕾囉诤线m的試驗(yàn)操作和貯藏條件。實(shí)驗(yàn)室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備菌株是微生物試驗(yàn)結(jié)果一致性的重要保證。試驗(yàn)菌種應(yīng)是從國家菌種中心獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌種，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后保存。菌種微生物實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)菌株可能是最敏感

菌種保藏機(jī)構(gòu)

中國菌種保藏管理委員會（CCCCM）

成立于1979年。下設(shè)7個菌種保藏管理中心及有關(guān)專業(yè)實(shí)驗(yàn)室，共12個單位實(shí)行統(tǒng)一領(lǐng)導(dǎo)，按專業(yè)分工管理。菌種保藏機(jī)構(gòu)

中國菌種保藏管理委員會（CC普通微生物菌種保藏管理中心（CCGMC）中國科學(xué)院微生物研究所中國科學(xué)院武漢病毒研究所農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心（ACCC）中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心（CMCC）普通微生物菌種保藏管理中心（CCGMC）中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所中國藥品生物制品檢定所中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所工業(yè)微生物菌種保藏管理中心（CICC）中國食品發(fā)酵工業(yè)科學(xué)研究所抗生素菌種保藏管理中心（CACC）中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)用生物技術(shù)研究所中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所四川抗生素研究所華北制藥廠抗生素研究所獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心（CVCC）農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)藥品監(jiān)察所林業(yè)微生物菌種保藏管理中心（CFCC）中國林業(yè)科學(xué)院專利微生物菌種保藏管理中心（ACCC）武漢大學(xué)四川抗生素研究所

國外的菌種保藏機(jī)構(gòu)世界菌種保藏聯(lián)合會（WFCC）美國標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏所（ATCC）美國農(nóng)業(yè)部北部地區(qū)研究實(shí)驗(yàn)室（NRRL）英國國立標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏所（NCTC）英國國際真菌研究所（CMI）荷蘭真菌中心保藏所（CBS）日本微生物菌種保藏聯(lián)合會（JFCC）國外的菌種保藏機(jī)構(gòu)世界菌種保藏聯(lián)合會（WFCC）

菌種標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活培養(yǎng)物的制備工作菌株的傳代次數(shù)菌種的管理文件及記錄菌種標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活菌種的管理

1、使用菌種的單位，應(yīng)具備從事微生物工作的條件和設(shè)備。菌種應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理，管理人員應(yīng)具有微生物專業(yè)知識和技術(shù)水平，并應(yīng)具有較強(qiáng)的責(zé)任心。

2、實(shí)驗(yàn)室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度；包括：每支菌種標(biāo)注名稱、標(biāo)準(zhǔn)號、接種日期、傳代次數(shù)、進(jìn)出、收集、貯藏、保存、確認(rèn)試驗(yàn)以及銷毀的記錄、標(biāo)準(zhǔn)菌種的申購記錄、從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株操作記錄，如菌種定期轉(zhuǎn)種傳代，鑒定（純度、特性）、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件、菌種保存的位置和條件及其它需要的程序。菌種的管理1、使用菌種的單位，應(yīng)具備從事微生物

3、菌種應(yīng)冷藏或冷凍保存，保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發(fā)性藥品，放置菌種應(yīng)有專用的冰箱，應(yīng)上鎖管理。

4、由專人按操作規(guī)程和有關(guān)要求定期進(jìn)行傳代，并定期對保存的菌種進(jìn)行檢查，一般每年1～2次，（或定期更換凍干菌種）。發(fā)現(xiàn)菌種的異常情況應(yīng)及時檢查。一旦發(fā)現(xiàn)菌種污染和變異現(xiàn)象，應(yīng)立即報告、研究處理。尤其長期保存時。3、菌種應(yīng)冷藏或冷凍保存，保存菌種的冰箱不得放

5、菌種的來源、接收、傳代、分離、復(fù)壯、使用和鑒定等均應(yīng)做好詳細(xì)記錄。

6、菌種不得隨意帶出實(shí)驗(yàn)室，外單位索取、購買應(yīng)有證明和登記登記，并包裝嚴(yán)密。菌種處理應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行，滅菌處理應(yīng)有詳細(xì)記錄。5、菌種的來源、接收、傳代、分離、復(fù)壯、使用藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制課件

文件

文件應(yīng)當(dāng)充分表明實(shí)驗(yàn)是在實(shí)驗(yàn)室按可控的檢查法進(jìn)行的文件文件應(yīng)當(dāng)充分表明實(shí)驗(yàn)是在實(shí)驗(yàn)室按可

文件

人員培訓(xùn)和資格確認(rèn)設(shè)備驗(yàn)收；驗(yàn)證；檢定（或校準(zhǔn)期間核查）和維修設(shè)備使用中的運(yùn)行狀態(tài)（設(shè)備的關(guān)鍵參數(shù)）培養(yǎng)基制備、儲存和質(zhì)量控制檢驗(yàn)規(guī)程中的關(guān)鍵步驟數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果計算的確認(rèn)質(zhì)量責(zé)任人對實(shí)驗(yàn)報告的評估數(shù)據(jù)偏離的調(diào)查文件人員培訓(xùn)和資格確認(rèn)文件

