大腸桿菌的培養(yǎng)和分離教案

實驗1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離【學習目標】1.進行大腸桿菌的擴增，利用液體培養(yǎng)基進行細菌培養(yǎng)的操作。2.進行大腸桿菌的分離，用固體平面培養(yǎng)基進行細菌的化纖培養(yǎng)。3.說明大腸桿菌培養(yǎng)的條件和操作要求的原理?！窘虒W重點】大腸桿菌的劃線分離；大腸桿菌的無菌操作和滅菌技術(shù)；大腸桿菌的特點及實驗室應注意的安全事項?！窘虒W難點】大腸桿菌的劃線分離；大腸桿菌實驗的無菌操作技術(shù)及實驗室安全事項的解讀。【實驗教材分析】本節(jié)內(nèi)容選自浙科版生物選修1第1部分實驗1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)。本次課程主要包括了本次實驗的目的、大腸桿菌的特點、無菌操作和滅菌的方法、儀器設(shè)備和實驗材料、實驗步驟等內(nèi)容。在前一節(jié)介紹了實驗室規(guī)則和生物技術(shù)概況的基礎(chǔ)上，進行具體的實驗操作。并且經(jīng)過生物必修三冊書本的學習，學生已經(jīng)掌握了一定的細菌的相關(guān)知識，并對一些特殊細菌的篩選和鑒別有了一定的了解。故本次實驗教學既是對學生前面學的理論知識的深化，同時也為學生將要學到的分離以尿素為氮源的微生物等內(nèi)容奠定了比較重要的基礎(chǔ)。因此，本節(jié)課起著承前啟后的重要作用?！緦W情分析】本節(jié)課的教授對象是選了選修1這門課的高二學生，在實驗前，學生已經(jīng)學習過了革蘭氏陽性菌與陰性菌的相關(guān)知識，本次實驗主要是學生在掌握細菌的相關(guān)知識后學習大腸桿菌的分離與鑒定，很好地實現(xiàn)了將所學知識與實踐相聯(lián)系，易引起學生的興趣，學生的積極性較高，從而有利于實驗教學的展開。但學生對于實驗原理、實驗方法和實驗技術(shù)等方面還不熟悉，需要教師對此進行詳細的講解，在講解過程中注意運用適宜的教學方法，引導學生將所學知識運用到具體的實驗實踐中。同時，教師需嚴格要求學生在操作上符合實驗室規(guī)范，將實驗操作過程中的注意事項對學生進行逐一說明，保證實驗的有序性與安全性?！緦嶒灲虒W過程】（一）創(chuàng)設(shè)情境，導入新知【教師活動】教師展示飲用水凈化、消毒滅菌、檢測、出品的簡略過程，拋出在檢測這一過程中主要是以某一微生物作為指標來進行檢測，從而引出本次實驗的材料—大腸桿菌（展示圖片）。飲用水這一素材與我們的實際生活相聯(lián)系，有利于吸引學生的興趣?！緦W生活動】觀看PPT，聽講（二）師生對話，構(gòu)建新知【教師活動】拋出“為什么大腸桿菌能夠作為飲用水是否合格的指標呢？”“大腸桿菌是如何被分離的呢？”三個問題，請學生就此三個問題進行思考討論。本環(huán)節(jié)有利于學生明確本實驗材料的特點，明確實驗目的【學生活動】思考，并查看書本，回答：大腸桿菌是革蘭氏陰性菌，兼性厭氧。【教師活動】總結(jié)學生的答案，并對學生的表現(xiàn)做出形成性評價，隨后結(jié)和PPT上呈現(xiàn)大腸桿菌的有關(guān)信息，進行講解。大腸桿菌是革蘭氏陰性菌，兼性厭氧。是人和動物腸道中的正常棲居菌，與人終身相伴。其代謝活動能抑制腸道內(nèi)分解蛋白質(zhì)的微生物生長，減少蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物對人體的危害，還能合成維生素B和K，以及有殺菌作用的大腸桿菌素。