醫(yī)學(xué)課件-局部毒性試驗(yàn)教學(xué)課件

2022/12/1

1局部毒性試驗(yàn)

Partialtoxicitytest

2022/11/301局部毒性試驗(yàn)2022/12/1

2局部毒性試驗(yàn)

是為研究局部用藥后引起的毒性反應(yīng)而設(shè)計的試驗(yàn)。主要指皮膚、眼、鼻及吸入劑用藥，同時也包括局部作用于直腸和陰道的制劑。

研究的內(nèi)容：皮膚毒性試驗(yàn)，刺激試驗(yàn)，致敏試驗(yàn)。局部毒性是指局部用藥后引起的毒性反應(yīng)2022/11/302局部毒性試驗(yàn)是為研究局部用藥后2022/12/1皮膚毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑的急性毒性試驗(yàn)應(yīng)用于直腸、陰道制劑的急性毒性試驗(yàn)皮膚長期毒性試驗(yàn)局部毒性試驗(yàn)致敏試驗(yàn)局部封閉涂皮法皮內(nèi)致敏法皮內(nèi)和涂皮相結(jié)合的方法刺激試驗(yàn)皮膚刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑刺激試驗(yàn)應(yīng)用于直腸、陰道制劑刺激試驗(yàn)肌肉注射劑的局部刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的血管刺激試驗(yàn)一次給藥多次給藥3任立群2022/11/30皮膚毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)局部毒性試驗(yàn)2022/12/1

4第一節(jié)皮膚用藥的毒性研究第二節(jié)眼用藥刺激性試驗(yàn)第三節(jié)肌內(nèi)注射用藥局部刺激性試驗(yàn)第四節(jié)靜脈給藥局部刺激性試驗(yàn)第五節(jié)滴鼻劑和吸入劑的毒性試驗(yàn)第六節(jié)應(yīng)用于直腸、陰道制劑的毒性試驗(yàn)婁宜嘉第二版《藥物毒理學(xué)》——局部毒性試驗(yàn)皮膚用藥的急性毒性試驗(yàn)皮膚用藥的長期毒性試驗(yàn)皮膚用藥的刺激試驗(yàn)皮膚吸收試驗(yàn)皮膚光敏試驗(yàn)皮膚過敏試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑刺激試驗(yàn)直腸、陰道用藥的急性毒性試驗(yàn)直腸、陰道用藥的長期毒性試驗(yàn)直腸、陰道用藥刺激試驗(yàn)2022/11/304第一節(jié)皮膚用藥的毒性研究婁宜嘉第2022/12/1

5第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)第二節(jié)刺激試驗(yàn)第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)周立國《藥物毒理學(xué)》第二版——局部毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑的急性毒性試驗(yàn)應(yīng)用于直腸、陰道制劑的急性毒性試驗(yàn)皮膚長期毒性試驗(yàn)皮膚刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)肌肉注射劑的局部刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的血管刺激試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑刺激試驗(yàn)局部封閉涂皮法皮內(nèi)致敏法皮內(nèi)和涂皮相結(jié)合的方法皮膚致敏試驗(yàn)注射給藥致敏性試驗(yàn)2022/11/305第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)周立國《藥物毒2022/12/1

6局部毒性試驗(yàn)

是為研究局部用藥后引起的毒性反應(yīng)而設(shè)計的試驗(yàn)。主要指皮膚、眼、鼻及吸入劑用藥，同時也包括局部作用于直腸和陰道的制劑。

研究的內(nèi)容：皮膚毒性試驗(yàn)，刺激試驗(yàn)，致敏試驗(yàn)。局部毒性是指局部用藥后引起的毒性反應(yīng)栓劑、軟膏劑、滴劑、洗劑、搽劑、透皮貼劑、噴霧劑、粉劑（外用）等劑型都必須進(jìn)行藥物的局部毒性試驗(yàn)。

2022/11/306局部毒性試驗(yàn)是為研究局部用藥后2022/12/1

7

第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)2022/11/307第一節(jié)皮膚毒性試2022/12/1

8表皮層真皮乳頭層真皮網(wǎng)織層真皮層第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)2022/11/308表皮層真皮乳頭層真皮網(wǎng)織層真皮層第2022/12/1

9人類不同部位皮膚角化層的差別很大，這些差別影響藥物的經(jīng)皮吸收。足底和手掌的角化層堅(jiān)硬而厚，約

400~600μm位于臂、背、腿和腹部的皮膚僅

8~15μm陰囊皮膚最薄第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)表皮角化層的差別2022/11/309人類不同部位皮膚角化層的差別很大，2022/12/1

10人類不同部位皮膚角化層的差別很大，這些差別影響藥物的經(jīng)皮吸收。足底和手掌的角化層堅(jiān)硬而厚，約

400~600μm位于臂、背、腿和腹部的皮膚僅

8~15μm陰囊皮膚最薄第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)表皮角化層的差別2022/11/3010人類不同部位皮膚角化層的差別很大2022/12/1

11藥物經(jīng)表皮吸收時角質(zhì)層棘層透明層基底層顆粒層基膜真皮層內(nèi)毛細(xì)血管第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)●

藥物經(jīng)皮膚吸收的兩條途徑

(1)通過表皮屏障而被吸收表皮屏障2022/11/3011藥物經(jīng)表皮吸收時角質(zhì)層棘層2022/12/1

12第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)●

藥物經(jīng)皮膚吸收的兩條途徑

(1)通過表皮屏障而被吸收(2)通過汗腺、皮脂腺和毛囊等皮膚附屬器吸收2022/11/3012第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)●藥物經(jīng)2022/12/1

13第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)●

藥物經(jīng)皮膚吸收的兩條途徑

(1)通過表皮屏障而被吸收(2)通過汗腺、皮脂腺和毛囊等皮膚附屬器吸收2022/11/3013第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)●藥物經(jīng)2022/12/1

1412藥物透過表皮進(jìn)入真皮

藥物由真皮進(jìn)入乳頭層毛細(xì)血管第一階段滲透相癥狀第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)第二階段吸收相藥物經(jīng)表皮屏障吸收包括兩相2022/11/301412藥物透過表皮進(jìn)入真皮藥物由2022/12/1

15進(jìn)行皮膚毒性試驗(yàn)時，盡量選擇皮膚解剖及生理與人類較近似的動物，目前多選用家兔、豚鼠或大鼠。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)只有同時在脂、水中易于溶解的藥物，才易通過皮膚進(jìn)入血液。2022/11/3015進(jìn)行皮膚毒性試驗(yàn)時，盡量選擇皮膚2022/12/1

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皮膚毒性試驗(yàn)是通過外用藥物作用于皮膚，觀察皮膚的吸收程度，來定性和定量地判斷藥物的毒性大小的試驗(yàn)。

第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑的急性毒性試驗(yàn)應(yīng)用于直腸、陰道制劑的急性毒性試驗(yàn)皮膚長期毒性試驗(yàn)2022/11/3016皮膚毒性試驗(yàn)2022/12/1

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[試驗(yàn)?zāi)康腯

觀察完整皮膚及破損皮膚在一次接觸

外用藥物短期內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。

[試驗(yàn)動物]

家兔2.0~3.0kg，每劑量組4只

豚鼠350~450g，每劑量組10只雌雄各半

大鼠200~300g，每劑量組10只

[試驗(yàn)藥物]

膏劑、液體或固體粉末。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)一2022/11/3017

[試驗(yàn)?zāi)康腯觀察完整2022/12/1

18

[準(zhǔn)備]

去毛:皮膚急性毒性試驗(yàn)一第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)脫毛劑配方：（1）硫化鋇與滑石粉以

4:1混合，加水調(diào)成糊狀.（2）硫化鈉與滑石粉以

3:1混合，加水調(diào)成糊狀.