每一個進(jìn)行檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室必須建立并遵守質(zhì)量保證（QA）的政策和程序，用所建立的QA政策和程序來監(jiān)測和評價整個檢驗(yàn)過程。所有QA活動都必須文件化。文件實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性依賴于實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行。標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程應(yīng)指出如何進(jìn)行正確的實(shí)驗(yàn)操作。實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)包含所有關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)，以便確認(rèn)數(shù)據(jù)的完整性。實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性依賴于實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)記錄正確的試驗(yàn)研究和實(shí)驗(yàn)記錄是微生物試驗(yàn)成功的關(guān)鍵。要使實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信最基本的原則是試驗(yàn)應(yīng)按SOP規(guī)定的內(nèi)容進(jìn)行操作；如正確的試驗(yàn)操作、完整的實(shí)驗(yàn)記錄，以便確認(rèn)數(shù)據(jù)的完整性。

實(shí)驗(yàn)記錄正確的試驗(yàn)研究和實(shí)驗(yàn)記錄是微生物試驗(yàn)成功的關(guān)鍵。要使結(jié)果的判斷微生物實(shí)驗(yàn)的特殊性影響結(jié)果觀察的條件和因素不符合要求和規(guī)定的原因調(diào)查異常結(jié)果的分析重新抽樣復(fù)檢結(jié)果的判斷微生物實(shí)驗(yàn)的特殊性微生物實(shí)驗(yàn)的特殊性微生物實(shí)驗(yàn)的特殊性影響試驗(yàn)結(jié)果的因素

藥品微生物檢驗(yàn)較為特殊，因是活微生物，受到外界影響因素較，因此檢驗(yàn)結(jié)果分析比較困難，其影響因素有以下幾方面：

1、微生物在自然界中普遍存在。

2、實(shí)驗(yàn)人員在樣品處理過程或其它操作步驟可能受微生物污染。

3、微生物在樣品或環(huán)境中分布不均勻等。影響試驗(yàn)結(jié)果的因素藥品微生物檢驗(yàn)較為特殊異常結(jié)果分析

以上原因造成試驗(yàn)結(jié)果的誤差大和重現(xiàn)性差，因此，在試驗(yàn)時應(yīng)盡最大程度的避免外來的污染。應(yīng)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行全面分析，如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，應(yīng)立即通知實(shí)驗(yàn)室管理人員，組織進(jìn)行原因調(diào)查分析。異常結(jié)果分析分析內(nèi)容包括：⑴實(shí)驗(yàn)室環(huán)境⑵抽樣區(qū)的防護(hù)條件⑶樣品本身是否具有影響微生物存活或繁殖的成分和作用⑷實(shí)驗(yàn)操作是否規(guī)范以上都是評價實(shí)驗(yàn)結(jié)果真實(shí)性的重要依據(jù)。藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制課件如果依據(jù)分析調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)全過程中任何一個環(huán)節(jié)有錯誤，可判實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效，那么應(yīng)重新制定實(shí)驗(yàn)方案，按照正確的方案進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在這種情況下，應(yīng)特別認(rèn)真對試驗(yàn)過程及正確的試驗(yàn)操作進(jìn)行監(jiān)控，實(shí)驗(yàn)室必須認(rèn)可復(fù)試程序，如果需要，重新抽樣，但抽樣方法不能影響不符合規(guī)定結(jié)果的分析調(diào)查，這種情況必須詳細(xì)記錄。如果依據(jù)分析調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)全過程中任何一個環(huán)節(jié)有錯誤，可微生物限度檢查法細(xì)菌數(shù)霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)控制菌檢查方法的驗(yàn)證微生物限度標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果判斷微生物限度檢查法細(xì)菌數(shù)

無菌檢查法無菌檢查法微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則對微生物限度檢查法中的標(biāo)準(zhǔn)、方法中的特定內(nèi)容、標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用做進(jìn)一步的說明。

10項(xiàng)內(nèi)容微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則為微生物實(shí)驗(yàn)室所采用的試驗(yàn)方法能否替代藥典規(guī)定方法用于藥品微生物的檢驗(yàn)提供指導(dǎo)微生物定性檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證微生物定量檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則為微生物實(shí)驗(yàn)室所采用的試驗(yàn)

三類微生物檢驗(yàn)的新技術(shù)基于微生物生長信息的檢驗(yàn)技術(shù)，如生物發(fā)光技術(shù)、電化學(xué)技術(shù)、比濁法等；直接測定被測介質(zhì)中活微生物的檢驗(yàn)技術(shù)如固相細(xì)胞計數(shù)法、流式細(xì)胞計數(shù)法等；基于微生物細(xì)胞所含有特定組成成分的分析技術(shù)，如脂肪酸測定技術(shù)、核酸擴(kuò)增技術(shù)、基因指紋分析技術(shù)等。三類微生物檢驗(yàn)的新技術(shù)

微生物檢驗(yàn)的新技術(shù)與傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方法比較，具有檢驗(yàn)簡便，速度快的特點(diǎn)，有實(shí)時或近實(shí)時監(jiān)控的潛力，能夠?qū)ιa(chǎn)過程的關(guān)鍵工藝環(huán)節(jié)作出及時的微生物質(zhì)量評價，使生產(chǎn)早期采取糾正措施及監(jiān)控和指導(dǎo)優(yōu)良生產(chǎn)成為可能，同時，新技術(shù)的使用也促進(jìn)了生產(chǎn)成本降低及檢驗(yàn)水平的提高，因此在醫(yī)藥行業(yè)完全有必要也有可能使用微生物檢驗(yàn)的替代方法。

微生物檢驗(yàn)的新技術(shù)與傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方法比較，具有檢