正常棲居條件下不致病，但若進入膽囊、膀胱等處可引起炎癥。在環(huán)境衛(wèi)生不良的情況下，常隨糞便散布在周圍環(huán)境中。若在水和食品中檢出此菌，可認為是被糞便污染的指標，從而可能有腸道病原菌的存在。因此，大腸菌群數(shù)大腸菌值常作為飲水和食物（或藥物）的衛(wèi)生學標準。設(shè)疑：同學們，如果我們檢驗自來水大腸桿菌有沒有超標，應該怎么做呢？今天，我們先學習大腸桿菌的擴大培養(yǎng)、分離。【教師活動】講解實驗目的：1.進行大腸桿菌的擴增，利用液體培養(yǎng)基進行細菌培養(yǎng)的操作。2.進行大腸桿菌的分離，用固體平面培養(yǎng)基進行細菌的劃線培養(yǎng)。3.說明大腸桿菌培養(yǎng)的條件和操作要求的原理?！緦W生活動】認真聽講，明確實驗目的，了解本節(jié)課主要的內(nèi)容?！窘處熁顒印繛榱诉_到本次實驗的目的，同學們覺得應該如何做呢？我們應該先做什么，后做什么呢？同學們來設(shè)計下實驗流程。我請同學起來回答?！緦W生活動】認真聽講，分組進行思考討論并設(shè)計實驗流程，學生代表回答老師問題。（三）運用新知，步驟講解【教師活動】根據(jù)大腸桿菌的相關(guān)知識，進行實驗步驟的講解1培養(yǎng)基的選擇同學們來思考下，我們培養(yǎng)細菌通常采用什么培養(yǎng)基？根據(jù)學生的回答指出，本實驗主要采用的是LB培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，伊紅-美藍鑒別培養(yǎng)基進行分離和鑒定。LB培養(yǎng)基的基本配方：蛋白胨1g，酵母提取物，氯化鈉1g，瓊脂粉2g，蒸餾水100mL2.大腸桿菌的擴大培養(yǎng)我們首先選擇LB液體培養(yǎng)基，進行大腸桿菌的擴大培養(yǎng)：首先，挑取1環(huán)大腸桿菌菌種，接種到裝有的三角燒瓶內(nèi)，包扎后置于37℃搖床內(nèi)振蕩培養(yǎng)12h。大腸桿菌的劃線分離倒平板：培養(yǎng)基加熱熔化，待冷至55-60℃時倒平板，每培養(yǎng)皿約15ml，水平放置，凝固成平板。注意：a.無菌操作，在酒精燈火焰旁。b.培養(yǎng)基加熱熔化，待冷至55-60℃時倒平板，溫度過高，會燙傷手或拿不穩(wěn)倒出而造成污染，溫度太低容易重新凝固。劃線分離：主要采用三區(qū)劃線法，形成的菌落由多到少，最后形成單菌落；也可采用稀釋涂布平板法，以獲得單菌落。注意：1）接種環(huán)要在酒精燈外焰進行灼燒滅菌。2）劃線時要讓平板充分冷卻，以防培養(yǎng)基破裂。3）劃線時，動作要輕，以防割裂培養(yǎng)基。斜面接種和菌種保存在酒精燈火焰旁，挑取大腸桿菌單菌落，接種于斜面培養(yǎng)基上，保存下來。注意：在酒精燈旁操作，先對試管口，進行操作?！緦W生活動】有些同學通過預習和課外知識積累，回答：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。認真聽老師的講解，同時做好相關(guān)筆記。思考步驟中為什么這么做，明白操作的原理。（四）課外延伸，小結(jié)新知【教師活動】在上完實驗課呢，同學們有沒有什么問題？解決學生還沒有明白的問題，同時提出以下問題，讓同學們思考。1、在接種操作結(jié)束后是否需要灼燒接種環(huán)？2、操作過程中如何避免被雜菌污染？3、如何判斷培養(yǎng)物是否有雜菌污染？4、實驗結(jié)束后