流感病毒臨床標本的采集方法運輸保存鄭課件

概述流感病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標本的質量，及其保存運輸?shù)拳h(huán)節(jié)多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織概述流感病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標本的質量，1一、采樣對象和時間采樣對象：流感樣病例（沒有服用過抗病毒藥物）、人禽流感待查病例

流感樣病例:發(fā)熱（體溫≥38℃），伴咳嗽或咽痛之一者，而缺乏其它的實驗室確定診斷依據(jù)采集時間：病人發(fā)病后的頭三天一、采樣對象和時間采樣對象：流感樣病例（沒有服用過抗病毒藥物2二、采樣液要求常用的采樣液有：普通肉湯（只用于雞胚，對細胞有毒性），PH7.4-7.6的Hank’s液，Eagel`s培養(yǎng)液或水解乳蛋白溶液采樣液應包含有一定量的蛋白質和抗菌素標本采集后應立即放入適當?shù)牟蓸右褐械蜏乇４娑⒉蓸右阂蟪Ｓ玫牟蓸右河校浩胀ㄈ鉁ㄖ挥糜陔u胚，對細胞有3Eagel`s基礎培養(yǎng)基Eagel`s基礎培養(yǎng)基4

抗生素名稱終濃度慶大霉素0.1mg/ml抗真菌素2Ug/ml采樣液抗生素含量抗生素名稱終濃度慶大霉素0.1mg/ml抗真菌素2Ug5三、臨床標本的采集常用的標本種類：咽拭子鼻拭子漱口液鼻咽吸取物鼻洗液三、臨床標本的采集常用的標本種類：61、咽拭子

用滅菌棉簽（最好用塑料柄、尼龍拭子，因為木頭柄棉拭子會抑制PCR實驗）擦拭雙側咽扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去1、咽拭子7鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎。應在4℃條件下，24小時內運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出，以同一拭子擦拭兩側鼻孔。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。五、臨床標本的運送要求上清液可直接接種或低溫保存對于病毒分離陽性的標本－70℃保存6個月然后，用平皿或燒杯收集洗液操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護患者取坐姿，頭微后仰，用移液管將5ml生理鹽水注入一側鼻孔，囑患者同時發(fā)K音以關閉咽腔。新鮮的標本送至實驗室后，病毒分離標本應盡快進行接種分離，24小時內能進行接種的可置于4℃保存，如未能接種應置-70℃或以下保存先將收集器頭部插入鼻腔，接通負壓，旋轉收集器頭部并緩慢退出。蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。常用的采樣液有：普通肉湯（只用于雞胚，對細胞有毒性），PH7.九、禽流感標本采集的生物安全防護六、臨床標本的處理原則標本采集后應立即放入適當?shù)牟蓸右褐械蜏乇４娑鄶?shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織采咽拭子的器材和容器鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎。采咽拭子的器材和容器82、鼻拭子

將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出，以同一拭子擦拭兩側鼻孔。將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去2、鼻拭子9采鼻拭子的器材和容器采鼻拭子的器材和容器10標本運輸：異地運輸可以采用郵寄或快遞的方法病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。采樣對象：流感樣病例（沒有服用過抗病毒藥物）、人禽流感待查病例上清液可直接接種或低溫保存用10ml生理鹽水漱喉。6的Hank’s液，Eagel`s培養(yǎng)液或水解乳蛋白溶液凍存的標本送到實驗室后，24小時內能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。標本采集后應迅速至于冰上或者4℃以下保存，因為流感病毒對熱很敏感六、臨床標本的處理原則收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次八、臨床標本的的處理原則操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。人禽流感標本的運送、接收和保藏應當符合我國《病原微生物實驗室生物安全管理條例》（國務院424號令）的有關要求。收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎。患者取坐姿，頭微后仰，用移液管將5ml生理鹽水注入一側鼻孔，囑患者同時發(fā)K音以關閉咽腔。蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本Eagel`s基礎培養(yǎng)基

3、鼻咽吸取物

用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。先將收集器頭部插入鼻腔，接通負壓，旋轉收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次

標本運輸：異地運輸可以采用郵寄或快遞的方法3、鼻咽吸取11內有HEPA膜進風道鼻咽吸取裝置出風道內有HEPA膜進風道鼻咽吸取裝置出風道12吸取過程正確錯誤錯誤不要觸摸病人的臉!吸取過程正確錯誤錯誤不要觸摸病人的臉!134、漱口液用10ml生理鹽水漱喉。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。然后，用平皿或燒杯收集洗液4、漱口液145、鼻洗液