采用非藥典規(guī)定的替代方法進(jìn)行微生物檢驗(yàn)時，應(yīng)進(jìn)行替代方法的驗(yàn)證，確認(rèn)其應(yīng)用效果優(yōu)于或等同于藥典的方法。若替代方法只是針對藥典方法的某一環(huán)節(jié)進(jìn)行技術(shù)修改，則驗(yàn)證僅針對該替代技術(shù)而非整個檢驗(yàn)方法。采用非藥典規(guī)定的替代方法進(jìn)行微生物檢驗(yàn)時，

藥品微生物檢驗(yàn)方法分為定性試驗(yàn)和定量試驗(yàn)。定性試驗(yàn)是測定樣品中是否存在活的微生物；定量試驗(yàn)是測定樣品中存在的微生物數(shù)量。

藥品微生物檢驗(yàn)方法分為定性試驗(yàn)和定量試驗(yàn)。定性試

替代方法的驗(yàn)證也分為定性和定量兩類，不同類型需要驗(yàn)證的參數(shù)不同，驗(yàn)證參數(shù)的設(shè)定借鑒了美國和歐洲藥典的規(guī)定，但又結(jié)合了我國國情。具體參數(shù)的設(shè)定見下表。替代方法的驗(yàn)證也分為定性和定量兩類，不同類參數(shù)定性檢驗(yàn)定量檢驗(yàn)準(zhǔn)確度－＋精密度－＋專屬性＋＋檢測限＋－定量限－＋線性－＋范圍－＋重現(xiàn)性＋＋耐用性＋＋注：＋表示需要驗(yàn)證－表示不需要驗(yàn)證參數(shù)定性檢驗(yàn)定量檢驗(yàn)準(zhǔn)確度－＋精密度－＋專屬性＋＋檢測限＋－替代方法的一般要求

在以替代方法對樣品檢驗(yàn)的適用性進(jìn)行驗(yàn)證前，必須證明所選用的替代方法具有方法適用性，即表明在不含樣品的情況下，替代方法的專屬性、精密度、檢測限等參數(shù)。確認(rèn)方法的適用性后，用樣品按上表規(guī)定的參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證至少用2個批號的樣品，每批樣品每個菌應(yīng)至少平行進(jìn)行三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。參數(shù)驗(yàn)證的菌種應(yīng)包括培養(yǎng)基適用性檢查規(guī)定的菌種，必要時，還應(yīng)根據(jù)替代方法及樣品的特性增加相應(yīng)的菌種。替代方法的一般要求在以替代方法對樣品檢驗(yàn)的適用性進(jìn)行定性檢驗(yàn)的方法驗(yàn)證定性檢驗(yàn)的方法驗(yàn)證1、專屬性：是指檢測樣品中可能存在的特定微生物種類的能力。強(qiáng)調(diào)應(yīng)關(guān)注樣品存在對檢驗(yàn)結(jié)果的影響在使用依賴培養(yǎng)技術(shù)（以微生物生長作為判斷）的替代方法時，樣品的存在會導(dǎo)致檢驗(yàn)出現(xiàn)假陰性，應(yīng)特別確認(rèn)培養(yǎng)基的促生長試驗(yàn)及樣品的存在對檢驗(yàn)結(jié)果的影響。對于不依賴培養(yǎng)技術(shù)的替代方法，樣品的存在還可能導(dǎo)致檢驗(yàn)出現(xiàn)假陽性，應(yīng)特別確認(rèn)檢測系統(tǒng)中的外來成分不得干擾試驗(yàn)，確認(rèn)樣品的存在不會對檢驗(yàn)結(jié)果造成影響。采用替代方法進(jìn)行控制菌的檢驗(yàn)，還應(yīng)選擇與控制菌具有類似特性的菌株作為驗(yàn)證對象。1、專屬性：是指檢測樣品中可能存在的特定微生物2、檢測限：是指在替代方法設(shè)定的檢驗(yàn)條件下，樣品中能被檢出的微生物的最低數(shù)量，該數(shù)量是指在稀釋或培養(yǎng)之前初始樣品所含有的微生物數(shù)量，而不是指檢驗(yàn)過程中某一環(huán)節(jié)的供試液中所含有的微生物數(shù)量。驗(yàn)證的關(guān)鍵是確定接種菌的最低數(shù)量（每單位不超過5cfu），分別用藥典方法和替代方法對該菌進(jìn)行檢驗(yàn)，比較兩種方法的差異。與國外藥典規(guī)定相同，要求試驗(yàn)菌的接種量應(yīng)能夠在采用藥典方法檢驗(yàn)時，有50％的檢出率。檢測限驗(yàn)證至少應(yīng)重復(fù)進(jìn)行5次。2、檢測限：是指在替代方法設(shè)定的檢驗(yàn)條件3、重現(xiàn)性：是指相同的樣品在正常的實(shí)驗(yàn)條件（如實(shí)驗(yàn)場所、實(shí)驗(yàn)人員、儀器、試劑的批次等）發(fā)生變化時，所得檢驗(yàn)結(jié)果的精密度。反映了微生物檢驗(yàn)方法在檢驗(yàn)結(jié)果上抵抗操作和環(huán)境變化的能力。驗(yàn)證的關(guān)鍵是使接種菌的量在檢測限以上，評價驗(yàn)證結(jié)果時，應(yīng)排除樣品均一性的影響