時間：給藥前24h;部位：背部脊柱兩側(cè)；范圍：體表面積的10%家兔50cm2豚鼠、大鼠20cm22022/11/3018

[準(zhǔn)2022/12/1

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[準(zhǔn)備]

去毛:皮膚急性毒性試驗(yàn)一第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)

破損皮膚的制作:（1）用無菌手術(shù)刀片的尖端做“井”字劃痕；（2）砂紙打薄

——以滲血為度2022/11/3019

[準(zhǔn)2022/12/1

20

[劑量選擇及分組]

設(shè)三個劑量組（完整皮膚組和破損皮膚組），

組間距,一般以0.65~0.85為宜,

設(shè)賦形劑組或空白對照組。

若藥物劑量超過有效濃度20倍以上，仍未出現(xiàn)異常或死亡，則只設(shè)一個高劑量組。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)一2022/11/3020

[劑2022/12/1

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[給藥方法]

藥物是膏劑或液體一般不稀釋，可直接試驗(yàn)，若藥物是固體粉末則需用適當(dāng)水或適宜賦形劑（如羊毛脂、凡士林、橄欖油等）混勻，以保證藥物與皮膚良好的接觸。試驗(yàn)時，將藥物均勻地涂敷于動物背部去毛區(qū)，并用無刺激性紗布、膠布加以固定。敷藥物24h后，可用溫水或適當(dāng)溶劑消除殘留的藥物或賦形劑，每日觀察，連續(xù)7~14天。皮膚急性毒性試驗(yàn)一第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)2022/11/3021

[給藥方法]2022/12/1

22

[觀察]

給藥后要注意動物全身中毒表現(xiàn)和死亡情況，包括動物體重、皮膚、毛發(fā)、眼睛和粘膜的變化，呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等變化。若遇有死亡動物則需進(jìn)行尸檢和肉眼觀察，當(dāng)有肉眼可見病變時，則需進(jìn)行病理學(xué)檢查。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)一2022/11/3022

[觀2022/12/1

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[報告]

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，將數(shù)據(jù)綜合成表格形式，說明實(shí)驗(yàn)開始時各組的動物數(shù)，不同劑量組中各個體動物死亡的時間，出現(xiàn)其它毒性癥狀的動物數(shù)，毒性反應(yīng)的描述和尸檢所見。最后根據(jù)觀察各組動物死亡的累積數(shù)，用相應(yīng)的統(tǒng)計學(xué)方法計算LD50。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)一2022/11/3023

第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮2022/12/1

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[試驗(yàn)?zāi)康腯

觀察受試動物一次滴入或吸入給予

藥物后所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況。

[試驗(yàn)動物]

健康家兔

2.5kg±，每劑量組4只

豚鼠250~300g，每劑量組10只雌雄各半

大鼠250~300g，每劑量組10只

[試驗(yàn)藥物]

液體或粉末劑。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑毒性試驗(yàn)二2022/11/3024

[試驗(yàn)?zāi)康腯觀察受試2022/12/1

25

[劑量選擇及分組]

一般設(shè)三個劑量組,

組間距一般以0.65~0.85為宜，

設(shè)賦形劑或空白對照組。

若在大劑量組(超過預(yù)計臨床用量的50倍以上)未出現(xiàn)死亡情況,則只須設(shè)一個高劑量組。

[給藥方法]

滴入或吸入不同濃度的藥物。至少接觸4小時。給藥物后即刻觀察7~14天。滴鼻劑和吸入劑毒性試驗(yàn)二第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)2022/11/3025

[劑量選擇及分組2022/12/1

26

[觀察]

動物全身狀況，體重、呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等變化，若出現(xiàn)死亡則應(yīng)做病理組織學(xué)檢查。

[報告]

試驗(yàn)結(jié)果與對照組比較進(jìn)行判斷，如果能測出LD50

值，應(yīng)按“小鼠、大鼠急性毒性試驗(yàn)要求”

計算。滴鼻劑和吸入劑毒性試驗(yàn)二第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)2022/11/3026

[觀2022/12/1

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[試驗(yàn)?zāi)康腯

觀察動物直腸或陰道一次接觸藥物后，由于吸附所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況。

[試驗(yàn)動物]

健康家兔體重為2.5kg左右，每組

4只；

大鼠體重為250g左右，每組10只；

雌雄各半。

[試驗(yàn)藥物]

栓劑、液體或膏劑。應(yīng)用于直腸、陰道制劑的毒性試驗(yàn)三第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)2022/11/3027

[試驗(yàn)?zāi)康腯2022/12/1

28

[劑量的選擇及分組]

設(shè)三個劑量組，組間距一般以0.65~0.85為宜，

設(shè)賦形劑或空白對照組。

大劑量組(超過預(yù)計臨床用量的50倍以上)未出現(xiàn)死亡情況時，則只須設(shè)一個高劑量組。

[給藥方法]

將藥物輕輕置入動物直腸或陰道

內(nèi),與其粘膜至少接觸4小時。給藥物后即刻觀察及7~14天。應(yīng)用于直腸、陰道制劑的毒性試驗(yàn)三第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)2022/11/3028

[劑量的選擇及2022/12/1

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[觀察]

觀察動物全身狀況，體重、呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等變化。若出現(xiàn)死亡時應(yīng)做動物病理組織學(xué)檢查。

[報告]

試驗(yàn)結(jié)果與對照組比較進(jìn)行判斷，如果能測出LD50

值，應(yīng)按“小鼠、大鼠急性毒性試驗(yàn)要求”

計算。應(yīng)用于直腸、陰道制劑的毒性試驗(yàn)三第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)2022/11/3029

[觀2022/12/1

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[試驗(yàn)?zāi)康腯

觀察動物皮膚長期接觸受試藥物經(jīng)皮膚滲透或吸收后對機(jī)體產(chǎn)生的異常反應(yīng)及其可逆程度。

[試驗(yàn)動物]

健康家兔2.0~3.0kg，每組

6只

大鼠200~300g，每組10只

雌雄各半豚鼠350~450g，每組10只

[試驗(yàn)藥物]膏劑、液體或粉末。粉末需用賦形劑（羊毛脂、凡士林等）混勻。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚長期毒性試驗(yàn)四2022/11/3030

