乙肝表面抗原測(cè)定

乙肝表面抗原測(cè)定組員:王安娜、李婷玉、羅夢(mèng)嬌、翁博文第一頁(yè)，共三十五頁(yè)。綜述乙型肝炎病毒：機(jī)體感染HBV后血清中首先出現(xiàn)的標(biāo)志物，可作為乙肝的早期診斷和普查HBsAg無(wú)傳染源性而有免疫原性，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗-HBs通過(guò)血液檢測(cè)是唯一檢測(cè)是否感染乙肝病毒的唯一途徑乙肝病毒是通過(guò)血液傳播，主要通過(guò)母嬰，血液和性傳播。日常生活和工作接觸不會(huì)傳播乙肝病毒。如果HBsAg、HBeAg和抗HBc三項(xiàng)陽(yáng)性（即為大三陽(yáng)），其血液就有高度傳染性第二頁(yè)，共三十五頁(yè)。凝集反應(yīng)第三頁(yè)，共三十五頁(yè)。2.間接凝集反應(yīng)：反向間接凝集基本原理：將抗體致敏的紅細(xì)胞與樣本中相應(yīng)抗原作血凝試驗(yàn)，觀察紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，用以判斷樣本中相應(yīng)抗原的有無(wú)及其效價(jià)。凝集反應(yīng)第四頁(yè)，共三十五頁(yè)。3.協(xié)同凝集反應(yīng)基本原理：以金黃色葡萄球菌為載體；將特特異性抗體先結(jié)合至金黃色葡萄球菌表面；其Fab段游離與菌體表面，遇到相應(yīng)抗原時(shí)與之結(jié)合；即可導(dǎo)致金黃色葡萄球菌凝集成塊，稱為協(xié)同凝集試驗(yàn)。凝集反應(yīng)第五頁(yè)，共三十五頁(yè)。沉淀反應(yīng)第六頁(yè)，共三十五頁(yè)。沉淀反應(yīng)可溶性抗原（如細(xì)菌浸出液、細(xì)胞裂解上清液及血清蛋白等）與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，在電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)。參與沉淀反應(yīng)的抗原稱為：沉淀原參與沉淀反應(yīng)的抗體稱為：沉淀素沉淀反應(yīng)第七頁(yè)，共三十五頁(yè)。凝膠沉淀試驗(yàn)單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)：抗原或抗體這兩種成分中只有一種擴(kuò)散，將已知抗體與瓊脂混合，將抗原置于凝膠孔中，抗原則呈輻射狀擴(kuò)散，在孔的周圍與抗體結(jié)合，在比例合適的地方形成肉眼可見(jiàn)的沉淀環(huán)。當(dāng)抗體的濃度一定時(shí)，抗原的濃度與形成沉淀環(huán)的直徑成正比。雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)：雙向免疫擴(kuò)散是指抗原和抗體在同一凝膠內(nèi)部擴(kuò)散，彼此相遇后形成特異性的沉淀線。該反應(yīng)是將抗原和抗體加入同一凝膠中兩個(gè)相隔一定間距的小孔內(nèi)，使兩者進(jìn)行相互擴(kuò)散。當(dāng)抗原和抗體濃度之比相適宜時(shí)，彼此相遇形成一白色弧型沉淀線。沉淀反應(yīng)第八頁(yè)，共三十五頁(yè)。免疫電泳技術(shù)對(duì)流免疫電泳：雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)+電泳火箭免疫電泳：?jiǎn)蜗颦傊瑪U(kuò)散試驗(yàn)+電泳免疫電泳：雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)+區(qū)帶電泳沉淀反應(yīng)第九頁(yè)，共三十五頁(yè)。酶標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)第十頁(yè)，共三十五頁(yè)。酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法簡(jiǎn)稱酶聯(lián)免疫法，或者ELISA法。是固相酶免儀測(cè)定中最具代表性的一種既可檢測(cè)抗原又可檢測(cè)抗體3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體②酶標(biāo)記的抗原或抗體③酶作用的底物第十一頁(yè)，共三十五頁(yè)。雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法基本原理：將已知抗體包被到固相載體上，使待測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗原與抗體結(jié)合，然后再與酶標(biāo)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，洗去多余未結(jié)和成分，加底物后的顯色，根據(jù)顯色反應(yīng)的強(qiáng)度確定待檢抗原的含量。第十二頁(yè)，共三十五頁(yè)。2.雙位點(diǎn)一步法基本原理：在雙抗體夾心法基礎(chǔ)上使用針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體，分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體。測(cè)定時(shí)將待檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體同時(shí)加入進(jìn)行反應(yīng)，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，洗滌后，即可加入底物，顯色后進(jìn)行抗原的定性或定量測(cè)定。酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法第十三頁(yè)，共三十五頁(yè)。3.競(jìng)爭(zhēng)法基本原理：酶標(biāo)抗原和待檢抗原對(duì)固相抗體具有相同的結(jié)合力，在同一反應(yīng)體系中兩者競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合固相抗體。若將固相抗體和酶標(biāo)抗原固定限量，且前者的結(jié)合位點(diǎn)少于酶標(biāo)和非酶標(biāo)抗原的分子數(shù)量和，免疫反應(yīng)后，結(jié)合與固相酶標(biāo)抗原量與標(biāo)本中待檢抗原含量成反比。酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法第十四頁(yè)，共三十五頁(yè)。熒光免疫分析技術(shù)第十五頁(yè)，共三十五頁(yè)。熒光免疫顯微技術(shù)用熒光素標(biāo)記抗體；與特異性抗原作用；除去游離的熒光抗體，借助顯微鏡觀察；檢測(cè)固定組織上的相遇抗原或者血清中的相應(yīng)抗體。第十六頁(yè)，共三十五頁(yè)。1.直接法基本原理：將特異性熒光抗體直接滴加于待檢抗原標(biāo)本上，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)，檢測(cè)未知抗原。熒光免疫顯微技術(shù)第十七頁(yè)，共三十五頁(yè)。2.間接法基本原理：用熒光素標(biāo)記抗球蛋白抗體，鑒定未知抗原或未知抗體；先是未標(biāo)記抗體（一抗）與標(biāo)本中的抗原反應(yīng)；再用已標(biāo)記的二抗與一抗反應(yīng)；通過(guò)觀察熒光現(xiàn)象，從而達(dá)到檢測(cè)未知抗原或抗體的目的。熒光免疫顯微技術(shù)第十八頁(yè)，共三十五頁(yè)。3.補(bǔ)體結(jié)合法基本原理：利用補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)的原理，用熒光素標(biāo)記抗補(bǔ)體的抗體，測(cè)定未知抗原或抗體先是標(biāo)本中的抗原與抗體反應(yīng)形成抗原-抗體復(fù)合物后，加入補(bǔ)體與之結(jié)合。再加上抗補(bǔ)體的熒光素標(biāo)記抗體，通過(guò)熒光現(xiàn)象檢測(cè)抗原或抗體熒光免疫顯微技術(shù)第十九頁(yè)，共三十五頁(yè)。放射免疫技術(shù)第二十頁(yè)，共三十五頁(yè)。放射免疫基本原理：標(biāo)記抗原（Ag*）和非標(biāo)記抗原（Ag）對(duì)特異性抗體（Ab）的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合反應(yīng)第二十一頁(yè)，共三十五頁(yè)。免疫放射基本原理：以過(guò)量的放射性核素標(biāo)記抗體與待測(cè)抗原進(jìn)行的非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合反應(yīng)；待充分反應(yīng)后，除去游離的標(biāo)記抗體；Ag-Ab*復(fù)合物的放射性強(qiáng)度與待測(cè)抗原呈正比關(guān)系。第二十二頁(yè)，共三十五頁(yè)。免疫放射技術(shù)類型1、單位點(diǎn)IRMA過(guò)量標(biāo)記抗體與待測(cè)抗原反應(yīng)，形成抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合體反應(yīng)平衡后分離剩余的標(biāo)記抗體測(cè)定上清液的放射量（放射強(qiáng)度與待測(cè)抗原的量呈正比關(guān)系）2、雙位點(diǎn)IRMA（雙抗原夾心法）固相抗體與待測(cè)抗原結(jié)合，形成固相抗體-待測(cè)抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物分離游離的標(biāo)記抗體，測(cè)定固相上的放射性強(qiáng)度第二十三頁(yè)，共三十五頁(yè)。金標(biāo)記免疫技術(shù)第二十四頁(yè)，共三十五頁(yè)。斑點(diǎn)免疫金層析試驗(yàn)免疫金測(cè)試區(qū)：特異抗體參照區(qū)：抗免疫金抗體第二十五頁(yè)，共三十五頁(yè)。發(fā)光免疫技術(shù)第二十六頁(yè)，共三十五頁(yè)?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定基本原理用參與催化某一化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的酶來(lái)標(biāo)記抗原或抗體與固相化的抗體或抗原試劑反應(yīng)形成固相包被抗體-待測(cè)抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物洗滌后加入發(fā)光底物，酶催化和分解底物發(fā)光傳送至計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)計(jì)算出測(cè)定物的濃度發(fā)光免疫技術(shù)第二十七頁(yè)，共三十五頁(yè)?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定發(fā)光免疫技術(shù)第二十八頁(yè)，共三十五頁(yè)。化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定基本原理用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體（化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記物）；與待測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原、磁顆粒性的抗原或抗體反應(yīng)；通過(guò)磁場(chǎng)把結(jié)合狀態(tài)（沉淀部分）和游離狀態(tài)的化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記物分離開(kāi)來(lái)；加入發(fā)光促進(jìn)劑進(jìn)行發(fā)光反應(yīng)；通過(guò)對(duì)發(fā)光強(qiáng)度的檢測(cè)進(jìn)行定量或定性檢測(cè)。發(fā)光免疫技術(shù)第二十九頁(yè)，共三十五頁(yè)。電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定是電化學(xué)發(fā)光和免疫測(cè)定相結(jié)合的產(chǎn)物。發(fā)光免疫技術(shù)第三十頁(yè)，共三十五頁(yè)。新技術(shù)第三十一頁(yè)，共三十五頁(yè)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR（FQ-PCR）