患者取坐姿，頭微后仰，用移液管將5ml生理鹽水注入一側鼻孔，囑患者同時發(fā)K音以關閉咽腔。然后讓患者低頭使生理鹽水流出，用平皿或燒杯收集洗液。重復此過程洗兩側鼻孔5、鼻洗液15四、標本收集注意事項操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護采集標本要有一定力度標本采集后應迅速至于冰上或者4℃以下保存，因為流感病毒對熱很敏感標本管上寫明：醫(yī)院名稱，標本號，患者姓名，性別，采樣日期標本采集后盡量在24小時內送到實驗室進行病毒分離。24小時內未能進行病毒分離的標本應放-70℃或以下四、標本收集注意事項操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自16新鮮的臨床采集標本應在4℃條件下，24小時內運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；未能24小時內送至實驗室的，應置-70℃或以下保存凍存的臨床采集標本應在凍存的條件下，低溫送至實驗室五、臨床標本的運送要求新鮮的臨床采集標本五、臨床標本的運送要求17流感病毒臨床標本的采集方法運輸保存鄭課件18流感病毒臨床標本的采集方法運輸保存鄭課件19六、臨床標本的處理原則新鮮的標本送至實驗室后，病毒分離標本應盡快進行接種分離，24小時內能進行接種的可置于4℃保存，如未能接種應置-70℃或以下保存凍存的標本送到實驗室后，24小時內能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。如未能分離的標本應置-70℃或以下保存六、臨床標本的處理原則新鮮的標本送至實驗室后，病毒分離標本應20七、臨床標本的處理方法含聚丙烯纖維的拭子的采集標本:先將含聚丙烯纖維的拭子在管壁反復擠壓后取出鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎。置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。上清液可直接接種或低溫保存

七、臨床標本的處理方法含聚丙烯纖維的拭子的采集標本:先將含聚21含聚丙烯纖維的拭子的采集標本:先將含聚丙烯纖維的拭子在管壁反復擠壓后取出未能24小時內送至實驗室的，應置-70℃或以下保存蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本然后，用平皿或燒杯收集洗液標本運輸：異地運輸可以采用郵寄或快遞的方法應在4℃條件下，24小時內運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；七、臨床標本的處理方法將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去采樣液應包含有一定量的蛋白質和抗菌素肺組織材料：肺組織材料在無菌條件下，用高壓滅菌的乳缽研磨后，用生理鹽水配成20%懸液，2000rpm離心10min，取上清加入抗生素。鼻咽吸取液：用干凈滅菌過的毛細吸管，在無菌條件下反復吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同樣置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。上清液可直接接種或低溫保存六、臨床標本的處理原則六、臨床標本的處理原則6的Hank’s液，Eagel`s培養(yǎng)液或水解乳蛋白溶液七、臨床標本的處理方法漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出，以同一拭子擦拭兩側鼻孔。五、臨床標本的運送要求蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本Eagel`s基礎培養(yǎng)基九、禽流感標本采集的生物安全防護鼻咽吸取液：用干凈滅菌過的毛細吸管，在無菌條件下反復吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同樣置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。上清液可直接接種或低溫保存肺組織材料：肺組織材料在無菌條件下，用高壓滅菌的乳缽研磨后，用生理鹽水配成20%懸液，2000rpm離心10min，取上清加入抗生素。接種細胞或雞胚含聚丙烯纖維的拭子的采集標本:先將含聚丙烯纖維的拭子在管壁反22八、臨床標本的的處理原則

臨床標本處理后，將原始標本分為三份:一份（40％）用于雞胚接種，一份（30％）用于MDCK細胞接種，一份（30％）保存待復核用。對于病毒分離陽性的標本－70℃保存6個月八、臨床標本的的處理原則臨床標本處理后，將原始標23流感病毒株的運輸寄送流感毒株標本的包裝要求病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本直接在塑料管上用油性記號筆寫明病毒的名稱，同時也將病毒標本有關信息填在“流感/人禽流感毒株送檢單”內，送檢單應單獨放在防水的袋子里將裝標本的密封袋放入專用運輸箱內（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔軟物質填充，內襯具吸水和緩沖能力的材料標本運輸：異地運輸可以采用郵寄或快遞的方法流感病毒株的運輸寄送流感毒株標本的包裝要求24九、禽流感標本采集的生物安全防護1．采集人禽流感臨床樣本時，采集人員需要做好個人防護，戴防護口罩、帽子、護目鏡、手套、防護衣、鞋套。2.