[試驗(yàn)?zāi)康腯2022/12/1

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[準(zhǔn)備]

于給藥前24小時將動物背部脊柱兩側(cè)脫毛，去毛范圍大約相當(dāng)于表面積的10%左右。破損皮膚的制作。

[劑量選擇及分組]

一般選用三個劑量組，并需設(shè)賦形劑組和空白對照組。若在預(yù)試中所用受試動物劑量超過預(yù)計人用量的20倍以上，仍未見到毒性反應(yīng)及死亡時，則只須設(shè)一個高劑量組。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚長期毒性試驗(yàn)四2022/11/3031

[準(zhǔn)2022/12/1

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[給藥方法]

將藥物均勻地涂敷于動物背部約占10%的表面積上，對于毒性高的藥物，覆蓋面積可少一些，

但要以盡可能均勻的薄層覆蓋在體表面上，并在涂敷后用紗布、膠布等加以固定，每日一次，每次至少接觸6小時。按臨床用藥療程的3倍以上時間連續(xù)給藥。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚長期毒性試驗(yàn)四2022/11/3032

[給藥方法]2022/12/1

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[注意]

如果受試動物涂抹后產(chǎn)生了嚴(yán)重的皮膚刺激毒性反應(yīng)，應(yīng)該中止試驗(yàn)，重新設(shè)計試驗(yàn)方案，以較低劑量進(jìn)行一次新的試驗(yàn)。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚長期毒性試驗(yàn)四2022/11/3033

[注2022/12/1

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[觀察指標(biāo)]

在整個試驗(yàn)期間應(yīng)該認(rèn)真記錄所觀察到的毒性反應(yīng)，包括其出現(xiàn)時間、程度、持續(xù)時間?；\旁觀察反應(yīng)包括皮膚、毛、眼睛和粘膜的變化、呼吸、循環(huán)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，四肢活動和行為方式等的變化。但不局限于此，要每周測量進(jìn)食量和動物體重。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，檢查項(xiàng)目均同大鼠長期毒性試驗(yàn)的要求。

第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚長期毒性試驗(yàn)四2022/11/3034

[觀察指標(biāo)]2022/12/1

35

[報告]

應(yīng)寫明安全劑量、中毒劑量、中毒表現(xiàn)、中毒的靶器官及中毒的可逆程度等。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚長期毒性試驗(yàn)四2022/11/3035

[報2022/12/1

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第二節(jié)刺

激

試

驗(yàn)2022/11/3036第二節(jié)刺激試驗(yàn)2022/12/1

37

刺激試驗(yàn)是指觀察皮膚、結(jié)膜及粘膜等接觸受試藥物后所產(chǎn)生的刺激反應(yīng)情況。分1次給藥的刺激試驗(yàn)和多次給藥的刺激試驗(yàn)。第二節(jié)刺激試驗(yàn)刺激試驗(yàn)皮膚刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑刺激試驗(yàn)肌肉注射劑的局部刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的血管刺激試驗(yàn)一次給藥多次給藥2022/11/3037

刺激試驗(yàn)是指觀2022/12/1

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皮膚刺激試驗(yàn)是指皮膚接觸藥物是否產(chǎn)生可逆性炎性癥狀的試驗(yàn)。

目前多選用家兔和豚鼠。對于強(qiáng)刺激或無刺激作用的藥物用家兔檢測效果好，但對作用緩和的刺激藥物用豚鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果較準(zhǔn)確。第二節(jié)刺激試驗(yàn)皮膚刺激試驗(yàn)一2022/11/3038

皮膚刺激試驗(yàn)是2022/12/1

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[試驗(yàn)?zāi)康腯

觀察皮膚在接觸藥物后是否產(chǎn)生可逆性炎性癥狀。

[試驗(yàn)動物及試驗(yàn)藥物]

均同皮膚急性毒性試驗(yàn)。

第二節(jié)刺激試驗(yàn)皮膚刺激試驗(yàn)一2022/11/3039

[試驗(yàn)?zāi)康腯2022/12/1

40

[試驗(yàn)方法]

至少選用3只家兔或5只豚鼠。

●

一次皮膚涂抹實(shí)驗(yàn)：

脫毛后，將藥物1m1(液體)或1.0g(固體)涂于藥物區(qū)和破損皮膚區(qū)，每區(qū)均為體表面積的3%~5%，各區(qū)之間留有適當(dāng)距離。賦形劑則涂于對照區(qū)，用適宜方法固定。24小時后用溫水或無刺激性溶劑去除殘留藥物及賦形劑。去除藥物后1、24、48小時和72小時觀察涂抹部位有無紅斑和水腫等情況，以及上述變化的恢復(fù)情況和時間。第二節(jié)刺激試驗(yàn)皮膚刺激試驗(yàn)一2022/11/3040

[試驗(yàn)方法]至少選用2022/12/1

41

[試驗(yàn)方法]

至少選用3只家兔或5只豚鼠。

●多次皮膚刺激實(shí)驗(yàn)：多次給藥實(shí)驗(yàn)則一般每日涂抹一次,連續(xù)一周,其余均與一次給藥物的方法和要求一致。第二節(jié)刺激試驗(yàn)皮膚刺激試驗(yàn)一2022/11/3041

[試驗(yàn)方法]至少選用

[結(jié)果判斷與評價]

每只動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果按下表進(jìn)行刺激反應(yīng)評分。

皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)

刺激反應(yīng)

分值

刺激反應(yīng)

分值紅斑：

水腫：

無紅斑

0無水腫

0

勉強(qiáng)可見

1

勉強(qiáng)可見

1

中度紅斑

2

明顯可見

2

嚴(yán)重紅斑

3

皮膚隆起輪廓清楚

3

紫紅色紅斑并有

4

皮膚隆起約1mm并

4

焦痂形成

范圍擴(kuò)大

總分8

第二節(jié)刺激試驗(yàn)42任立群[結(jié)果判斷與評價]皮膚刺激反2022/12/1

43

皮膚刺激強(qiáng)度評價

刺激反應(yīng)

分值

無刺激性

﹤0.5(0-0.4)

輕度刺激性

﹤2.0(0.5-1.9)3.0

中度刺激性

﹤6.0(2.0-5.9)

強(qiáng)刺激性

﹥

6.0(6.0-8.0)

計算出平均分值按下表進(jìn)行刺激強(qiáng)度評價:第二節(jié)刺激試驗(yàn)2022/11/3043皮膚刺2022/12/1

44

直接接觸引起的刺激作用第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二藥物作用于眼的方式2022/11/3044

直接接觸引起的刺激作用第二節(jié)2022/12/1

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通過全身給藥也能影響角膜,如氯喹、氯普馬嗪等。Potts等曾觀察到這些藥物對角膜有損傷，其作用可能是通過淚管或通過血—房水屏障，這些作用對人來說僅在較大劑量情況下才發(fā)生。全身給藥是否會引起角膜的損傷第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二？直接接觸引起的刺激作用藥物作用于眼的方式2022/11/3045

通過全身給藥也2022/12/1

46

直接接觸引起的刺激作用第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二藥物作用于眼的方式全身給藥引起角膜損傷2022/11/3046

直接接觸引起的刺激作用第二節(jié)2022/12/1

47

由藥物直接接觸角膜所引起的刺激作用，表現(xiàn)為炎癥。

如果短時間接觸刺激性較強(qiáng)的藥物，引起角膜結(jié)膜炎、角膜表層水腫、上皮脫落；結(jié)膜充血、水腫、發(fā)生灼痛、流淚、畏光等。

如果長時間接觸刺激性較弱的藥物，可引起慢性結(jié)膜炎或瞼腺炎,表現(xiàn)出充血、分泌物增多等。第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二接觸刺激物后角膜的表現(xiàn)2022/11/3047

由藥物直接接觸2022/12/1

48

1.