FQ-PCR是一種實(shí)時(shí)定量檢測(cè)技術(shù),融匯了PCR的靈敏性、DNA雜交的特異性和光譜技術(shù)的精確定量等優(yōu)點(diǎn)?；驹硎抢肨aqDNA聚合酶的5'-3'外切核酸酶活性,在擴(kuò)增的同時(shí)降解雜交于擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)的探針,使連接于雜交探針的熒光淬滅基團(tuán)和熒光發(fā)射基團(tuán)分離而產(chǎn)生熒光,因此熒光強(qiáng)度的變化能反映擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化。

第三十二頁(yè)，共三十五頁(yè)?；蛐酒蛐酒墙鼛啄晟茖W(xué)研究領(lǐng)域的一項(xiàng)新檢測(cè)技術(shù)，它是指固定基質(zhì)上集成各種可以作為受體的生物信息，利用受體與連接物間的反應(yīng)來(lái)進(jìn)行生物學(xué)的檢測(cè)。主要包括蛋白芯片和基因芯片。蛋白芯片是將位置和結(jié)構(gòu)已知的大量蛋白、多肽分子、酶、抗原、抗體按預(yù)先設(shè)計(jì)好的方式固定于滴定板、濾膜和載玻片等各種載體上組成密集的分子排列，當(dāng)熒光、免疫金等標(biāo)記的靶分子與芯片上的探針?lè)肿咏Y(jié)合后，通過(guò)一些定量檢測(cè)方法對(duì)標(biāo)記信號(hào)的強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)，從而判斷樣品中的靶分子的數(shù)量，達(dá)到一次實(shí)驗(yàn)同時(shí)檢測(cè)多種生物樣品的目的。第三十三頁(yè)，共三十五頁(yè)。微粒子酶免疫分析(MEIA)

MEIA檢測(cè)HBsAg是目前世界上檢測(cè)乙型肝炎病毒標(biāo)志物的金標(biāo)準(zhǔn)，采用順磁性微粒作為固相載體，用穩(wěn)定的4-甲基磷酸傘型酮(MUP)測(cè)出熒光發(fā)光的強(qiáng)度來(lái)檢測(cè)被測(cè)物的濃度，對(duì)HBsAg檢測(cè)的靈敏度達(dá)0.17~0.2

ng/ml。它不但靈敏度高且抗干擾能力強(qiáng)，重復(fù)性好，并可單份檢測(cè)，可檢出人群中低濃度和自然感染獲得的乙型肝炎病毒核心抗體.因此認(rèn)為MEI法對(duì)血清HBV標(biāo)志物的檢出陽(yáng)性率高于ELISA法,MEIA比ELISA自動(dòng)化程度高，對(duì)病情可做動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。第三十四頁(yè)，共三十五頁(yè)。內(nèi)容梗概乙肝表面抗原測(cè)定。組員:王安娜、李婷玉、羅夢(mèng)嬌、翁博文。機(jī)體感染HBV后血清中首先出現(xiàn)的標(biāo)志物，可作為乙肝的早期診斷和普查。通過(guò)血液檢測(cè)是唯一檢測(cè)是否感染乙肝病毒的唯一途徑。2.間接凝集反應(yīng)：反向間接凝集。其Fab段游離與菌體表面，遇到相應(yīng)抗原時(shí)與之結(jié)合。參與沉淀反應(yīng)的抗原稱為：沉淀原。當(dāng)抗體的濃度一定時(shí)，抗原的濃度與形成沉淀環(huán)的直徑成正比。簡(jiǎn)稱酶聯(lián)免疫法，或者ELISA法。既可檢測(cè)抗原又可檢測(cè)抗體。檢測(cè)固定組織上的相遇抗原或者血清中的相應(yīng)抗體。用熒光素標(biāo)記抗球蛋白抗體，鑒定未知抗原或未知抗體。再加上抗補(bǔ)體的熒光素標(biāo)記抗體，通過(guò)熒光現(xiàn)象檢測(cè)抗原或抗體。以過(guò)量的放射性核素標(biāo)記抗體與待測(cè)抗原進(jìn)