血液等體液標本的細菌學(xué)檢驗鮑曼不動桿菌

關(guān)于血液等體液標本的細菌學(xué)檢驗鮑曼不動桿菌第1頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六一、實驗?zāi)康模ㄒ唬┱莆昭獦吮镜牟杉椒?、檢驗程序（二）掌握鮑曼不動桿菌的分離培養(yǎng)與鑒定。（三）熟悉鮑曼不動桿菌的菌落特點、菌體形態(tài)及染色性。第2頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六二、實驗器材和試劑器材：酒精燈、火柴、取菌環(huán)、載玻片、普通光學(xué)顯微鏡、血平板試劑：3%過氧化氫、氧化酶試劑、革蘭染色液、生理鹽水、生化管藥敏紙片：哌拉西林/他唑巴坦PIP/TA、替卡西林+克拉維酸TIC/CA、頭孢他啶CAZ、頭孢吡肟FEP、頭孢噻肟CTX、頭孢曲松CRO、阿米卡星AN、妥布霉素TM、美羅培南MPN、環(huán)丙沙星CIP第3頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六三、實驗內(nèi)容（一）菌落觀察（二）革蘭染色法（三）氧化酶試驗（四）接種生化管（五）菌種的綜合判斷第4頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六四、實驗步驟1、標本采集菌血癥患者病原菌是周期性出現(xiàn)在血液中，盡管臨床癥狀可能很嚴重，但患者血液中病原菌濃度水平相當?shù)?，因此要求臨床多次采血液標本進行肉湯增菌培養(yǎng)，但24小時內(nèi)一般不超過3次。懷疑為菌血癥的患者，原則上應(yīng)在抗菌藥物使用前采取，對已開始抗菌藥物治療的患者可在下次給藥前采取，標本大多由肘靜脈采取，多部位采集血液標本也可增加陽性率。第5頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六標本采集注意事項：

采血部位的皮膚消毒采用三步消毒法：即先用70%酒精擦拭皮膚，再用碘酒消毒，然后用70%酒精脫碘。采集的血液標本應(yīng)分別注入硫酸鎂葡萄糖肉湯（需氧培養(yǎng)）和硫乙醇酸鈉肉湯（厭氧培養(yǎng)）培養(yǎng)瓶中。硫酸鎂葡萄糖肉湯中和多種抗生素，硫乙醇酸鈉肉湯含有硫乙醇酸鈉、葡萄糖等還原劑吸收其中的氧，為厭氧菌提供較低的氧化還原電位。血液與培養(yǎng)基的比例應(yīng)為1：5—1：10兒童嬰幼兒一般1-5ml成人一般10ml第6頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六3、常見致病菌檢驗及報告方式（1）將血液細菌培養(yǎng)瓶置35度孵育，每日觀察一次，連續(xù)觀察至第七天。注意觀察血液細菌培養(yǎng)瓶的變化。（2）如懷疑血液細菌培養(yǎng)瓶中有細菌生長，用無菌技術(shù)取瓶內(nèi)液體進行涂片，革蘭染色檢查。如發(fā)現(xiàn)細菌，根據(jù)細菌的染色性及形態(tài)特征發(fā)出初步報告（電話通知主管醫(yī)生）。（3）根據(jù)涂片結(jié)果選擇相應(yīng)的抗菌藥物，直接從血培養(yǎng)瓶抽取適量液體做初步藥敏試驗，并于18—24小時后報告初步藥敏結(jié)果。第7頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六（4）如有發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液渾濁、溶血、綠色色素、表面菌膜生長、膠凍狀凝固或細胞層顆粒狀生長，均為細菌生長現(xiàn)象。用無菌技術(shù)取瓶內(nèi)液體接種固體培養(yǎng)基。包括需氧培養(yǎng)、真菌培養(yǎng)及厭氧培養(yǎng)。第8頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六（5）對細菌菌落涂片、革蘭染色，觀察細菌形態(tài)及染色性。革蘭陰性桿菌：進行氧化酶試驗并接種KIA培養(yǎng)基、O/F試驗、生化鑒定、血清學(xué)鑒定、藥敏試驗。革蘭陽性球菌：葡萄串樣或散在存在，觸酶試驗陽性，初步判斷為葡萄球菌；觸酶陰性鏈狀或散在排列初步判斷為鏈球菌屬或腸球菌屬，作生化鑒定、血清學(xué)鑒定、藥敏試驗。第9頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六血液標本中常見的細菌革蘭陽性球菌：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、A群、B群鏈球菌、草綠色鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌、厭氧鏈球菌、革蘭陽性桿菌：產(chǎn)單核李斯特菌、炭疽芽胞桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌。革蘭陰性球菌：腦膜炎奈瑟菌、卡他布蘭漢菌。革蘭陰性桿菌：大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、氣單胞菌等。第10頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六（6）報告方式在增菌過程中培養(yǎng)瓶中懷疑有細菌生長，經(jīng)涂片、革蘭染色證實，可報告“疑有XX細菌生長”；經(jīng)分離培養(yǎng)、生化試驗及血清學(xué)鑒定后，可報告“血液細菌培養(yǎng)X天，有XX細菌生長”，并同時報告體外抗菌藥物敏感試驗結(jié)果；如果增菌培養(yǎng)至七天，培養(yǎng)瓶中仍無細菌生跡象，經(jīng)盲目傳代證實無細菌生長，可報告“血液細菌培養(yǎng)七天，無細菌生長”。第11頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六注意事項1、一般應(yīng)在抗菌藥物使用前采集血液標本，如果患者已用過抗菌藥物或情況不明時，應(yīng)使用硫酸鎂肉湯增菌液。2、對疑為波浪熱、亞急性細菌性心內(nèi)膜炎的患者，培養(yǎng)瓶應(yīng)孵育至第四周，盲目接種后無菌生長，方可報告陰性。第12頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六注意事項3、為了盡快發(fā)現(xiàn)病原菌，在7天的孵育期內(nèi)應(yīng)至少盲目接種兩次，第一次在標本孵育12—18小時后。在以后的孵育期中應(yīng)每天觀察瓶內(nèi)的變化，如有細菌生長現(xiàn)象，需及時接種和涂片染色觀察報告。7天孵育后仍無細菌生長跡象，進行盲目接種。每次接種羊血平板和巧克力瓊脂平板，分別進行需氧和厭氧培養(yǎng)。革蘭染色提示真菌生長，應(yīng)移種至沙氏平板，L型菌須轉(zhuǎn)種高滲平板。第13頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六注意事項4、血液細菌學(xué)培養(yǎng)是診斷菌血癥和敗血癥的病原學(xué)依據(jù)，但血液標本在采集、接種、運送過程存在潛在污染的可能，尤其在靜脈穿刺術(shù)中，因此皮膚消毒應(yīng)嚴格按規(guī)程操作。5、一般菌血癥由一種細菌引起，但約5%-10%的菌血癥患者是多菌性菌血癥。第14頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六自動血培養(yǎng)儀原理：自動血培養(yǎng)檢測系統(tǒng)是檢測細菌和真菌生長時所釋放的二氧化碳來作為血液中有無細菌的指標。檢測技術(shù)有放射標記、顏色變化（CO2感受器）、熒光技術(shù)和壓力檢測等。自動血培養(yǎng)儀集培養(yǎng)、震蕩和檢測一體化。接種血液標本后，血培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)、震蕩的同時，由檢測系統(tǒng)自動連續(xù)監(jiān)測瓶中CO2的產(chǎn)生情況，所測得信號傳送至電腦分析，繪制出每個瓶中微生物的生長曲線。一旦出現(xiàn)陽性結(jié)果，電腦自動報警，指示陽性瓶的位置。第15頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六血培養(yǎng)瓶厭氧瓶成人需氧瓶小兒需氧瓶第16頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六全自動血培養(yǎng)儀第17頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六自動血培養(yǎng)儀特點自動血培養(yǎng)儀除了適用血培養(yǎng)外，還可以用于其他無菌部位標本如腦脊液、胸腹水、和關(guān)節(jié)液等的細菌和真菌培養(yǎng)的檢測。自動血培養(yǎng)儀與手工系統(tǒng)相比，提高了陽性檢出率，靈敏度高，操作簡單，能節(jié)省人力，縮短檢驗周期，一般培養(yǎng)5天。但儀器、設(shè)備和消耗品的成本較高。第18頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六鮑曼不動桿菌鮑曼不動桿菌（Acinetobacterbaumannii）為非發(fā)酵革蘭陰性桿菌，廣泛存在于自然界，屬于條件致病菌。主要引起呼吸道感染，也可引發(fā)菌血癥、泌尿系感染、繼發(fā)性腦膜炎、手術(shù)部位感染、呼吸機相關(guān)性肺炎等。是醫(yī)院感染的重要病原菌。近年來的感染在增多，且其耐藥性日益嚴重，對危重患者及ICU中的患者威脅很大。第19頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六