4、耐用性：是指當(dāng)方法參數(shù)有小的刻意變化時，檢驗(yàn)結(jié)果不受影響的能力，為方法正常使用時的可靠性提供依據(jù)。對替代方法進(jìn)行耐用性評價，確定方法操作的關(guān)鍵注意點(diǎn)。在開展了上述評價后，可以不必比較替代方法的耐用性與藥典方法的差異。3、重現(xiàn)性：是指相同的樣品在正常的實(shí)驗(yàn)條件（如定量檢驗(yàn)的方法驗(yàn)證定量檢驗(yàn)的方法驗(yàn)證1、準(zhǔn)確度：是指替代方法的檢驗(yàn)結(jié)果與藥典方法檢驗(yàn)結(jié)果的一致程度。準(zhǔn)確度的確認(rèn)應(yīng)在檢驗(yàn)的范圍內(nèi)。通常用微生物的回收率（％）來表示準(zhǔn)確度。驗(yàn)證的菌濃度應(yīng)該在檢測范圍內(nèi)，一般應(yīng)選擇能夠準(zhǔn)確計數(shù)的最高濃度，系列稀釋至較低濃度，并且至少應(yīng)該有5種濃度，每種濃度重復(fù)檢驗(yàn)5次。替代方法的回收率應(yīng)該達(dá)到70％以上。當(dāng)替代方法并不依賴微生物生長出菌落或出現(xiàn)混濁來進(jìn)行定量時，可能出現(xiàn)回收率高于藥典方法的情況，此時應(yīng)結(jié)合專屬性的內(nèi)容對準(zhǔn)確性進(jìn)行評價。1、準(zhǔn)確度：是指替代方法的檢驗(yàn)結(jié)果與藥典方法檢

2、精密度：是指在檢驗(yàn)范圍內(nèi)，對同一個均勻的樣品多次重復(fù)取樣測定，其檢驗(yàn)結(jié)果的一致程度。通常采用標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（變異系數(shù)）來表示。驗(yàn)證的菌濃度同準(zhǔn)確度，每種濃度重復(fù)檢驗(yàn)10次?？梢越邮艿南鄬?biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)不大于35％。一般來說，替代方法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)不大于藥典方法。在該項(xiàng)目上，USP的規(guī)定是15％～35％，研究表明，當(dāng)含菌濃度在30～300cfu/ml時，計數(shù)結(jié)果的RSD完全可能在15％以內(nèi)，因此，指導(dǎo)原則中對該指標(biāo)作了修改。

2、精密度：是指在檢驗(yàn)范圍內(nèi)，對同一個均勻的3、專屬性：是指通過檢測適宜的試驗(yàn)菌，以證明檢驗(yàn)方法與其設(shè)定目的相適應(yīng)的能力。例如，菌落計數(shù)平皿法其設(shè)定目的在于檢出一定數(shù)量的微生物，則其專屬性驗(yàn)證應(yīng)證明當(dāng)樣品中存在一定數(shù)量的試驗(yàn)菌時，通過平皿法檢驗(yàn)，能夠檢出試驗(yàn)菌，而樣品的存在不會對結(jié)果造成影響。驗(yàn)證的關(guān)鍵是合理評價樣品的存在對檢驗(yàn)結(jié)果的影響，當(dāng)替代方法不依賴微生物生長出菌落或出現(xiàn)混濁就可以定量時，這種評價顯得尤為必要。

4、定量限：是指樣品中能被準(zhǔn)確檢驗(yàn)的微生物最低數(shù)量。驗(yàn)證的關(guān)鍵是在檢驗(yàn)范圍的低限，選擇盡可能低的5種菌濃度，每種濃度重復(fù)測定5次，替代方法的定量限不得大于藥典方法。3、專屬性：是指通過檢測適宜的試驗(yàn)菌，以證明檢5、線性：是指在檢驗(yàn)范圍內(nèi)，檢驗(yàn)結(jié)果與樣品中微生物數(shù)量成比例關(guān)系的程度。線性驗(yàn)證時必須覆蓋能夠準(zhǔn)確檢測的所有濃度范圍。每株菌至少應(yīng)該有5種濃度，每種濃度至少測定5次。在對驗(yàn)證數(shù)據(jù)進(jìn)行處理時，應(yīng)以樣本中預(yù)期的菌濃度為自變量，以不同方法的計數(shù)結(jié)果為因變量，進(jìn)行線性回歸分析，計算相關(guān)系數(shù)，替代方法的相關(guān)系數(shù)不得低于0.95。

6、范圍：是指能夠達(dá)到一定的準(zhǔn)確度、精密度和線性，檢驗(yàn)方法適用的高低限濃度或數(shù)量的區(qū)間。5、線性：是指在檢驗(yàn)范圍內(nèi)，檢驗(yàn)結(jié)果與樣品中7、重現(xiàn)性：是指相同的樣品在正常的實(shí)驗(yàn)條件（如實(shí)驗(yàn)場所、實(shí)驗(yàn)人員、儀器、試劑的批次等）發(fā)生變化時，所得檢驗(yàn)結(jié)果的精密度。反映了微生物檢驗(yàn)方法在檢驗(yàn)結(jié)果上抵抗操作和環(huán)境變化的能力。驗(yàn)證的關(guān)鍵是使接種菌的量在檢測限以上，評價驗(yàn)證結(jié)果時應(yīng)制備均一的實(shí)驗(yàn)樣本