兔和猴：對猴眼有中等刺激(主要是表層的改變

和水腫以及輕微的表層改變)的物質(zhì)，可引

起兔眼的嚴(yán)重反應(yīng)，包括不同程度的角膜混

濁、血管翳形成以及結(jié)膜炎。

第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二不同物種之間眼對刺激反應(yīng)的差異2022/11/3048

1.兔和猴：對2022/12/1

49

2.兔與人：（1）對各種物質(zhì)刺激后流淚的量不一樣；（2）兔眨眼次數(shù)較人少（20次/5分鐘）；

（3）兔淚水與人和其它動物淚水pH值不一樣

（兔，8.2；人，7.1~7.3；猴，

7.4）；

第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二不同物種之間眼對刺激反應(yīng)的差異2022/11/3049

2.兔與人2022/12/1

50

（4）兔角膜損傷后，因其眼腺有豐富的血管叢，對損傷的反應(yīng)快而強(qiáng)烈，又因角膜基質(zhì)松弛，因此易有新生血管和血管翳形成，且形成迅速(比人和猴快)，通常在4~7天形成，如果角膜損傷較大時，在14天內(nèi)翳將包裹整個角膜。一般情況下,雖可消退一點(diǎn),但不會完全消失,而終生殘留下來。當(dāng)人眼有翳反應(yīng)時,一般都伴有慢性疾病,而不是急性刺激作用,在治療后，翳可能消退。（5）兔眼瞬膜大，而人則已消退。第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二不同物種之間眼對刺激反應(yīng)的差異2022/11/3050

（4）兔角膜2022/12/1

51

3.不同種屬眼的各個部位反應(yīng)是不同的。如

兔眼虹膜和結(jié)膜反應(yīng)強(qiáng)；

角膜反應(yīng)狗眼強(qiáng)，猴眼反應(yīng)輕

猴的虹膜有色素，對虹膜血管充血改變不便觀察。

第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二不同物種之間眼對刺激反應(yīng)的差異2022/11/3051

3.2022/12/1

52

因此，目前仍首選白兔來作眼刺激試驗(yàn)。第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二

也可使用狗和靈長類。

如果是研究藥物對晶狀體、視網(wǎng)膜和眼神經(jīng)的作用，可選用大鼠和貓。2022/11/3052

因此，目前仍首選白兔來2022/12/1

53

[試驗(yàn)?zāi)康腯

用于評價藥物的眼刺激作用。特別是眼科用藥，必須進(jìn)行動物的眼刺激試驗(yàn)，以保證臨床用藥的安全性。

第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二2022/11/3053

[試驗(yàn)?zāi)康腯2022/12/1

54

[試驗(yàn)動物]

首選白色家兔，至少4只，體重2~3kg。

第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二

[試驗(yàn)藥物]

液體或膏劑。2022/11/3054

[試驗(yàn)動物]2022/12/1

55

①家兔來源廣，較馴服，便于操作，價格相對

便宜，并且易飼養(yǎng)；②白兔的眼球大，角膜表面積和球結(jié)膜范圍都

大，易于觀察；③虹膜無色素，便于對虹膜血管的改變進(jìn)行觀

測和攝像。

第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二選用白色家兔作眼刺激試驗(yàn)的優(yōu)越性2022/11/3055

①家兔來源廣，較馴服，便于操2022/12/1

56

[試驗(yàn)方法]

●

一次性眼刺激試驗(yàn)：將液態(tài)或軟膏0.1ml或0.1g直接滴入或涂入實(shí)驗(yàn)動物一側(cè)結(jié)膜囊內(nèi)，另一側(cè)眼作為對照。滴藥后使眼被動閉合5~10秒，記錄滴藥后6、24、48小時和72小時對眼的局部反應(yīng)，第4、7天觀察恢復(fù)情況，觀察時應(yīng)用熒光素鈉檢查角膜損害，用裂隙燈檢查角膜透明度、虹膜紋理改變。

如果藥物明顯引起眼刺激反應(yīng)，可再選用6只動物，將藥物滴入一側(cè)結(jié)膜囊內(nèi)，接觸4秒或30秒后用生理鹽水沖洗干凈，再觀察眼的刺激反應(yīng)。

第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二2022/11/3056

[試驗(yàn)方法]第2022/12/1

57

[實(shí)驗(yàn)方法]

●

多次性眼刺激試驗(yàn)：凡臨床用藥時間長（超過1周）的藥物要進(jìn)行多次性的眼刺激試驗(yàn),一般連續(xù)給藥1周以上。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,繼續(xù)觀察7~14天。

第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二2022/11/3057

[實(shí)驗(yàn)方法]第2022/12/1

58

[結(jié)果判斷與評價]

按要求,將每只動物的眼角膜、虹膜和結(jié)膜的刺激反應(yīng)的分值相加,即是一只受試動物眼刺激反應(yīng)的總積分。把每個受試動物的刺激反應(yīng)積分的總和除以動物數(shù),就是該受試物對眼刺激性的最后分值。

第二節(jié)刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)二2022/11/3058

[結(jié)果判斷與評價]2022/12/1

59

[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯

觀察藥物一次或多次滴入或吸入給予后所產(chǎn)生的刺激反應(yīng)情況。

[試驗(yàn)動物、藥物及試驗(yàn)分組]

同滴鼻劑和吸入劑的急性毒性試驗(yàn)。第二節(jié)刺激試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑刺激試驗(yàn)三2022/11/3059

[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯第二節(jié)刺2022/12/1

60

[試驗(yàn)方法]一次性給藥刺激試驗(yàn)方法及觀察:

實(shí)驗(yàn)時將藥物滴入或噴霧于動物，使藥物與其粘膜接觸至少4小時。然后于24小時處死動物，取出局部粘膜組織，觀察有無充血、紅腫等現(xiàn)象。若有變化則須進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

第二節(jié)刺激試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑刺激試驗(yàn)三2022/11/3060

[試驗(yàn)方法]第二節(jié)刺2022/12/1

61

[試驗(yàn)方法]多次給藥物實(shí)驗(yàn)：

一般每日滴入或吸入一次，連續(xù)一周，于末次給藥24小時后處死動物。其它均與一次給藥的方法和要求一致。第二節(jié)刺激試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑刺激試驗(yàn)三