鮑曼不動桿菌在醫(yī)院感染中占第四位成為僅次于銅綠假單胞菌的又一個非發(fā)酵菌，位居第二。在某些地方不動桿菌的感染甚至已超過了銅綠假單胞菌。隨著廣譜抗菌藥物的廣泛使用，多重耐藥不動桿菌日趨增多，耐藥株對目前使用的所有抗菌藥物均可耐藥，且很容易通過交叉感染在醫(yī)院內(nèi)爆發(fā)流行。

第20頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六步驟和方法1、形態(tài)觀察革蘭陰性、球狀或球桿菌，常成雙排列。2、菌落觀察在血平板上形成圓形、凸起光滑、邊緣整齊、不透明、灰白色、有粘性的菌落。菌落較小，在麥康凱上生長良好，形成無色或淡粉紅色菌落。第21頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六步驟和方法3、生化反應(yīng)（1）氧化酶、觸酶試驗:氧化酶陰性、觸酶試驗陽性（2）其他生化反應(yīng)：不發(fā)酵糖類，硝酸鹽還原試驗陰性，動力陰性第22頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六藥物敏感試驗

對于不動桿菌屬，首選抗菌藥物為頭孢他啶、哌拉西林、替卡西林、次選阿米卡星、亞胺培南、環(huán)丙沙星。鮑曼不動桿菌對全部氨基青霉素，第一代、第二代頭孢菌素和第一代喹諾酮類抗生素天然耐藥。目前治療多選用β-內(nèi)酰胺類藥物+氨基糖苷類聯(lián)合用藥第23頁，共25頁，2022年，5月20日，5點22分，星期六藥敏紙片抑菌圈直徑頭孢他啶CAZ

≤1415-17≥18頭孢吡肟FEP≤1415-17≥18頭孢噻肟CTX

≤1415-22≥23頭孢曲松CRO

≤1314-20≥21美洛培南MPN≤1314-15≥16妥布霉素TM

≤1213-14≥15阿米卡星AN≤1415-16