8、耐用性：是指當(dāng)方法參數(shù)有小的刻意變化時，檢驗(yàn)結(jié)果不受影響的能力，為方法正常使用時的可靠性提供依據(jù)。當(dāng)檢驗(yàn)方法采用基于培養(yǎng)的技術(shù)時，一般的參數(shù)變化是指對培養(yǎng)溫度和時間進(jìn)行調(diào)整，上述調(diào)整對檢驗(yàn)結(jié)果的影響并不顯著。7、重現(xiàn)性：是指相同的樣品在正常的實(shí)驗(yàn)條件

謝謝！謝謝！

藥品生產(chǎn)企業(yè)

微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制

藥品生產(chǎn)企業(yè)

微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)

內(nèi)容微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范的控制微生物檢驗(yàn)方法的控制內(nèi)容微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范的控制

相關(guān)法規(guī)要求GMP(2010年修訂版)中國藥典2010版《藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則》中國藥典2010版《微生物限度檢查法》中國藥典2010版《無菌檢查法》中國藥典2010版《微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則》中國藥典2010版《藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則》相關(guān)法規(guī)要求GMP(2010年修訂版)

應(yīng)用范圍藥品生產(chǎn)所使用的原料及制劑都必須遵守法規(guī)要求藥品生產(chǎn)及銷售都必須符合法律要求。微生物質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)可能會因地域及應(yīng)用方式的不同而不同。各國藥典中都有相應(yīng)微生物試驗(yàn)的詳細(xì)要求。應(yīng)用范圍藥品生產(chǎn)所使用的原料及制劑都必須遵守法規(guī)要求

原則必須使用經(jīng)驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法嚴(yán)格按照藥品微生物試驗(yàn)室規(guī)范要求進(jìn)行試驗(yàn)(實(shí)驗(yàn)室控制系統(tǒng)GMP實(shí)施指南）原則必須使用經(jīng)驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法2010版GMP第六十四條第六十六條 第六十九條 第二百二十六條 第二百三十三條 2010版GMP第六十四條

藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范包括以下幾個方面：人員培養(yǎng)基菌種實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行設(shè)備、文件、實(shí)驗(yàn)記錄，結(jié)果的判斷等

藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范包括以下幾個方

人員人員資質(zhì)培訓(xùn)要求人員人員資質(zhì)實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行具有良好微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范和實(shí)驗(yàn)室安全的要求。既要最大可能防止微生物的污染，又要防止檢驗(yàn)過程對環(huán)境和人員造成危害。合適的規(guī)劃及活動區(qū)域的合理區(qū)分將提高微生物實(shí)驗(yàn)室操作的可靠性。實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行具有良好微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范和實(shí)驗(yàn)室安全的實(shí)驗(yàn)室的布局檢驗(yàn)潔凈區(qū)菌種處理、微生物鑒別、陽性對照實(shí)驗(yàn)室（P2實(shí)驗(yàn)室）培養(yǎng)室實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察區(qū)培養(yǎng)基及實(shí)驗(yàn)用具準(zhǔn)備（包括滅菌）區(qū)樣品接收和儲藏區(qū)標(biāo)準(zhǔn)菌株儲藏區(qū)污染物處理區(qū)文檔處理區(qū)等輔助區(qū)域?qū)嶒?yàn)室的布局

實(shí)驗(yàn)室的運(yùn)行人流物流水系統(tǒng)潔凈裝修實(shí)驗(yàn)室管理：環(huán)境監(jiān)測、清潔消毒、制度及標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的制定實(shí)驗(yàn)室的運(yùn)行人流

實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行總結(jié)實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行總結(jié)

設(shè)備實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備與檢驗(yàn)?zāi)芰凸ぷ髁肯噙m應(yīng)的的儀器設(shè)備。完成相應(yīng)的檢定，校準(zhǔn)，驗(yàn)證，確認(rèn)。形成相應(yīng)的操作，維護(hù)和保養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。使用要有記錄。設(shè)備實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備與檢驗(yàn)?zāi)芰凸ぷ髁肯噙m應(yīng)的的儀器設(shè)備。

設(shè)備無菌隔離器（如使用）、生物安全柜實(shí)驗(yàn)室用層流臺培養(yǎng)箱蒸汽滅菌柜、干熱滅菌柜空調(diào)高效過濾器其他滅菌消毒方式設(shè)備無菌隔離器（如使用）、生物安全柜

設(shè)備

重要的儀器設(shè)備，應(yīng)由專人負(fù)責(zé)對于培養(yǎng)箱、冰箱、高壓滅菌鍋對關(guān)鍵參數(shù)（如溫度、壓力）和記錄（有條件的情況下盡量使用自動記錄裝置），如果發(fā)生偏差，應(yīng)評估對以前的檢測結(jié)果造成的影響并采取必要的糾正措施。設(shè)備重要的儀器設(shè)備，應(yīng)由專人負(fù)責(zé)

設(shè)備

容易污染微生物的儀器設(shè)備如水浴鍋、培養(yǎng)箱、冰箱和生物安全柜等應(yīng)定期進(jìn)行清潔和消毒。對試驗(yàn)需用的無菌器具應(yīng)有明確標(biāo)識，實(shí)施正確的清洗、滅菌措施，并形成相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。設(shè)備容易污染微生物的儀器設(shè)備如水浴鍋、

培養(yǎng)基培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。培養(yǎng)基培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。

培養(yǎng)基培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的儲藏質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基培養(yǎng)基的制備