人禽流感標本的運送、接收和保藏應當符合我國《病原微生物實驗室生物安全管理條例》（國務院424號令）的有關要求。3．人禽流感臨床標本的處理、分裝在生物安全二級的實驗室里進行，采用生物安全三級防護。4．人禽流感病毒分離、培養(yǎng)、純化，微量中和試驗等實驗必須在生物安全三級（BSL-3級）實驗室里操作。5．臨床標本病毒核酸提取在生物安全二級（BSL-2級）實驗室的二級生物安全柜里進行，采用生物安全三級防護。6．用滅活的抗原進行紅細胞凝集抑制（HI）實驗、RT-PCR病毒核酸檢測可以在生物安全二級（BSL-2級）實驗室里操作。九、禽流感標本采集的生物安全防護1．采集人禽流感臨床樣本時，25謝謝!謝謝!26三、臨床標本的采集常用的標本種類：咽拭子鼻拭子漱口液鼻咽吸取物鼻洗液三、臨床標本的采集常用的標本種類：272、鼻拭子

將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出，以同一拭子擦拭兩側鼻孔。將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去2、鼻拭子28

3、鼻咽吸取物

用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。先將收集器頭部插入鼻腔，接通負壓，旋轉收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次

3、鼻咽吸取物294、漱口液用10ml生理鹽水漱喉。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。然后，用平皿或燒杯收集洗液4、漱口液30六、臨床標本的處理原則新鮮的標本送至實驗室后，病毒分離標本應盡快進行接種分離，24小時內能進行接種的可置于4℃保存，如未能接種應置-70℃或以下保存凍存的標本送到實驗室后，24小時內能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。如未能分離的標本應置-70℃或以下保存六、臨床標本的處理原則新鮮的標本送至實驗室后，病毒分離標本應31鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎。六、臨床標本的處理原則然后，用平皿或燒杯收集洗液收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。凍存的標本送到實驗室后，24小時內能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。Eagel`s基礎培養(yǎng)基Eagel`s基礎培養(yǎng)基然后，用平皿或燒杯收集洗液鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎?；颊呷∽?，頭微后仰，用移液管將5ml生理鹽水注入一側鼻孔，囑患者同時發(fā)K音以關閉咽腔。凍存的標本送到實驗室后，24小時內能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出，以同一拭子擦拭兩側鼻孔。上清液可直接接種或低溫保存如未能分離的標本應置-70℃或以下保存漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織七、臨床標本的處理方法將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去標本采集后應迅速至于冰上或者4℃以下保存，因為流感病毒對熱很敏感漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。直接在塑料管上用油性記號筆寫明病毒的名稱，同時也將病毒標本有關信息填在“流感/人禽流感毒株送檢單”內，送檢單應單獨放在防水的袋子里鼻咽吸取液：用干凈滅菌過的毛細吸管，在無菌條件下反復吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同樣置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。直接在塑料管上用油性記號筆寫明病毒的名稱，同時也將病毒標本有關信息填在“流感/人禽流感毒株送檢單”內，送檢單應單獨放在防水的袋子里漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。未能24小時內送至實驗室的，應置-70℃或以下保存上清液可直接接種或低溫保存上清液可直接接種或低溫保存流感病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標本的質量，及其保存運輸?shù)拳h(huán)節(jié)六、臨床標本的處理原則用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。五、臨床標本的運送要求病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護然后，用平皿或燒杯收集洗液未能24小時內送至實驗室的，應置-70℃或以下保存上清液可直接接種或低溫保存多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織采樣對象：流感樣病例（沒有服用過抗病毒藥物）、人禽流感待查病例收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去流感病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標本的質量，及其保存運輸?shù)拳h(huán)節(jié)鼻咽吸取液：用干凈滅菌過的毛細吸管，在無菌條件下反復吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同樣置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次七、臨床標本的處理方法上清液可直接接種或低溫保存病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。凍存的標本送到實驗室后，24小時內能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。標本管上寫明：醫(yī)院名稱，標本號，患者姓名，性別，采樣日期如未能分離的標本應置-70℃或以下保存未能24小時內送至實驗室的，應置-70℃或以下保存應在4℃條件下，24小時內運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。