1.2.1 微生物的基本培養(yǎng)技術(shù) 學(xué)案（解析）

Word文檔下載后可自行編輯13/131.2.1微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)學(xué)案（解析）第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

學(xué)習(xí)目標(biāo)：

1.了解培養(yǎng)基的概念。并知道如何配制培養(yǎng)基。

2.闡明無菌技術(shù)是在操作過程中.保持無菌物品與無菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)。

3.概述平板劃線法和稀釋涂布平板法。

4.通過配制培養(yǎng)基、滅菌、接種和培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)操作獲得純化的酵母菌落。

學(xué)習(xí)內(nèi)容：

一、培養(yǎng)基的配制

1．培養(yǎng)基的概念：人們按照微生物對(duì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的。

2．作用：用以、、、保存微生物或積累其。

3．培養(yǎng)基種類

標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基特點(diǎn)作用

物理性質(zhì)培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂微生物的分離與鑒定，活菌計(jì)數(shù)，保藏菌種

培養(yǎng)基容器放倒不致流出，劇烈震動(dòng)則破散觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定

培養(yǎng)基不加凝固劑常用于工業(yè)生產(chǎn)

功能培養(yǎng)基根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求配制選擇分離

培養(yǎng)基加入能與目的菌的代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑鑒定

來源培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)

培養(yǎng)基用已知的化學(xué)物質(zhì)配制分類鑒定

(1)固體培養(yǎng)基中的瓊脂僅作為凝固劑，(“能”、“不能”)為微生物生長提供能量和碳源。

(2)病毒為非細(xì)胞結(jié)構(gòu)生物，只能在活細(xì)胞中營寄生生活，目前(“能”、“不能”)利用人工培養(yǎng)基來培養(yǎng)。

4．培養(yǎng)基的營養(yǎng)組成

(1)主要營養(yǎng)物質(zhì)：水、(提供碳元素的物質(zhì))、(提供氮元素的物質(zhì))和無機(jī)鹽。

(2)某種常見的細(xì)菌培養(yǎng)基——牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成

組分含量提供的主要營養(yǎng)

牛肉膏5g、磷酸鹽和維生素等

蛋白胨10g和維生素等

NaCl5g無機(jī)鹽

H2O定容至1000mL水

(3)還需滿足微生物對(duì)pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及O2的需求。例如：

①在培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)，需要在培養(yǎng)基中添加；

②在培養(yǎng)霉菌時(shí)，一般需要將培養(yǎng)基pH調(diào)至性；

③在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，一般需要將培養(yǎng)基pH調(diào)至性或性；

④在培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)，需要提供的條件。

二、無菌技術(shù)

1.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染。無菌技術(shù)主要包括和。

2．消毒

(1)概念：指使用較為的物理、化學(xué)或等方法殺死物體表面或內(nèi)部微生物。

(2)適用對(duì)象：操作的、操的和手等。

(3)常用方法：煮沸消毒、巴氏消毒等。

項(xiàng)目主要方法應(yīng)用范圍

消毒消毒法62～65℃消毒30min或80～90℃處理30s～1min牛奶、啤酒、果酒和醬油等不耐高溫的液體

消毒法100℃煮沸5～6min家庭餐具等生活用品

消毒30W紫外燈照射30min(損傷細(xì)菌的DNA)接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)

化學(xué)藥劑消毒用體積分?jǐn)?shù)為70%～75%的、碘酒皮膚、傷口、動(dòng)植物組織表面消毒、空氣、手術(shù)器械、塑料或玻璃器皿

3．滅菌

(1)概念：指使用的理化方法殺死物體內(nèi)外的微生物，包括和

。

(2)適用對(duì)象：用于微生物培養(yǎng)的、用具和等。

(3)常用方法：濕熱滅菌、干熱滅菌和灼燒滅菌等。

項(xiàng)目主要方法應(yīng)用范圍

滅菌滅菌直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒涂布器、接種環(huán)、接種針或其他金屬用具，試管口或瓶口等

滅菌干熱滅菌箱中，160～170℃的熱空氣中維持2～3h耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(如吸管、培養(yǎng)皿等)、金屬用具等

高壓蒸汽滅菌(滅菌)100kPa、121℃維持15～30min培養(yǎng)基等

4.消毒和滅菌的比較

項(xiàng)目消毒滅菌

作用強(qiáng)度較為的物理、化學(xué)因素

消滅微生物的數(shù)量物體表面或內(nèi)部微生物物體內(nèi)外的微生物

能否消滅芽孢、孢子消滅芽孢能消滅芽孢和孢子

適用對(duì)象操作空間、操的衣著和手等接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

常用方法消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法、、

5.無菌技術(shù)可用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還能有效避免操自身被微生物感染。