菌種

微生物實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)菌株可能是最敏感的，因?yàn)樗鼈兊纳锘钚院吞匦砸蕾囉诤线m的試驗(yàn)操作和貯藏條件。實(shí)驗(yàn)室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備菌株是微生物試驗(yàn)結(jié)果一致性的重要保證。試驗(yàn)菌種應(yīng)是從國家菌種中心獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌種，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后保存。菌種微生物實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)菌株可能是最敏感

菌種保藏機(jī)構(gòu)

中國菌種保藏管理委員會（CCCCM）

成立于1979年。下設(shè)7個菌種保藏管理中心及有關(guān)專業(yè)實(shí)驗(yàn)室，共12個單位實(shí)行統(tǒng)一領(lǐng)導(dǎo)，按專業(yè)分工管理。菌種保藏機(jī)構(gòu)

中國菌種保藏管理委員會（CC普通微生物菌種保藏管理中心（CCGMC）中國科學(xué)院微生物研究所中國科學(xué)院武漢病毒研究所農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心（ACCC）中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心（CMCC）普通微生物菌種保藏管理中心（CCGMC）中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所中國藥品生物制品檢定所中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所工業(yè)微生物菌種保藏管理中心（CICC）中國食品發(fā)酵工業(yè)科學(xué)研究所抗生素菌種保藏管理中心（CACC）中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)用生物技術(shù)研究所中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所四川抗生素研究所華北制藥廠抗生素研究所獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心（CVCC）農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)藥品監(jiān)察所林業(yè)微生物菌種保藏管理中心（CFCC）中國林業(yè)科學(xué)院專利微生物菌種保藏管理中心（ACCC）武漢大學(xué)四川抗生素研究所

國外的菌種保藏機(jī)構(gòu)世界菌種保藏聯(lián)合會（WFCC）美國標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏所（ATCC）美國農(nóng)業(yè)部北部地區(qū)研究實(shí)驗(yàn)室（NRRL）英國國立標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏所（NCTC）英國國際真菌研究所（CMI）荷蘭真菌中心保藏所（CBS）日本微生物菌種保藏聯(lián)合會（JFCC）國外的菌種保藏機(jī)構(gòu)世界菌種保藏聯(lián)合會（WFCC）

菌種標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活培養(yǎng)物的制備工作菌株的傳代次數(shù)菌種的管理文件及記錄菌種標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活菌種的管理

1、使用菌種的單位，應(yīng)具備從事微生物工作的條件和設(shè)備。菌種應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理，管理人員應(yīng)具有微生物專業(yè)知識和技術(shù)水平，并應(yīng)具有較強(qiáng)的責(zé)任心。

2、實(shí)驗(yàn)室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度；包括：每支菌種標(biāo)注名稱、標(biāo)準(zhǔn)號、接種日期、傳代次數(shù)、進(jìn)出、收集、貯藏、保存、確認(rèn)試驗(yàn)以及銷毀的記錄、標(biāo)準(zhǔn)菌種的申購記錄、從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株操作記錄，如菌種定期轉(zhuǎn)種傳代，鑒定（純度、特性）、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件、菌種保存的位置和條件及其它需要的程序。菌種的管理1、使用菌種的單位，應(yīng)具備從事微生物

3、菌種應(yīng)冷藏或冷凍保存，保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發(fā)性藥品，放置菌種應(yīng)有專用的冰箱，應(yīng)上鎖管理。

4、由專人按操作規(guī)程和有關(guān)要求定期進(jìn)行傳代，并定期對保存的菌種進(jìn)行檢查，一般每年1～2次，（或定期更換凍干菌種）。發(fā)現(xiàn)菌種的異常情況應(yīng)及時檢查。一旦發(fā)現(xiàn)菌種污染和變異現(xiàn)象，應(yīng)立即報告、研究處理。尤其長期保存時。3、菌種應(yīng)冷藏或冷凍保存，保存菌種的冰箱不得放

5、菌種的來源、接收、傳代、分離、復(fù)壯、使用和鑒定等均應(yīng)做好詳細(xì)記錄。

6、菌種不得隨意帶出實(shí)驗(yàn)室，外單位索取、購買應(yīng)有證明和登記登記，并包裝嚴(yán)密。菌種處理應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行，滅菌處理應(yīng)有詳細(xì)記錄。5、菌種的來源、接收、傳代、分離、復(fù)壯、使用藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制課件

文件

文件應(yīng)當(dāng)充分表明實(shí)驗(yàn)是在實(shí)驗(yàn)室按可控的檢查法進(jìn)行的文件文件應(yīng)當(dāng)充分表明實(shí)驗(yàn)是在實(shí)驗(yàn)室按可

文件

人員培訓(xùn)和資格確認(rèn)設(shè)備驗(yàn)收；驗(yàn)證；檢定（或校準(zhǔn)期間核查）和維修設(shè)備使用中的運(yùn)行狀態(tài)（設(shè)備的關(guān)鍵參數(shù)）培養(yǎng)基制備、儲存和質(zhì)量控制檢驗(yàn)規(guī)程中的關(guān)鍵步驟數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果計算的確認(rèn)質(zhì)量責(zé)任人對實(shí)驗(yàn)報告的評估數(shù)據(jù)偏離的調(diào)查文件人員培訓(xùn)和資格確認(rèn)文件