七、臨床標本的處理方法患者取坐姿，頭微后仰，用移液管將5ml生理鹽水注入一側鼻孔，囑患者同時發(fā)K音以關閉咽腔。九、禽流感標本采集的生物安全防護將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出，以同一拭子擦拭兩側鼻孔。上清液可直接接種或低溫保存凍存的標本送到實驗室后，24小時內能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。七、臨床標本的處理方法漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。上清液可直接接種或低溫保存上清液可直接接種或低溫保存多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出，以同一拭子擦拭兩側鼻孔。蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本應在4℃條件下，24小時內運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；含聚丙烯纖維的拭子的采集標本:先將含聚丙烯纖維的拭子在管壁反復擠壓后取出未能24小時內送至實驗室的，應置-70℃或以下保存操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護對于病毒分離陽性的標本－70℃保存6個月24小時內未能進行病毒分離的標本應放-70℃或以下應在4℃條件下，24小時內運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；標本采集后應迅速至于冰上或者4℃以下保存，因為流感病毒對熱很敏感收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護先將收集器頭部插入鼻腔，接通負壓，旋轉收集器頭部并緩慢退出。Eagel`s基礎培養(yǎng)基用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。新鮮的標本送至實驗室后，病毒分離標本應盡快進行接種分離，24小時內能進行接種的可置于4℃保存，如未能接種應置-70℃或以下保存收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去七、臨床標本的處理方法上清液可直接接種或低溫保存6的Hank’s液，Eagel`s培養(yǎng)液或水解乳蛋白溶液收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織標本運輸：異地運輸可以采用郵寄或快遞的方法對于病毒分離陽性的標本－70℃保存6個月應在4℃條件下，24小時內運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；新鮮的標本送至實驗室后，病毒分離標本應盡快進行接種分離，24小時內能進行接種的可置于4℃保存，如未能接種應置-70℃或以下保存蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本六、臨床標本的處理原則上清液可直接接種或低溫保存肺組織材料：肺組織材料在無菌條件下，用高壓滅菌的乳缽研磨后，用生理鹽水配成20%懸液，2000rpm離心10min，取上清加入抗生素。上清液可直接接種或低溫保存然后，用平皿或燒杯收集洗液常用的采樣液有：普通肉湯（只用于雞胚，對細胞有毒性），PH7.六、臨床標本的處理原則Eagel`s基礎培養(yǎng)基對于病毒分離陽性的標本－70℃保存6個月標本采集后應迅速至于冰上或者4℃以下保存，因為流感病毒對熱很敏感操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次6．用滅活的抗原進行紅細胞凝集抑制（HI）實驗、RT-PCR病毒核酸檢測可以在生物安全二級（BSL-2級）實驗室里操作。鼻咽吸取液：用干凈滅菌過的毛細吸管，在無菌條件下反復吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同樣置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。然后，用平皿或燒杯收集洗液應在4℃條件下，24小時內運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；Eagel`s基礎培養(yǎng)基七、臨床標本的處理方法多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織6．用滅活的抗原進行紅細胞凝集抑制（HI）實驗、RT-PCR病毒核酸檢測可以在生物安全二級（BSL-2級）實驗室里操作。用10ml生理鹽水漱喉。應在4℃條件下，24小時內運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；五、臨床標本的運送要求應在4℃條件下，24小時內運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；上清液可直接接種或低溫保存鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎。多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織鼻咽吸取液：用干凈滅菌過的毛細吸管，在無菌條件下反復吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同樣置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。上清液可直接接種或低溫保存肺組織材料：肺組織材料在無菌條件下，用高壓滅菌的乳缽研磨后，用生理鹽水配成20%懸液，2000rpm離心10min，取上清加入抗生素。接種細胞或雞胚鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎。多數(shù)標本取自患者上呼32概述流感病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標本的質量，及其保存運輸?shù)拳h(huán)節(jié)多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織概述流感病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標本的質量，33一、采樣對象和時間采樣對象：流感樣病例（沒有服用過抗病毒藥物）、人禽流感待查病例