[結(jié)果判斷]

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與對照組比較進(jìn)行判斷。2022/11/3061

[試驗(yàn)方法]第二節(jié)刺2022/12/1

62

[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯

觀察藥物肌內(nèi)注射后是否產(chǎn)生局部刺激作用。

[方法]

家兔6只。一側(cè)股四頭肌肌內(nèi)注射受試藥1~2ml/只，另一側(cè)注射等量生理鹽水作對照。48h后放血處死家兔，取股四頭肌縱向剖開，觀察注射部位肌肉的刺激反應(yīng)。也可做病理學(xué)檢查。第二節(jié)刺激試驗(yàn)肌肉注射劑的局部刺激試驗(yàn)四2022/11/3062

[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯2022/12/1

63

第二節(jié)刺激試驗(yàn)肌肉注射劑的局部刺激試驗(yàn)四肌肉注射劑刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)2022/11/3063

第二節(jié)刺激試驗(yàn)肌肉注射劑的局2022/12/1

64

第二節(jié)刺激試驗(yàn)肌肉注射劑的局部刺激試驗(yàn)四[結(jié)果判定]

3只家兔的平均反應(yīng)值在2分以下者，可認(rèn)為符合規(guī)定；如平均反應(yīng)分值在2~3分，應(yīng)分取5只家兔復(fù)試，結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)同上；如超過2例認(rèn)為不符合規(guī)定，不可供肌內(nèi)注射用。或通過病理組織學(xué)檢查判定是否具有明顯刺激作用。2022/11/3064

第二節(jié)刺激試驗(yàn)肌肉注射劑的局2022/12/1

65

第二節(jié)刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的血管刺激試驗(yàn)五

[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯

觀察受試靜脈注射劑經(jīng)多次靜脈注射后對血管刺激反應(yīng)情況。

[方法]

家兔6只。隨機(jī)分成受試物和對照2組，每組3只。耳緣靜脈注射受試藥及生理鹽水，每天1次，連續(xù)3天。每天給藥前及最后一次給藥后48~96h對動物和注射部位進(jìn)行肉眼觀察，確定是否出現(xiàn)明顯的腫脹、充血和壞死等刺激癥狀。在最后一次給藥后48~96h取家兔耳注射部位和向前5cm部位的血管組織制作病理切片檢查。2022/11/3065

第二節(jié)刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的血2022/12/1

66

第二節(jié)刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的全身毒性試驗(yàn)血管刺激試驗(yàn)體外溶血試驗(yàn)過敏試驗(yàn)熱原試驗(yàn)2022/11/3066

第二節(jié)刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的全2022/12/1

67

第二節(jié)刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的全身毒性試驗(yàn)血管刺激試驗(yàn)體外溶血試驗(yàn)過敏試驗(yàn)熱原試驗(yàn)常規(guī)的體外試管法改進(jìn)的體外溶血性試驗(yàn)體外紅細(xì)胞計數(shù)體內(nèi)溶血試驗(yàn)2022/11/3067

第二節(jié)刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的全2022/12/1

68

第二節(jié)刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的全身毒性試驗(yàn)血管刺激試驗(yàn)體外溶血試驗(yàn)過敏試驗(yàn)熱原試驗(yàn)全身主動過敏試驗(yàn)（ASA）被動皮膚過敏試驗(yàn)（PCA）豚鼠最大化試驗(yàn)和Buehler試驗(yàn)（BT）2022/11/3068

第二節(jié)刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的全2022/12/1

69

第二節(jié)刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的全身毒性試驗(yàn)血管刺激試驗(yàn)體外溶血試驗(yàn)過敏試驗(yàn)熱原試驗(yàn)

給家兔靜脈注射一定劑量的受試藥，觀察家兔體溫升高情況，以判定受試物是否有致熱原作用。取家兔3只，測定正常體溫，于15分鐘內(nèi)耳緣靜脈緩慢注入溫?zé)嶂?8℃的受試物。然后每隔1小時測定體溫1次。共測3次，以3次體溫中最高一次減去正常體溫，即為該家兔體溫升高度數(shù)。如3只家兔中有一只體溫升高0.6℃以上，或3只家兔體溫升高量均低于0.6℃，但升高的總數(shù)達(dá)1.4℃以上時，應(yīng)另取5只家兔受試，檢查方法同上。復(fù)試的5只家兔中，體溫升高0.6℃或以上的家兔不超過一只，并且初試復(fù)試合并8只家兔體溫升高總數(shù)不超過3.5℃時，可以認(rèn)為受試物符合熱原檢查規(guī)定；否則認(rèn)為不符合熱原檢查規(guī)定。2022/11/3069

第二節(jié)刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的全致

敏

作

用（反應(yīng)）70

致敏作用（反應(yīng)）70

當(dāng)皮膚接觸某些藥物時，可表現(xiàn)出極小的反應(yīng)

或沒有任何反應(yīng)。但是當(dāng)隨后再接觸該藥物時，可

發(fā)生一種更嚴(yán)重的特異性免疫反應(yīng)，即致敏作用。

幾天到幾年。

常見于局部涂敷藥物處。

概念

潛伏期

發(fā)生部位致敏作用71任立群當(dāng)皮膚接觸某些藥物時，可表現(xiàn)出極小的

過敏反應(yīng)是一種不同于藥物的一般毒性作用的特殊效應(yīng)。藥物過敏性反應(yīng)的表現(xiàn)是多種多樣的，可累及各器官系統(tǒng)，表現(xiàn)為皮炎，血管性水腫，嚴(yán)重者可致過敏性休克。

過敏性皮炎為皮膚出現(xiàn)大片紅色丘疹，局部癢、灼熱有時伴有發(fā)燒、煩躁不安、胸悶、惡心、嚴(yán)重者可致心律失常、溶血反應(yīng)，甚至致死。

反應(yīng)表現(xiàn)致敏作用72任立群過敏反應(yīng)是一種不同于藥物的一般毒性作用反應(yīng)

大多數(shù)藥物可能屬于半抗原，它們及其代謝產(chǎn)物在體內(nèi)與蛋白質(zhì)結(jié)合而形成完全抗原。

具有致敏作用的藥物稱為藥物致敏原或藥物致敏物。

在皮膚中除了血漿蛋白之外,還有15種不同類型的抗原蛋白,這些蛋白可以與半抗原結(jié)合。

在人類，由藥物引起的過敏反應(yīng)，就大多數(shù)藥物而言，通常不超過所接觸者的百分之幾。但是，某些藥物卻幾乎可使多數(shù)人接觸致敏。73任立群大多數(shù)藥物可能屬于半抗原，它們及其代謝產(chǎn)

1.病理變化不同于該藥物引起的一般中毒性改變，而是免疫性反應(yīng)癥。

2.不容易找到藥物毒理學(xué)中的一般毒性的劑量一效應(yīng)規(guī)律。

3.經(jīng)一定潛伏期后，再次接觸藥物才能激發(fā)出特定癥狀。

藥物致敏作用的特點(diǎn)74任立群1.病理變化不同于該藥物引起的一般中毒性藥物致敏作

1.致敏原形成過敏反應(yīng)的三要素

2.