每一個進(jìn)行檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室必須建立并遵守質(zhì)量保證（QA）的政策和程序，用所建立的QA政策和程序來監(jiān)測和評價整個檢驗(yàn)過程。所有QA活動都必須文件化。文件實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性依賴于實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行。標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程應(yīng)指出如何進(jìn)行正確的實(shí)驗(yàn)操作。實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)包含所有關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)，以便確認(rèn)數(shù)據(jù)的完整性。實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性依賴于實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)記錄正確的試驗(yàn)研究和實(shí)驗(yàn)記錄是微生物試驗(yàn)成功的關(guān)鍵。要使實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信最基本的原則是試驗(yàn)應(yīng)按SOP規(guī)定的內(nèi)容進(jìn)行操作；如正確的試驗(yàn)操作、完整的實(shí)驗(yàn)記錄，以便確認(rèn)數(shù)據(jù)的完整性。

實(shí)驗(yàn)記錄正確的試驗(yàn)研究和實(shí)驗(yàn)記錄是微生物試驗(yàn)成功的關(guān)鍵。要使結(jié)果的判斷微生物實(shí)驗(yàn)的特殊性影響結(jié)果觀察的條件和因素不符合要求和規(guī)定的原因調(diào)查異常結(jié)果的分析重新抽樣復(fù)檢結(jié)果的判斷微生物實(shí)驗(yàn)的特殊性微生物實(shí)驗(yàn)的特殊性微生物實(shí)驗(yàn)的特殊性影響試驗(yàn)結(jié)果的因素

藥品微生物檢驗(yàn)較為特殊，因是活微生物，受到外界影響因素較，因此檢驗(yàn)結(jié)果分析比較困難，其影響因素有以下幾方面：

1、微生物在自然界中普遍存在。

2、實(shí)驗(yàn)人員在樣品處理過程或其它操作步驟可能受微生物污染。

3、微生物在樣品或環(huán)境中分布不均勻等。影響試驗(yàn)結(jié)果的因素藥品微生物檢驗(yàn)較為特殊異常結(jié)果分析

以上原因造成試驗(yàn)結(jié)果的誤差大和重現(xiàn)性差，因此，在試驗(yàn)時應(yīng)盡最大程度的避免外來的污染。應(yīng)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行全面分析，如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，應(yīng)立即通知實(shí)驗(yàn)室管理人員，組織進(jìn)行原因調(diào)查分析。異常結(jié)果分析分析內(nèi)容包括：⑴實(shí)驗(yàn)室環(huán)境⑵抽樣區(qū)的防護(hù)條件⑶樣品本身是否具有影響微生物存活或繁殖的成分和作用⑷實(shí)驗(yàn)操作是否規(guī)范以上都是評價實(shí)驗(yàn)結(jié)果真實(shí)性的重要依據(jù)。藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制課件如果依據(jù)分析調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)全過程中任何一個環(huán)節(jié)有錯誤，可判實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效，那么應(yīng)重新制定實(shí)驗(yàn)方案，按照正確的方案進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在這種情況下，應(yīng)特別認(rèn)真對試驗(yàn)過程及正確的試驗(yàn)操作進(jìn)行監(jiān)控，實(shí)驗(yàn)室必須認(rèn)可復(fù)試程序，如果需要，重新抽樣，但抽樣方法不能影響不符合規(guī)定結(jié)果的分析調(diào)查，這種情況必須詳細(xì)記錄。如果依據(jù)分析調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)全過程中任何一個環(huán)節(jié)有錯誤，可微生物限度檢查法細(xì)菌數(shù)霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)控制菌檢查方法的驗(yàn)證微生物限度標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果判斷微生物限度檢查法細(xì)菌數(shù)

無菌檢查法無菌檢查法微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則對微生物限度檢查法中的標(biāo)準(zhǔn)、方法中的特定內(nèi)容、標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用做進(jìn)一步的說明。

10項(xiàng)內(nèi)容微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則為微生物實(shí)驗(yàn)室所采用的試驗(yàn)方法能否替代藥典規(guī)定方法用于藥品微生物的檢驗(yàn)提供指導(dǎo)微生物定性檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證微生物定量檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則為微生物實(shí)驗(yàn)室所采用的試驗(yàn)

三類微生物檢驗(yàn)的新技術(shù)基于微生物生長信息的檢驗(yàn)技術(shù)，如生物發(fā)光技術(shù)、電化學(xué)技術(shù)、比濁法等；直接測定被測介質(zhì)中活微生物的檢驗(yàn)技術(shù)如固相細(xì)胞計數(shù)法、流式細(xì)胞計數(shù)法等；基于微生物細(xì)胞所含有特定組成成分的分析技術(shù)，如脂肪酸測定技術(shù)、核酸擴(kuò)增技術(shù)、基因指紋分析技術(shù)等。三類微生物檢驗(yàn)的新技術(shù)

微生物檢驗(yàn)的新技術(shù)與傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方法比較，具有檢驗(yàn)簡便，速度快的特點(diǎn)，有實(shí)時或近實(shí)時監(jiān)控的潛力，能夠?qū)ιa(chǎn)過程的關(guān)鍵工藝環(huán)節(jié)作出及時的微生物質(zhì)量評價，使生產(chǎn)早期采取糾正措施及監(jiān)控和指導(dǎo)優(yōu)良生產(chǎn)成為可能，同時，新技術(shù)的使用也促進(jìn)了生產(chǎn)成本降低及檢驗(yàn)水平的提高，因此在醫(yī)藥行業(yè)完全有必要也有可能使用微生物檢驗(yàn)的替代方法。

微生物檢驗(yàn)的新技術(shù)與傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方法比較，具有檢