流感樣病例:發(fā)熱（體溫≥38℃），伴咳嗽或咽痛之一者，而缺乏其它的實驗室確定診斷依據(jù)采集時間：病人發(fā)病后的頭三天一、采樣對象和時間采樣對象：流感樣病例（沒有服用過抗病毒藥物34二、采樣液要求常用的采樣液有：普通肉湯（只用于雞胚，對細胞有毒性），PH7.4-7.6的Hank’s液，Eagel`s培養(yǎng)液或水解乳蛋白溶液采樣液應包含有一定量的蛋白質和抗菌素標本采集后應立即放入適當?shù)牟蓸右褐械蜏乇４娑?、采樣液要求常用的采樣液有：普通肉湯（只用于雞胚，對細胞有35Eagel`s基礎培養(yǎng)基Eagel`s基礎培養(yǎng)基36

抗生素名稱終濃度慶大霉素0.1mg/ml抗真菌素2Ug/ml采樣液抗生素含量抗生素名稱終濃度慶大霉素0.1mg/ml抗真菌素2Ug37三、臨床標本的采集常用的標本種類：咽拭子鼻拭子漱口液鼻咽吸取物鼻洗液三、臨床標本的采集常用的標本種類：381、咽拭子

用滅菌棉簽（最好用塑料柄、尼龍拭子，因為木頭柄棉拭子會抑制PCR實驗）擦拭雙側咽扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去1、咽拭子39鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎。應在4℃條件下，24小時內運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出，以同一拭子擦拭兩側鼻孔。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。五、臨床標本的運送要求上清液可直接接種或低溫保存對于病毒分離陽性的標本－70℃保存6個月然后，用平皿或燒杯收集洗液操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護患者取坐姿，頭微后仰，用移液管將5ml生理鹽水注入一側鼻孔，囑患者同時發(fā)K音以關閉咽腔。新鮮的標本送至實驗室后，病毒分離標本應盡快進行接種分離，24小時內能進行接種的可置于4℃保存，如未能接種應置-70℃或以下保存先將收集器頭部插入鼻腔，接通負壓，旋轉收集器頭部并緩慢退出。蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。常用的采樣液有：普通肉湯（只用于雞胚，對細胞有毒性），PH7.九、禽流感標本采集的生物安全防護六、臨床標本的處理原則標本采集后應立即放入適當?shù)牟蓸右褐械蜏乇４娑鄶?shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織采咽拭子的器材和容器鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎。采咽拭子的器材和容器402、鼻拭子

將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出，以同一拭子擦拭兩側鼻孔。將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去2、鼻拭子41采鼻拭子的器材和容器采鼻拭子的器材和容器42標本運輸：異地運輸可以采用郵寄或快遞的方法病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。采樣對象：流感樣病例（沒有服用過抗病毒藥物）、人禽流感待查病例上清液可直接接種或低溫保存用10ml生理鹽水漱喉。6的Hank’s液，Eagel`s培養(yǎng)液或水解乳蛋白溶液凍存的標本送到實驗室后，24小時內能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。標本采集后應迅速至于冰上或者4℃以下保存，因為流感病毒對熱很敏感六、臨床標本的處理原則收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次八、臨床標本的的處理原則操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。人禽流感標本的運送、接收和保藏應當符合我國《病原微生物實驗室生物安全管理條例》（國務院424號令）的有關要求。收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎。患者取坐姿，頭微后仰，用移液管將5ml生理鹽水注入一側鼻孔，囑患者同時發(fā)K音以關閉咽腔。蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本Eagel`s基礎培養(yǎng)基

3、鼻咽吸取物

用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。先將收集器頭部插入鼻腔，接通負壓，旋轉收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次

標本運輸：異地運輸可以采用郵寄或快遞的方法3、鼻咽吸取43內有HEPA膜進風道鼻咽吸取裝置出風道內有HEPA膜進風道鼻咽吸取裝置出風道44吸取過程正確錯誤錯誤不要觸摸病人的臉!吸取過程正確錯誤錯誤不要觸摸病人的臉!454、漱口液用10ml生理鹽水漱喉。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。然后，用平皿或燒杯收集洗液4、漱口液465、鼻洗液