致敏條件

3.激發(fā)致敏原作用后經(jīng)一定潛伏期，再接

觸同種致敏原時才激發(fā)過敏反應(yīng)。75任立群1.致敏原形成過敏反應(yīng)的三要素2.致敏條

1.應(yīng)用于皮膚、粘膜等的局部用藥。

2.與己知具有致敏性的藥物結(jié)構(gòu)或藥理作用

類似者。

3.在藥物合成生產(chǎn)中已表現(xiàn)出或可疑引起皮

膚刺激、皮炎或接觸性皮炎等的藥物。優(yōu)先考慮致敏試驗(yàn)的情況76任立群1.應(yīng)用于皮膚、粘膜等的局部用藥。優(yōu)先考慮致敏試驗(yàn)2022/12/1

77第三節(jié)皮

膚

致

敏

實(shí)

驗(yàn)2022/11/3077第三節(jié)皮膚致敏實(shí)驗(yàn)2022/12/1

78

[試驗(yàn)?zāi)康腯

通過動物皮膚重復(fù)接觸受試藥物，觀察機(jī)體免疫系統(tǒng)反應(yīng)在皮膚上的表現(xiàn)。

[試驗(yàn)動物]

豚鼠250~300g。

[備皮]

于給藥前24小時將豚鼠背部兩側(cè)毛脫掉，去毛范圍每側(cè)約3cm×3cm。

第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)2022/11/3078[試驗(yàn)?zāi)康腯2022/12/1

79

[試驗(yàn)藥物]

若藥物是液體、膏劑一般不稀釋，可直接實(shí)驗(yàn)。若藥物為固體粉末，則需用適量水或適宜的賦形劑混勻以保證藥物與皮膚的良好接觸。

陽性致敏物：

2.4—二硝基氯代苯制成1%的致敏濃度和0.1%的激發(fā)濃度（用70%乙醇配制）。（對苯二胺、二鉻化鉀、磺胺新霉素、磺化鎳等）第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)2022/11/3079[試驗(yàn)藥物]第2022/12/1

80

[試驗(yàn)分組]

將豚鼠按體重性別隨機(jī)分成三組，每組10只(雌雄各半)。第一組給藥，第二組空白對照(涂賦形劑)，第三組陽性對照(涂陽性致敏物)。第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)2022/11/3080[試驗(yàn)分組]第三節(jié)皮膚致敏2022/12/1

81

[試驗(yàn)方法]

致敏接觸:

取藥物0.1~0.2mg(或g)涂在動物左側(cè)脫毛區(qū)，用適宜方法固定，持續(xù)6小時。動物分籠飼養(yǎng)。第7天和第14天，以同樣方法重復(fù)一次?？瞻讓φ战M與陽性對照組方法同上。第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)局部封閉涂皮法致敏2022/11/3081[試驗(yàn)方法]第三節(jié)皮膚致2022/12/1

82

[試驗(yàn)方法]激發(fā)接觸:

于末次給藥致敏后14天，將藥物0.1~0.2ml(或g)涂于同一豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)，6小時后去掉藥物，即刻觀察，然后于24、48、72小時再次觀察皮膚過敏反應(yīng)情況，按表評分（空白對照與陽性對照方法均同藥物）判斷藥物對皮膚過敏反應(yīng)性質(zhì)。第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)2022/11/3082[試驗(yàn)方法]第三節(jié)皮膚致2022/12/1

83

皮膚致敏反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)皮膚反應(yīng)

分值

皮膚反應(yīng)

分值紅斑形成：

水腫形成：

無紅斑

0

無水腫

0

輕度紅斑

1

輕度水腫

1

中度紅斑

2

中度水腫

2

重度紅斑

3

重度水腫

3

水腫性紅斑

4

最高積分

7

第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)2022/11/3083皮膚致敏反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)第三節(jié)2022/12/1

84

[結(jié)果判斷與評價]

除按上表評分外，還可按上表的分類判斷其致敏率。致敏率的計算是:

將出現(xiàn)皮膚紅斑或水腫(不論程度輕重)的動物例數(shù)除以受試動物總數(shù)。第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)2022/11/3084[結(jié)果判斷與2022/12/1

85

致敏率分類

致敏率（%）反應(yīng)強(qiáng)度

1-10弱致敏性

20-30

輕度致敏性

40-60

中度致敏性

70-80

重度致敏性

90-100

極度致敏性

第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)2022/11/3085致敏率分類第三節(jié)皮膚致敏試2022/12/1

86

[試驗(yàn)方法]致敏接觸:第一天在豚鼠背部一側(cè)去毛區(qū)內(nèi)注射受試藥物溶液或乳劑0.05ml（0.1%），第二天觀察反應(yīng)，第三天開始繼續(xù)在同側(cè)3cm×4cm去毛區(qū)內(nèi)按同法給藥，劑量增至每次0.1ml，給藥每隔一日進(jìn)行，給藥部位依次更換，如此給藥9次。對照組不給藥。第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)皮內(nèi)法致敏2022/11/3086[試驗(yàn)方法]第三節(jié)皮膚致敏2022/12/1

87

[試驗(yàn)方法]激發(fā)接觸:末次致敏后14天在豚鼠背部另一側(cè)去毛區(qū)皮內(nèi)注射0.05ml（0.1%）藥物，24小時后觀察反應(yīng)，必要時在致敏后28天再重復(fù)進(jìn)行第二次激發(fā)；對照組作同樣處理。

[評價]

該法的致敏劑量準(zhǔn)確，對中等致敏強(qiáng)度的藥物比較合適。第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)皮內(nèi)法致敏2022/11/3087[試驗(yàn)方法]第三節(jié)皮膚致2022/12/1

88

[試驗(yàn)方法]0.1ml福氏完全佐劑(由輕質(zhì)石蠟油或月桂基

硫酸鈉分枝桿菌50~100μl/m1組成,臨用時

加4:1羊毛脂或吐溫80等乳化劑,經(jīng)高壓消

毒后,再與等量鹽水研磨成乳濁液）。②0.1ml藥物。③0.1ml藥物與福氏完全佐劑的等量混合物。[受試藥的準(zhǔn)備]第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)皮內(nèi)和致敏相結(jié)合2022/11/3088[試驗(yàn)方法]0.1ml福氏2022/12/1

89

[試驗(yàn)方法]

致敏接觸:

第

1天在豚鼠頸部4cm×6cm去毛區(qū)的脊柱兩側(cè)從頭向尾成對稱性的皮內(nèi)注射0.1ml—①福氏完全佐劑②受試藥③受試藥與福氏完全佐劑

第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)皮內(nèi)和致敏相結(jié)合2022/11/3089[試驗(yàn)方法]致敏接觸:第2022/12/1