三、微生物的純培養(yǎng)

(一)相關(guān)概念：

(1)將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體稱為。

(2)由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱為。

(3)獲得純培養(yǎng)物的過程就是。

(二)純培養(yǎng)步驟：微生物的純培養(yǎng)包括、、、等。

(三)探究·實(shí)踐——酵母菌的純培養(yǎng)

1.實(shí)驗(yàn)原理：分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，這就是。

2.實(shí)驗(yàn)方法：采用法和法將單個(gè)微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個(gè)微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。

3.實(shí)驗(yàn)步驟

(1)制備培養(yǎng)基：①；②；③。

Ⅰ.如果需要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，應(yīng)該在定容完成后，滅菌之進(jìn)行操作。

Ⅱ.倒平板時(shí)，要使錐形瓶的瓶口迅速通過火焰。通過滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。

Ⅲ.倒平板時(shí)應(yīng)待培養(yǎng)基冷卻至℃左右時(shí)，在附近倒平板。

Ⅳ.平板冷卻凝固后，要將平板。既可以防止水分過快蒸發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。

(2)接種和分離酵母菌

通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面的操作，將聚集的菌種逐步到培養(yǎng)基表面。經(jīng)過數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。

(

②在火焰旁冷卻接種環(huán)。棉塞

放在操作臺(tái)上。

)(

③將試管口通過

。

)(

①將接種環(huán)放在

上灼燒

)

(

④在

附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液。

)(

⑤將試管口通過

，并塞上棉塞。

)

(

⑦第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。注意

將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。

)(

⑥在

附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。

)

Ⅰ．每次灼燒接種環(huán)的時(shí)間和目的

灼燒時(shí)期目的

取菌種前

每次劃線前殺死上次劃線時(shí)殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使，直至得到單個(gè)細(xì)胞

接種結(jié)束后殺死接種環(huán)上，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操

Ⅱ．在第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的端開始劃線的原因是：劃線后，線條末端酵母菌的數(shù)目比線條起始處要，每次從上一次劃線的末端開始，能使酵母菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步，最終能得到由個(gè)細(xì)胞繁殖而來的菌落。

Ⅲ．最后一次劃線與第一次的劃線相連。因?yàn)樽詈笠淮蝿澗€已經(jīng)將細(xì)菌稀釋成單個(gè)的細(xì)胞，如果與第一次劃線相連則了細(xì)菌的數(shù)目，得不到純化的效果。

(3)培養(yǎng)酵母菌

完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個(gè)的平板，放入℃左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h。

4．實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析

(1)培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基的目的是檢測(或檢查)。未接種的培養(yǎng)基表面若有菌落生長，則說明培養(yǎng)基，應(yīng)該重新制備；若無菌落生長，則說明。

(2)在接種酵母菌的培養(yǎng)基上可觀察到獨(dú)立的菌落，這些菌落在顏色、形狀和大小上，酵母菌菌落一般表面光滑，多呈乳白色。

(3)若在培養(yǎng)基中觀察到的菌落，原因可能是菌液不純，混入其他雜菌，或在實(shí)驗(yàn)操作過程中被雜菌污染。

5．平板劃線法接種菌種時(shí)，可防止雜菌污染的操作

(1)接種前將接種環(huán)放在。

(2)劃線操作在旁進(jìn)行。

(3)接種環(huán)蘸取菌液前后，要將試管口通過。

(4)劃線時(shí)將培養(yǎng)皿的皿蓋打開一條，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面劃線，劃線后。

解析

一、1．營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)基質(zhì)

2．培養(yǎng)分離鑒定代謝物

3．固體半固體液體選擇鑒別天然合成(1)不能(2)不能

4．(1)碳源氮源(2)碳源氮源(3)①維生素②酸性③中弱堿④無氧

二、1.消毒滅菌

2．(1)溫和生物一部分(2)空間衣著(3)巴氏煮沸紫外線

3．(1)強(qiáng)烈所有芽孢孢子(2)器皿、接種培養(yǎng)基(3)灼燒干熱濕熱

4.溫和強(qiáng)烈一部分所有部分全部煮沸灼燒滅菌干熱滅菌濕熱滅菌

三、(一)(1)培養(yǎng)物(2)純培養(yǎng)物(3)純培養(yǎng)(二)配制培養(yǎng)基滅菌接種分離和培養(yǎng)

(三)1.菌落2.平板劃線稀釋涂布平板

3.(1)①配制培養(yǎng)基②滅菌③倒平板Ⅰ.前Ⅱ.火焰Ⅲ.50酒精燈火焰Ⅳ.倒置

(2)連續(xù)劃線稀釋分散①火焰②不能③火焰④火焰⑤火焰⑥火焰⑦不要

Ⅰ．殺