患者取坐姿，頭微后仰，用移液管將5ml生理鹽水注入一側鼻孔，囑患者同時發(fā)K音以關閉咽腔。然后讓患者低頭使生理鹽水流出，用平皿或燒杯收集洗液。重復此過程洗兩側鼻孔5、鼻洗液47四、標本收集注意事項操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護采集標本要有一定力度標本采集后應迅速至于冰上或者4℃以下保存，因為流感病毒對熱很敏感標本管上寫明：醫(yī)院名稱，標本號，患者姓名，性別，采樣日期標本采集后盡量在24小時內送到實驗室進行病毒分離。24小時內未能進行病毒分離的標本應放-70℃或以下四、標本收集注意事項操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自48新鮮的臨床采集標本應在4℃條件下，24小時內運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；未能24小時內送至實驗室的，應置-70℃或以下保存凍存的臨床采集標本應在凍存的條件下，低溫送至實驗室五、臨床標本的運送要求新鮮的臨床采集標本五、臨床標本的運送要求49流感病毒臨床標本的采集方法運輸保存鄭課件50流感病毒臨床標本的采集方法運輸保存鄭課件51六、臨床標本的處理原則新鮮的標本送至實驗室后，病毒分離標本應盡快進行接種分離，24小時內能進行接種的可置于4℃保存，如未能接種應置-70℃或以下保存凍存的標本送到實驗室后，24小時內能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。如未能分離的標本應置-70℃或以下保存六、臨床標本的處理原則新鮮的標本送至實驗室后，病毒分離標本應52七、臨床標本的處理方法含聚丙烯纖維的拭子的采集標本:先將含聚丙烯纖維的拭子在管壁反復擠壓后取出鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎。置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。上清液可直接接種或低溫保存

七、臨床標本的處理方法含聚丙烯纖維的拭子的采集標本:先將含聚53含聚丙烯纖維的拭子的采集標本:先將含聚丙烯纖維的拭子在管壁反復擠壓后取出未能24小時內送至實驗室的，應置-70℃或以下保存蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本然后，用平皿或燒杯收集洗液標本運輸：異地運輸可以采用郵寄或快遞的方法應在4℃條件下，24小時內運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；七、臨床標本的處理方法將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去采樣液應包含有一定量的蛋白質和抗菌素肺組織材料：肺組織材料在無菌條件下，用高壓滅菌的乳缽研磨后，用生理鹽水配成20%懸液，2000rpm離心10min，取上清加入抗生素。鼻咽吸取液：用干凈滅菌過的毛細吸管，在無菌條件下反復吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同樣置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。上清液可直接接種或低溫保存六、臨床標本的處理原則六、臨床標本的處理原則6的Hank’s液，Eagel`s培養(yǎng)液或水解乳蛋白溶液七、臨床標本的處理方法漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出，以同一拭子擦拭兩側鼻孔。五、臨床標本的運送要求蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本Eagel`s基礎培養(yǎng)基九、禽流感標本采集的生物安全防護鼻咽吸取液：用干凈滅菌過的毛細吸管，在無菌條件下反復吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同樣置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。上清液可直接接種或低溫保存肺組織材料：肺組織材料在無菌條件下，用高壓滅菌的乳缽研磨后，用生理鹽水配成20%懸液，2000rpm離心10min，取上清加入抗生素。接種細胞或雞胚含聚丙烯纖維的拭子的采集標本:先將含聚丙烯纖維的拭子在管壁反54八、臨床標本的的處理原則

臨床標本處理后，將原始標本分為三份:一份（40％）用于雞胚接種，一份（30％）用于MDCK細胞接種，一份（30％）保存待復核用。對于病毒分離陽性的標本－70℃保存6個月八、臨床標本的的處理原則臨床標本處理后，將原始標55流感病毒株的運輸寄送流感毒株標本的包裝要求病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本直接在塑料管上用油性記號筆寫明病毒的名稱，同時也將病毒標本有關信息填在“流感/人禽流感毒株送檢單”內，送檢單應單獨放在防水的袋子里將裝標本的密封袋放入專用運輸箱內（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔軟物質填充，內襯具吸水和緩沖能力的材料標本運輸：異地運輸可以采用郵寄或快遞的方法流感病毒株的運輸寄送流感毒株標本的包裝要求56九、禽流感標本采集的生物安全防護1．采集人禽流感臨床樣本時，采集人員需要做好個人防護，戴防護口罩、帽子、護目鏡、手套、防護衣、鞋套。2.