90

[試驗(yàn)方法]

致敏接觸:

第8天用2cm×4cm濾紙涂以適當(dāng)賦形劑配成的藥物斑，貼于豚鼠頸部的注射部位，持續(xù)封閉固定48小時作為第二次致敏，以加強(qiáng)致敏作用。對無皮膚刺激作用的藥物，可在第2次致敏前24小時用10%月桂基硫酸鈉涂于斑貼處。對照組只用溶劑和賦形劑致敏、激發(fā)。第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)皮內(nèi)和致敏相結(jié)合2022/11/3090[試驗(yàn)方法]致敏接觸:第2022/12/1

91激發(fā)接觸:

末次致敏后14~28天分別用2cm×2cm濾紙涂以藥物及賦形劑，貼于豚鼠肩胛區(qū)左右兩側(cè)去毛區(qū)，持續(xù)封閉固定24小時，激發(fā)后24小時和48小時觀察反應(yīng)，對照組作同樣處理。第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)皮內(nèi)和致敏相結(jié)合

[試驗(yàn)方法]

2022/11/3091激發(fā)接觸:第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)2022/12/1

92第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)皮內(nèi)和致敏相結(jié)合

[評價]

對致敏物檢測率最高，尤其適用于弱致敏物的篩選。此方法已被Magnusmn（1980）推薦為篩選化學(xué)物接觸致敏作用的標(biāo)準(zhǔn)方法。

2022/11/3092第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)皮內(nèi)和致敏相2022/12/1

93

[結(jié)果判斷與評價

]

動物皮膚反應(yīng)強(qiáng)度和致敏陽性率表示。皮膚反應(yīng)強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)見下表。皮膚反應(yīng)強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)

皮膚反應(yīng)

分值

未見改變

0

輕度散在紅斑

1

中度或融合紅斑

2

重度紅斑和水腫

3

并依此比較實(shí)驗(yàn)組和對照組所應(yīng)差異的顯著性，確定被試藥物有否致敏作用。致敏陽性率是陽性動物數(shù)和實(shí)驗(yàn)動物數(shù)比值的百分率，據(jù)此百分率可對藥物致敏強(qiáng)度進(jìn)行分級。第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)2022/11/3093[結(jié)果判斷與評價]動物皮2022/12/1

94

—局部毒性實(shí)驗(yàn)及研究內(nèi)容

致敏作用

皮膚毒性試驗(yàn)的內(nèi)容皮膚急性毒性試驗(yàn)的概念

眼刺激試驗(yàn)有幾種方式

皮膚致敏試驗(yàn)有幾種方法皮膚急性毒性試驗(yàn)的目的

選用白色家兔作眼刺激試驗(yàn)的優(yōu)越性皮膚急性毒性試驗(yàn)、滴鼻劑和吸入劑、應(yīng)用于直腸、陰道制劑的急性毒性試驗(yàn)的劑量組如何設(shè)置？本章復(fù)習(xí)2022/11/3094—局部毒性2022/12/1

95局部毒性試驗(yàn)

Partialtoxicitytest

2022/11/301局部毒性試驗(yàn)2022/12/1

96局部毒性試驗(yàn)

是為研究局部用藥后引起的毒性反應(yīng)而設(shè)計的試驗(yàn)。主要指皮膚、眼、鼻及吸入劑用藥，同時也包括局部作用于直腸和陰道的制劑。

研究的內(nèi)容：皮膚毒性試驗(yàn)，刺激試驗(yàn)，致敏試驗(yàn)。局部毒性是指局部用藥后引起的毒性反應(yīng)2022/11/302局部毒性試驗(yàn)是為研究局部用藥后2022/12/1皮膚毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑的急性毒性試驗(yàn)應(yīng)用于直腸、陰道制劑的急性毒性試驗(yàn)皮膚長期毒性試驗(yàn)局部毒性試驗(yàn)致敏試驗(yàn)局部封閉涂皮法皮內(nèi)致敏法皮內(nèi)和涂皮相結(jié)合的方法刺激試驗(yàn)皮膚刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑刺激試驗(yàn)應(yīng)用于直腸、陰道制劑刺激試驗(yàn)肌肉注射劑的局部刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的血管刺激試驗(yàn)一次給藥多次給藥97任立群2022/11/30皮膚毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)局部毒性試驗(yàn)2022/12/1

98第一節(jié)皮膚用藥的毒性研究第二節(jié)眼用藥刺激性試驗(yàn)第三節(jié)肌內(nèi)注射用藥局部刺激性試驗(yàn)第四節(jié)靜脈給藥局部刺激性試驗(yàn)第五節(jié)滴鼻劑和吸入劑的毒性試驗(yàn)第六節(jié)應(yīng)用于直腸、陰道制劑的毒性試驗(yàn)婁宜嘉第二版《藥物毒理學(xué)》——局部毒性試驗(yàn)皮膚用藥的急性毒性試驗(yàn)皮膚用藥的長期毒性試驗(yàn)皮膚用藥的刺激試驗(yàn)皮膚吸收試驗(yàn)皮膚光敏試驗(yàn)皮膚過敏試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑刺激試驗(yàn)直腸、陰道用藥的急性毒性試驗(yàn)直腸、陰道用藥的長期毒性試驗(yàn)直腸、陰道用藥刺激試驗(yàn)2022/11/304第一節(jié)皮膚用藥的毒性研究婁宜嘉第2022/12/1

99第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)第二節(jié)刺激試驗(yàn)第三節(jié)皮膚致敏試驗(yàn)周立國《藥物毒理學(xué)》第二版——局部毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑的急性毒性試驗(yàn)應(yīng)用于直腸、陰道制劑的急性毒性試驗(yàn)皮膚長期毒性試驗(yàn)皮膚刺激試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)肌肉注射劑的局部刺激試驗(yàn)靜脈注射劑的血管刺激試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑刺激試驗(yàn)局部封閉涂皮法皮內(nèi)致敏法皮內(nèi)和涂皮相結(jié)合的方法皮膚致敏試驗(yàn)注射給藥致敏性試驗(yàn)2022/11/305第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)周立國《藥物毒2022/12/1

100局部毒性試驗(yàn)

是為研究局部用藥后引起的毒性反應(yīng)而設(shè)計的試驗(yàn)。主要指皮膚、眼、鼻及吸入劑用藥，同時也包括局部作用于直腸和陰道的制劑。

研究的內(nèi)容：皮膚毒性試驗(yàn)，刺激試驗(yàn)，致敏試驗(yàn)。局部毒性是指局部用藥后引起的毒性反應(yīng)栓劑、軟膏劑、滴劑、洗劑、搽劑、透皮貼劑、噴霧劑、粉劑（外用）等劑型都必須進(jìn)行藥物的局部毒性試驗(yàn)。

2022/11/306局部毒性試驗(yàn)是為研究局部用藥后2022/12/1

101

第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)2022/11/307第一節(jié)皮膚毒性試2022/12/1