采用非藥典規(guī)定的替代方法進(jìn)行微生物檢驗(yàn)時，應(yīng)進(jìn)行替代方法的驗(yàn)證，確認(rèn)其應(yīng)用效果優(yōu)于或等同于藥典的方法。若替代方法只是針對藥典方法的某一環(huán)節(jié)進(jìn)行技術(shù)修改，則驗(yàn)證僅針對該替代技術(shù)而非整個檢驗(yàn)方法。采用非藥典規(guī)定的替代方法進(jìn)行微生物檢驗(yàn)時，

藥品微生物檢驗(yàn)方法分為定性試驗(yàn)和定量試驗(yàn)。定性試驗(yàn)是測定樣品中是否存在活的微生物；定量試驗(yàn)是測定樣品中存在的微生物數(shù)量。

藥品微生物檢驗(yàn)方法分為定性試驗(yàn)和定量試驗(yàn)。定性試

替代方法的驗(yàn)證也分為定性和定量兩類，不同類型需要驗(yàn)證的參數(shù)不同，驗(yàn)證參數(shù)的設(shè)定借鑒了美國和歐洲藥典的規(guī)定，但又結(jié)合了我國國情。具體參數(shù)的設(shè)定見下表。替代方法的驗(yàn)證也分為定性和定量兩類，不同類參數(shù)定性檢驗(yàn)定量檢驗(yàn)準(zhǔn)確度－＋精密度－＋專屬性＋＋檢測限＋－定量限－＋線性－＋范圍－＋重現(xiàn)性＋＋耐用性＋＋注：＋表示需要驗(yàn)證－表示不需要驗(yàn)證參數(shù)定性檢驗(yàn)定量檢驗(yàn)準(zhǔn)確度－＋精密度－＋專屬性＋＋檢測限＋－替代方法的一般要求

在以替代方法對樣品檢驗(yàn)的適用性進(jìn)行驗(yàn)證前，必須證明所選用的替代方法具有方法適用性，即表明在不含樣品的情況下，替代方法的專屬性、精密度、檢測限等參數(shù)。確認(rèn)方法的適用性后，用樣品按上表規(guī)定的參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證至少用2個批號的樣品，每批樣品每個菌應(yīng)至少平行進(jìn)行三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。參數(shù)驗(yàn)證的菌種應(yīng)包括培養(yǎng)基適用性檢查規(guī)定的菌種，必要時，還應(yīng)根據(jù)替代方法及樣品的特性增加相應(yīng)的菌種。替代方法的一般要求在以替代方法對樣品檢驗(yàn)的適用性進(jìn)行定性檢驗(yàn)的方法驗(yàn)證定性檢驗(yàn)的方法驗(yàn)證1、專屬性：是指檢測樣品中可能存在的特定微生物種類的能力。強(qiáng)調(diào)應(yīng)關(guān)注樣品存在對檢驗(yàn)結(jié)果的影響在使用依賴培養(yǎng)技術(shù)（以微生物生長作為判斷）的替代方法時，樣品的存在會導(dǎo)致檢驗(yàn)出現(xiàn)假陰性，應(yīng)特別確認(rèn)培養(yǎng)基的促生長試驗(yàn)及樣品的存在對檢驗(yàn)結(jié)果的影響。對于不依賴培養(yǎng)技術(shù)的替代方法，樣品的存在還可能導(dǎo)致檢驗(yàn)出現(xiàn)假陽性，應(yīng)特別確認(rèn)檢測系統(tǒng)中的外來成分不得干擾試驗(yàn)，確認(rèn)樣品的存在不會對檢驗(yàn)結(jié)果造成影響。采用替代方法進(jìn)行控制菌的檢驗(yàn)，還應(yīng)選擇與控制菌具有類似特性的菌株作為驗(yàn)證對象。1、專屬性：是指檢測樣品中可能存在的特定微生物2、檢測限：是指在替代方法設(shè)定的檢驗(yàn)條件下，樣品中能被檢出的微生物的最低數(shù)量，該數(shù)量是指在稀釋或培養(yǎng)之前初始樣品所含有的微生物數(shù)量，而不是指檢驗(yàn)過程中某一環(huán)節(jié)的供試液中所含有的微生物數(shù)量。驗(yàn)證的關(guān)鍵是確定接種菌的最低數(shù)量（每單位不超過5cfu），分別用藥典方法和替代方法對該菌進(jìn)行檢驗(yàn)，比較兩種方法的差異。與國外藥典規(guī)定相同，要求試驗(yàn)菌的接種量應(yīng)能夠在采用藥典方法檢驗(yàn)時，有50％的檢出率。檢測限驗(yàn)證至少應(yīng)重復(fù)進(jìn)行5次。2、檢測限：是指在替代方法設(shè)定的檢驗(yàn)條件3、重現(xiàn)性：是指相同的樣品在正常的實(shí)驗(yàn)條件（如實(shí)驗(yàn)場所、實(shí)驗(yàn)人員、儀器、試劑的批次等）發(fā)生變化時，所得檢驗(yàn)結(jié)果的精密度。反映了微生物檢驗(yàn)方法在檢驗(yàn)結(jié)果上抵抗操作和環(huán)境變化的能力。驗(yàn)證的關(guān)鍵是使接種菌的量在檢測限以上，評價驗(yàn)證結(jié)果時，應(yīng)排除樣品均一性的影響

4、耐用性：是指當(dāng)方法參數(shù)有小的刻意變化時，檢驗(yàn)