人禽流感標本的運送、接收和保藏應當符合我國《病原微生物實驗室生物安全管理條例》（國務院424號令）的有關要求。3．人禽流感臨床標本的處理、分裝在生物安全二級的實驗室里進行，采用生物安全三級防護。4．人禽流感病毒分離、培養(yǎng)、純化，微量中和試驗等實驗必須在生物安全三級（BSL-3級）實驗室里操作。5．臨床標本病毒核酸提取在生物安全二級（BSL-2級）實驗室的二級生物安全柜里進行，采用生物安全三級防護。6．用滅活的抗原進行紅細胞凝集抑制（HI）實驗、RT-PCR病毒核酸檢測可以在生物安全二級（BSL-2級）實驗室里操作。九、禽流感標本采集的生物安全防護1．采集人禽流感臨床樣本時，57謝謝!謝謝!58三、臨床標本的采集常用的標本種類：咽拭子鼻拭子漱口液鼻咽吸取物鼻洗液三、臨床標本的采集常用的標本種類：592、鼻拭子

將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出，以同一拭子擦拭兩側鼻孔。將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去2、鼻拭子60

3、鼻咽吸取物

用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。先將收集器頭部插入鼻腔，接通負壓，旋轉收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次

3、鼻咽吸取物614、漱口液用10ml生理鹽水漱喉。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。然后，用平皿或燒杯收集洗液4、漱口液62六、臨床標本的處理原則新鮮的標本送至實驗室后，病毒分離標本應盡快進行接種分離，24小時內能進行接種的可置于4℃保存，如未能接種應置-70℃或以下保存凍存的標本送到實驗室后，24小時內能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。如未能分離的標本應置-70℃或以下保存六、臨床標本的處理原則新鮮的標本送至實驗室后，病毒分離標本應63鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎。六、臨床標本的處理原則然后，用平皿或燒杯收集洗液收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。凍存的標本送到實驗室后，24小時內能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。Eagel`s基礎培養(yǎng)基Eagel`s基礎培養(yǎng)基然后，用平皿或燒杯收集洗液鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎?；颊呷∽?，頭微后仰，用移液管將5ml生理鹽水注入一側鼻孔，囑患者同時發(fā)K音以關閉咽腔。凍存的標本送到實驗室后，24小時內能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出，以同一拭子擦拭兩側鼻孔。上清液可直接接種或低溫保存如未能分離的標本應置-70℃或以下保存漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織七、臨床標本的處理方法將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去標本采集后應迅速至于冰上或者4℃以下保存，因為流感病毒對熱很敏感漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。直接在塑料管上用油性記號筆寫明病毒的名稱，同時也將病毒標本有關信息填在“流感/人禽流感毒株送檢單”內，送檢單應單獨放在防水的袋子里鼻咽吸取液：用干凈滅菌過的毛細吸管，在無菌條件下反復吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同樣置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。直接在塑料管上用油性記號筆寫明病毒的名稱，同時也將病毒標本有關信息填在“流感/人禽流感毒株送檢單”內，送檢單應單獨放在防水的袋子里漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。未能24小時內送至實驗室的，應置-70℃或以下保存上清液可直接接種或低溫保存上清液可直接接種或低溫保存流感病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標本的質量，及其保存運輸?shù)拳h(huán)節(jié)六、臨床標本的處理原則用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。五、臨床標本的運送要求病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護然后，用平皿或燒杯收集洗液未能24小時內送至實驗室的，應置-70℃或以下保存上清液可直接接種或低溫保存多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織采樣對象：流感樣病例（沒有服用過抗病毒藥物）、人禽流感待查病例收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去流感病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標本的質量，及其保存運輸?shù)拳h(huán)節(jié)鼻咽吸取液：用干凈滅菌過的毛細吸管，在無菌條件下反復吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同樣置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次七、臨床標本的處理方法上清液可直接接種或低溫保存病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。凍存的標本送到實驗室后，24小時內能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。標本管上寫明：醫(yī)院名稱，標本號，患者姓名，性別，采樣日期如未能分離的標本應置-70℃或以下保存未能24小時內送至實驗室的，應置-70℃或以下保存應在4℃條件下，24小時內運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料管里，擰緊。七、臨床標本的處理方法患者取坐姿，頭微后仰，用移液管將5ml生理鹽水注入一側鼻孔，囑患者同時發(fā)K音以關閉咽腔。九、禽流感標本采集的生物安全防護將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出，以同一拭子擦拭兩側鼻孔。上清液可直接接種或低溫保存凍存的標本送到實驗室后，24小時內能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。七、臨床標本的處理方法漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。上清液可直接接種或低溫保存上清液可直接接種或低溫保存多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉動。多