102表皮層真皮乳頭層真皮網(wǎng)織層真皮層第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)2022/11/308表皮層真皮乳頭層真皮網(wǎng)織層真皮層第2022/12/1

103人類不同部位皮膚角化層的差別很大，這些差別影響藥物的經(jīng)皮吸收。足底和手掌的角化層堅(jiān)硬而厚，約

400~600μm位于臂、背、腿和腹部的皮膚僅

8~15μm陰囊皮膚最薄第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)表皮角化層的差別2022/11/309人類不同部位皮膚角化層的差別很大，2022/12/1

104人類不同部位皮膚角化層的差別很大，這些差別影響藥物的經(jīng)皮吸收。足底和手掌的角化層堅(jiān)硬而厚，約

400~600μm位于臂、背、腿和腹部的皮膚僅

8~15μm陰囊皮膚最薄第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)表皮角化層的差別2022/11/3010人類不同部位皮膚角化層的差別很大2022/12/1

105藥物經(jīng)表皮吸收時角質(zhì)層棘層透明層基底層顆粒層基膜真皮層內(nèi)毛細(xì)血管第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)●

藥物經(jīng)皮膚吸收的兩條途徑

(1)通過表皮屏障而被吸收表皮屏障2022/11/3011藥物經(jīng)表皮吸收時角質(zhì)層棘層2022/12/1

106第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)●

藥物經(jīng)皮膚吸收的兩條途徑

(1)通過表皮屏障而被吸收(2)通過汗腺、皮脂腺和毛囊等皮膚附屬器吸收2022/11/3012第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)●藥物經(jīng)2022/12/1

107第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)●

藥物經(jīng)皮膚吸收的兩條途徑

(1)通過表皮屏障而被吸收(2)通過汗腺、皮脂腺和毛囊等皮膚附屬器吸收2022/11/3013第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)●藥物經(jīng)2022/12/1

10812藥物透過表皮進(jìn)入真皮

藥物由真皮進(jìn)入乳頭層毛細(xì)血管第一階段滲透相癥狀第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)第二階段吸收相藥物經(jīng)表皮屏障吸收包括兩相2022/11/301412藥物透過表皮進(jìn)入真皮藥物由2022/12/1

109進(jìn)行皮膚毒性試驗(yàn)時，盡量選擇皮膚解剖及生理與人類較近似的動物，目前多選用家兔、豚鼠或大鼠。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)只有同時在脂、水中易于溶解的藥物，才易通過皮膚進(jìn)入血液。2022/11/3015進(jìn)行皮膚毒性試驗(yàn)時，盡量選擇皮膚2022/12/1

110

皮膚毒性試驗(yàn)是通過外用藥物作用于皮膚，觀察皮膚的吸收程度，來定性和定量地判斷藥物的毒性大小的試驗(yàn)。

第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑的急性毒性試驗(yàn)應(yīng)用于直腸、陰道制劑的急性毒性試驗(yàn)皮膚長期毒性試驗(yàn)2022/11/3016皮膚毒性試驗(yàn)2022/12/1

111

[試驗(yàn)?zāi)康腯

觀察完整皮膚及破損皮膚在一次接觸

外用藥物短期內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。

[試驗(yàn)動物]

家兔2.0~3.0kg，每劑量組4只

豚鼠350~450g，每劑量組10只雌雄各半

大鼠200~300g，每劑量組10只

[試驗(yàn)藥物]

膏劑、液體或固體粉末。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)一2022/11/3017

[試驗(yàn)?zāi)康腯觀察完整2022/12/1

112

[準(zhǔn)備]

去毛:皮膚急性毒性試驗(yàn)一第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)脫毛劑配方：（1）硫化鋇與滑石粉以

4:1混合，加水調(diào)成糊狀.（2）硫化鈉與滑石粉以

3:1混合，加水調(diào)成糊狀.

時間：給藥前24h;部位：背部脊柱兩側(cè)；范圍：體表面積的10%家兔50cm2豚鼠、大鼠20cm22022/11/3018

[準(zhǔn)2022/12/1

113

[準(zhǔn)備]

去毛:皮膚急性毒性試驗(yàn)一第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)

破損皮膚的制作:（1）用無菌手術(shù)刀片的尖端做“井”字劃痕；（2）砂紙打薄

——以滲血為度2022/11/3019

[準(zhǔn)2022/12/1

114

[劑量選擇及分組]

設(shè)三個劑量組（完整皮膚組和破損皮膚組），

組間距,一般以0.65~0.85為宜,

設(shè)賦形劑組或空白對照組。

若藥物劑量超過有效濃度20倍以上，仍未出現(xiàn)異?；蛩劳觯瑒t只設(shè)一個高劑量組。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)一2022/11/3020

[劑2022/12/1

115

[給藥方法]

藥物是膏劑或液體一般不稀釋，可直接試驗(yàn)，若藥物是固體粉末則需用適當(dāng)水或適宜賦形劑（如羊毛脂、凡士林、橄欖油等）混勻，以保證藥物與皮膚良好的接觸。試驗(yàn)時，將藥物均勻地涂敷于動物背部去毛區(qū)，并用無刺激性紗布、膠布加以固定。敷藥物24h后，可用溫水或適當(dāng)溶劑消除殘留的藥物或賦形劑，每日觀察，連續(xù)7~14天。皮膚急性毒性試驗(yàn)一第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)2022/11/3021

[給藥方法]2022/12/1

116

[觀察]

給藥后要注意動物全身中毒表現(xiàn)和死亡情況，包括動物體重、皮膚、毛發(fā)、眼睛和粘膜的變化，呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等變化。若遇有死亡動物則需進(jìn)行尸檢和肉眼觀察，當(dāng)有肉眼可見病變時，則需進(jìn)行病理學(xué)檢查。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)一2022/11/3022

[觀2022/12/1

117

[報告]

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，將數(shù)據(jù)綜合成表格形式，說明實(shí)驗(yàn)開始時各組的動物數(shù)，不同劑量組中各個體動物死亡的時間，出現(xiàn)其它毒性癥狀的動物數(shù)，毒性反應(yīng)的描述和尸檢所見。最后根據(jù)觀察各組動物死亡的累積數(shù)，用相應(yīng)的統(tǒng)計學(xué)方法計算LD50。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮膚急性毒性試驗(yàn)一2022/11/3023

第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)皮2022/12/1

118

[試驗(yàn)?zāi)康腯

觀察受試動物一次滴入或吸入給予

藥物后所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況。

[試驗(yàn)動物]

健康家兔

2.5kg±，每劑量組4只

豚鼠250~300g，每劑量組10只雌雄各半

大鼠250~300g，每劑量組10只

[試驗(yàn)藥物]

液體或粉末劑。第一節(jié)皮膚毒性試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑毒性試驗(yàn)二2022/11/3024

[試驗(yàn)?zāi)康腯觀察受試2022/12/1

119

[劑量選擇及分組]

一般設(shè)三個劑量組,

組間距一般以0.65~0.85為宜，